卵巢上皮性肿瘤中AQP-1的表达及临床意义.doc

卵巢上皮性肿瘤中AQP-1的表达及临床意义【摘要】目的研究卵巢癌中水通道蛋白1（AQP1）的表达及临床意义。方法卵巢上皮性癌组38例；卵巢交界性上皮性肿瘤组12例；卵巢良性上皮性肿瘤组9例；正常卵巢组织7例为对照(正常组)。免疫组织化学(SP)进行染色。将AQP1的表达与卵巢上皮性肿瘤的关系作出研究。结果1）在细胞的细胞浆内及血管内皮细胞中表达阳性。卵巢上皮性癌中78.95%及卵巢交界性肿瘤中66.67%，显著高于卵巢良性肿瘤33.33%和正常卵巢组织28.57%的表达率，差异有显著性（P0.05）；2）卵巢癌有腹水者其AQP1表达率水平明显高于无腹水量者，差异有显著性(P100ml）31例。患者腹水量为开腹后立即吸取，且所有患者术前未进行任何治疗，无并发症。患者年龄3479岁，平均年龄56岁。上述标本，连续切片4μm厚，HE染色，病理证实。1.2 方法 免疫组化 免疫组织化学(SP)法进行染色。以PBS替代一抗作为阴性对照，以已知AQP1强烈表达的乳腺癌标本做阳性对照。1.2.1 具体方法 1）载玻片准备；2）切片脱蜡；3）抗原修复；4）阻断内源性过氧化物酶的活性；5）滴加一抗，兔抗人AQP1多克隆抗体；6）加生物素标记的第二抗体；7）滴加辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素溶液；8）DAB溶液显色510分钟；9）中性树脂胶封片；10）苏木精复染。1.2.2 阳性结果判定 在肿瘤细胞的细胞质或细胞膜内出现棕黄色颗粒者作为AQP1阳性细胞，无着色为阴性细胞。1.3 统计学分析1.3.1 AQP1结果的判定 以阳性细胞百分率进行评估。随机取4个视野,每个视野计数100个肿瘤细胞,计数400个肿瘤细胞中染色阳性细胞数,阳性细胞数10%为表达阳性；10%为表达阴性。表达强度以阳性细胞的百分率来划分:无阳性着色或阳性细胞10%细胞为阴性(-),60%为强阳性(+)。1.3.2 肿瘤微血管密度（MVD）计数 微血管密度的判定：染成棕色的单个血管内皮细胞或细胞簇，大于8个内皮细胞形成的管腔不记数。寻找5个微血管高密度区，然后在200400倍镜下记数计算微血管密度，以5个区域的均值为该肿瘤的MVD值，微血管数取最高值。 采用SPSS 11.0统计软件包进行统计分析。采用fisher确切概率法，χ2检验和t检验对相应资料进行分析,取a=0.05为检验水准。2 结果2.1 AQP1在卵巢上皮性肿瘤中的表达 AQP1在卵巢上皮癌中表达阳性率为78.95%，交界性上皮肿瘤中为66.67%，良性肿瘤为33.33%,正常卵巢为28.57%。卵巢上皮性癌及交界性肿瘤表达率，显著高于良性肿瘤和正常组织，差异有显著性（P0.05）。2.2 AQP1在不同临床病理特征卵巢癌中的表达 有腹水者明显高于无腹水量者，差异有显著性(P0.05)。2.3 AQP1与肿瘤微血管密度（MVD）的关系 CD34标记显示：AQP1强阳性表达的组织MVD明显大于弱阳性表达的组织(P0.01)及阴性组织(P0.05)，中阳性明显低于强阳性(P0.01)；有腹水的明显多于无腹水的(P0.05)；证明MVD值与AQP1表达上调有关。3 讨论3.1 水在人体的重要作用 水是活细胞的主要组成部分。水占人体总重量的70%，其中55%在细胞内，45%在细胞外，细胞内外一切生命活动，细胞的生化反应都是在水的微环境中进行的，并几乎都有水的参与。水是细胞和细胞间隙的主要成份，细胞内外一切生命活动都是在水的微环境中进行。因此，水对于人体和细胞的重要性不言而喻，水分子跨膜运输的实现，是生命科学中的一个重要课题。水通道蛋白（aquaporins,AQPs）是对水专一的具有高度选择性的糖蛋白,普遍存在于动植物及微生物中。大量研究证实,恶性肿瘤发生和生长过程中,其生命活动旺盛,新陈代谢异常活跃,对水的需求也将增加,细胞内外渗透压的变化频率加快,水通道对肿瘤细胞和肿瘤组织的生存非常重要。3.2 AQP1在卵巢上皮性肿瘤中的表达的关系 有初步的证据说明AQP具有致癌特性，认为AQP全长cDNA的异位表达引起许多表现型的改变, 而引起肿瘤的发生2。