沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法.doc

*公司.品管部沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法文件编号QS/XX-ZY-PG-412版 本A0页 码1/51主题内容与适用范围本标准规定了冻猪肉、冻鸡肉、检验方法。适用于太合公司肉品的检验。2样品制备及增菌培养 2.1肉类 2.1.1如为冷冻产品,应在45以下不超过15min,或在25不超过18h解冻。若不能及时检验,应置于15左右保存。非冷冻而易腐的食品,置于4冰箱保存。2.1.2以无菌操作,称取剪碎后的瘦肉样品25 g,置于灭菌均质杯内,加入25 mL,缓冲胨水增菌液,以800010000r/min均质1min,移入盛有200mL缓冲胨水增菌液的500mL广口瓶内,混合均匀,如pH低于6.6,用灭菌1mol/L氢氧化钠溶液,调pH至6.80.2,于37水浴培养4h(以增菌液达到37时算起),进行前增菌；其后,移取10mL转种于盛有100mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的250mL玻璃瓶内,摇匀,于421培养202h,进行选择性增菌。必要时,同时另称取25g剪碎的瘦肉样品,加入25mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液,同样进行均质。其后,移入盛有200mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液的500mL广口瓶内,混合均匀,如pH低于6.6,用灭菌1mol/L氢氧化钠溶液调pH至6.80.2,于37培养242 h,进行直接选择性增菌。 3分离培养3.1将增菌培养液摇匀,以无菌操作,用直径3mm的接种环分别挑取1环,分别划线于表面无凝结水的亚硫酸铋和胆硫乳琼脂平板各一个(必要时亚利桑那菌琼脂平板可参照使用),于37培养242h。 3.2观察各琼脂平板上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落,如无典型或可疑菌落,应再继续培养242h。沙门氏菌属的菌落特征见表1。琼脂平板菌 落 特 征沙 门 氏 菌亚 利 桑 那 菌亚硫酸铋琼脂棕褐色或灰色至黑色,有时有金属光泽,周围培养基呈棕色或黑色,周围培养基一般不变黑或微变黑。有些菌株呈灰绿色,带黑心 有些菌株呈灰绿色,周围培养基不 或不带黑心 变或微变暗 胆硫乳琼脂无色半透明有黑色中心或几乎全为黑色。有些菌株无色半透明落,乳糖阴性菌株,相似于沙门氏菌菌乳糖阳性菌株为粉红色有暗色 中心亚利桑那菌琼脂黄色有暗蓝色中心,周围培养基中有黄色沉淀物粉红色有黑色中心,有时为全黑色周围培养基呈红色,被发酵卫矛醇或庶糖的细菌包围时,菌落边缘可 为浅黄色*公司.品管部沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法文件编号QS/XX-ZY-PG-412版 本A0页 码2/54鉴定4.1筛选试验4.1.1每个琼脂平板至少应挑选2个典型或可疑菌落,分别用接种针接种赖氨酸脱羧酶培养基或尿素酶琼管,接种后无须灭菌接种针,直接再接种三糖铁琼脂一管于37培养242h。4.1.2挑取菌落后的琼脂平板,应置于48至少保留24 h,以备必要时复查。4.1.3按表2或表3结果进行判断。表1-三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶培养基筛选三糖铁琼脂赖氨酸脱羧酶初步判断叙面底层产气硫化氢KA+（-）+（-）+可疑沙门氏菌属KJA+（-）+（-）-可疑沙门氏菌属AA+（-）+（-）-非沙门氏菌属KK+（-）+（-）+/-非沙门氏菌属注： K产碱 A产酸 +阳性反应 -阴性反应 +/-阳性或阴表2-糖铁琼脂和尿素酶琼脂筛选 三糖铁琼脂尿素酶琼脂初步判断叙面底层产气硫化氨KA+（-）+（-）-可疑沙门氏菌属KA+（-）+（-）+非沙门氏菌属AA+（-）+（-）+非沙门氏菌属KK+/-+/-+/-非沙门氏菌属 注： K产碱 A产酸 +阳性反应 -阴性反应 +/-阳性或阴*公司.品管部沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法文件编号QS/XX-ZY-PG-412版 本A0页 码3/54.2 生化试验 4.2.1 将符合表2或表3可疑沙门氏菌属特性的三糖铁琼脂培养物,按表4进行生化试验(表中赖氨酸脱羧酶试验或尿素酶试验的结果见4.1结果,不再另做)。表4 沙门氏菌属生化反应序 号生 化 项 目反 应沙门氏菌亚利桑那菌1尿素酶试验-2V-P试验-3赖氨酸脱羧酶试验+4吲哚试验-5丙二酸钠试验-+6卫矛醇试验d-7硝酸盐还原+注: 阳性反应；阴性反应；d反应不定。4.2.2所有生化试验管均于37培养242 h。 4.2.3生化试验结果符合表4沙门氏菌属特性的按4.3进行。 4.3血清学试验4.3.1检查培养物有无自凝性在洁净的玻片上加一滴生理盐水,将待试培养物混合于生理盐水滴内,使成为均一性的混浊悬液,将玻片轻轻摇动3060s,在黑色背景下观察反应(最好用放大镜观察)。如菌体彼此相凝集成明显或比较明显小颗粒状物即认为有自凝性。反之无自凝性*公司.品管部沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法文件编号QS/XX-ZY-PG-412版 本A0页 码4/54.3.2检查“O”抗原对无自凝性的培养物,按照4.3.1的程序进行试验,但以多价“O”血清代替生理盐水,在2min内判断结果。如为阳性结果以单价“O”血清进行分群试验。如为阴性结果,必要时,可结合4.2结果按4.3.3进行试验,再以多价和单价“O”血清进行试验。4.3.3检查“Vi”抗原按照4.3.1的程序进行,但以“Vi”血清代替生理盐水。4.4 根据4.2和4.3试验结果,按照表5进行判定。表5沙门氏菌属生化试验与血清学试验结果判定类别生化实验血清学实验其他实验判定1符合表4中沙门氏菌生化特性“0”因子血清分群阳性沙门氏菌2符合表4中沙门氏菌生化特性“0”因子血清分群阴性菌落典型，镜检革蓝氏阴性无芽胞杆菌沙门氏菌3尿素酶试验阳性非沙门氏菌4尿素酶试验阴性, 表4生化反应3-5项中任一项不符合沙门氏菌特性“0”因子血清分群阳性沙门氏菌5尿素酶试验阴性, 表4生化反应2-5项中任一项不符合沙门氏菌特性“0”因子血清分群阴性非沙门氏菌6尿素酶试验阴性, 表4生化反应2-5项中任两项或两项以上不符合沙门氏菌特性非沙门氏菌7符合表4中亚利桑那菌生化特性“0”因子血清分群阳性亚利桑那菌8符合表4中亚利桑那菌生化特性“0”因子血清分群阴性菌落典型，镜检革蓝氏阴性无芽胞杆菌亚利桑那菌9尿素酶试验阴性非亚利桑那菌10尿素酶试验阴性, 表4生化反应3-5项中任一项不符合亚利桑那菌特性“0”因子血清分群阳性亚利桑那菌11尿素酶试验阴性, 表4生化反应2-5项中任一项不符合亚利桑那菌特性“0”因子血清分群阴性非亚利桑那菌12尿素酶试验阴性, 表4生化反应2-5项中任两项或两项以上不符合亚利桑那菌特性非亚利桑那菌注: 丙二酸钠试验阴性,卫矛醇试验反应不定的菌株,按上述16类别结果进行判断。 丙二酸钠试验阳性,卫矛醇试验阴性的菌株,按上述712类别结果进行判断。*公司.品管部沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法文件编号QS/XX-ZY-PG-412版 本A0页 码5/5如以上生化项目仍不能判定时,