本实验研究发现：AQP1在正常卵巢组织中无表达或在细胞浆中表达很微弱，在肿瘤细胞的细胞浆内及血管内皮细胞中。卵巢交界性上皮性肿瘤和上皮性卵巢癌的表达率，明显高于卵巢良性上皮性肿瘤与正常卵巢组织的表达率，差异有显著性（P0.05）。上皮性卵巢癌高于交界性肿瘤，但差异无显著性。而良性肿瘤与正常卵巢组织比较，差异无显著性。AQP1的高表达与肿瘤的良恶有关，AQP1上调机制现不明确，但它的上调为肿瘤提供了高效的水，离子交换的基础。以往研究发现：AQP1存在于多处微血管的内皮，AQP1表达缺乏的人可以出现尿缩障碍、肺内毛细血管和肺间质之间的液体交换障碍3，小鼠脏层胸膜微血管的内皮及间皮细胞上有AQP1丰富表达，在鼠胸膜腔内渗透压增高时对水的转运起主要作用5-6。本研究还发现，卵巢癌有腹水者其AQP1表达率水平明显高于无腹水量者，差异有显著性(P0.05)。提示AQP 1高表达与卵巢癌腹水的形成有关。Mobasheri等也证明人腺癌AQP 1表达增加与肿瘤局部水肿的构成和清除有关7。推测由于卵巢癌组织微血管内皮细胞AQP 1蛋白表达上调，引起血管内皮细胞对水的通透性增加，水分外渗从而产生腹水。3.3 AQP1表达与MVD值关系的意义 肿瘤的生长和转移依赖于血管的生成,血管生成是一个包括内皮细胞增殖、迁移及细胞外基质降解的复杂过程3。新血管的生成为肿瘤细胞的物质交换和增殖提供基础；但肿瘤新生血管在结构上管壁薄、分化差,内皮细胞幼稚基底膜发育不良、呈片段状,在分布与构筑上呈无序状态;在功能上不具备完整的微循环功能和收缩功能,不受神经体液调节4-5。Saadoun等2首次证明AQP在血管生成和细胞迁移中发挥重要作用。为满足快速增殖、分裂和侵袭转移的需要,癌细胞比正常细胞更需要水分子的快速跨膜转运,多数肿瘤有很高的组织间隙液体压力和很高的微血管渗透性。AQP是广泛存在于原核和真核生物细胞膜上特异性通道,在多种器官的生理功能和病理中发挥重要的作用1。AQP基因敲除鼠肿瘤血管生成障碍、肿瘤生长抑制。本结果显示MVD在AQP1表达阴性、弱阳性、中阳性、强阳性，四者之间均有显著性差异(P0.01)，血管密度可以反映组织内血管生成的状态。本研究提示组织内微血管密度及分布有助于病理诊断时良恶性肿瘤的界定,可能成为彩色多普勒血流成像技术鉴别卵巢良恶性肿瘤的基础,有助于早期发现恶性肿瘤。4 结论41 AQP1高表达率与腹水有关。本实验可能为卵巢癌的病理机制和卵巢癌腹水的发生到增多可能提供了新的理论依据。4.2 MVD值与AQP1的表达率正相关，证明了AQP1同时在肿瘤组织血管生成中可能起到作用。4.3 推测应用AQP抑制剂可以抑制肿瘤生长、侵袭和转移，为卵巢癌的临床治疗可能提供了新的靶点。【参考文献】 1Law SY,Fok M,Lam KY,et al.Small cell carcinoma of theesophagusJ.Cancer,1994,73(12):2894-28992Moon C,Soria JC,Jang SJ,et al.Involvement of aquaporins in colorectalcarcinogenesisJ.Oncogene,2003,22(43):6699-67033Horai T,Kobayashi A,Tateishi R,et al.A cytologic study fsmall-cellcarcinoma of the esophagusJ. Cancer,1978, 41(5):1890-18964Preston GM,Carroll TP,Guggino WB,andagre P.1992.Appea-ranceof water channels in Xenopus oocytes expressing red cell CHIP28 proteinJ.Science.256:385-3875Yang B. The human aquaporin gene family (review)J. J Current Genomics,2000,1(1):91-1026Bodis B,Nagy G,Nemeth P,et al.Active water