尿液干化学分析.ppt

尿液干化学分析颍上县中医院检验科郑莉丽 尿液干化学试带法操作简便 检测迅速 结果准确 可目测也可自动化分析 1 分析仪组成机械系统光学系统电路系统 2 试带种类单项试带多联试带尿干化学分析仪检测原理的本质是光的吸收和反射 干化学分析仪检查 尿干化试带各检测项目反应原理 一 酸碱度 pH 参考值 正常新鲜尿液多呈弱酸性晨尿pH5 5 6 5随机尿pH4 6 8 0 临床意义 1 pH降低 见于酸中毒 发热 脱水 痛风以及服用氯化铵 维生素C等酸性药物者 另外低钾性碱中毒时由于肾小管分泌H 增加 尿呈酸性称为反常性酸性尿2 pH增高 见于碱中毒 尿潴留 尿路感染 频繁呕吐丢失胃酸 服用碳酸氢盐 尿液放置过久等 另外I型肾小管性酸中毒时尿液呈碱性 3 用药指标 酸 碱化尿液 利于某些药物排出 常见影响尿液PH值的因素 酸性碱性食物 肉类 高蛋白及蔬菜水果 含钾 钠 混合食物 含硫 磷 生理活动 剧烈运动 应激 饥饿 出汗用餐后碱潮药物 氯化钾氯化钙 氯化铵 稀盐酸等碳酸氢盐 碳酸钾 碳酸镁 枸橼酸钠 酵母 利尿剂肾功能 肾小球滤过增加而肾小管肾小球滤过功能正常而保碱能力正常肾小管保碱能力丧失 二 蛋白质当尿蛋白 150mg 24h或 100mg L时 尿蛋白定性试验为阳性 称为蛋白尿 病理性蛋白尿1 肾小球性蛋白尿因炎症 免疫和代谢等因素导致肾小球滤过膜损伤 通透性增加及静电屏障减弱 血浆蛋白特别是白蛋白滤出 超过肾小管重吸收能力而形成的蛋白尿 损伤较重时球蛋白及其他分子量较大的蛋白质也可滤出 肾小球性蛋白尿根据滤过膜损伤程度及蛋白组分 分为 鉴别点选择性非选择性原因 肾小球损伤较轻 肾小球毛细血管壁有严重如肾病综合征破裂和损伤 如原发性和继发性肾小球疾病相对分子量 4 9万大 中相对分子量蛋白质种类 白蛋白 抗凝血酶 IgG IgA IgM和补体转铁蛋白 糖蛋白等尿蛋白定性 尿蛋白定量 3 50 5 3 0Ig Alb清除率 0 5 2 肾小管性蛋白尿指肾小管在受到感染 中毒损伤或继发于肾小球疾病时 因重吸收能力降低或抑制 而出现的以分子量较小的蛋白 如 2MG 为主的蛋白尿 尿蛋白定性 定量1 2g 24h3 混和性蛋白尿病变同时或相继累及肾小球和肾小管 兼有两种蛋白尿的特点 4 溢出性蛋白尿血液中分子量较小或阳性电荷的蛋白质增多 经肾小球滤过 超过肾小管重吸收能力而形成的蛋白尿 如游离血红蛋白 肌红蛋白 溶菌酶 本周蛋白等 多为 常见于多发性骨髓瘤 5 组织性蛋白尿来源于肾小管代谢 组织破坏 炎症或药物刺激泌尿系统分泌的蛋白质形成的蛋白尿 以TH糖蛋白为主 6 偶然性蛋白尿 又称假性蛋白尿 即因尿内混有大量血液 脓液和黏液等而导致蛋白定性试验阳性 一般并不伴有肾本身的损害 故又称假性蛋白尿 7 功能性蛋白尿 指泌尿系统无器质性病变 尿内暂时出现的轻度蛋白质 又称为生理性蛋白尿 常见于由剧烈运动 发热 受寒或精神紧张等 由于肾小管痉挛或充血等暂时性改变使肾小球毛细血管壁通透性增高而导致蛋白尿 常为一过性蛋白尿 定量一般不超过1 定量小于0 5g 24h 多见于青少年 8 体位性蛋白尿 指直立姿势时出现蛋白尿而卧位时尿蛋白消失 且无血尿 高血压 水肿等异常表现 可能是直立时由于前突脊椎压迫肾静脉或因直立过久肾脏下移 使肾静脉扭曲肾静脉淤血 淋巴 血流受阻所致 特点 卧位时尿蛋白阴性 起床活动或久立后呈阳性 多见于青少年 检测方法试带法 pH指示剂蛋白质误差原理 主要用于尿液分析仪简便 快速 易标准化 适于健康体检或筛查 对白蛋白灵敏 对球蛋白不灵敏 不适用于肾脏疾病的疗效观察及预后判断 试带法检测尿蛋白的干扰因素 标本因素 尿液PH大于9可致假阳性 PH小于3可致假阴性 最适宜尿液PH5 6食物因素 尿液酸碱度与摄入食物有关 检查前一天应均衡饮食 避免摄入过多肉类或蔬菜水果药物因素 假阳性 奎宁 奎尼丁 嘧啶等或尿液中含有聚乙烯 吡咯酮 洗必泰 磷酸盐 季铵盐消毒剂等 尿液呈强碱性 PH大于或等于9 0 假阴性 滴注大剂量青霉素或应用庆大霉素 磺胺 含碘照影剂操作过程 假阳性 试带浸渍时间过长 反应颜色变深假阴性 试带浸渍时间过短 反应不完全 或浸渍时间过长使反应模块中的试剂流失 磺基水杨酸法 又称磺柳酸法 为定性或半定量方法 操作简便 反应灵敏 结果显示快 是干化学法检测尿蛋白的参考方法 并为检测尿蛋白的确证实验 pH在3 9以外或高浓度尿酸盐可导致假阴或假阳性 加热乙酸法 方法经典而准确 为蛋白定性确证实验 操作略繁 特异性强 干扰因素少 三 葡萄糖健康人尿液中可有微量葡萄糖 小于2 8mmol 24h血糖浓度超过8 88mmol L 1 6g L 时 尿中出现葡萄糖 检测方法 1 试带法 即葡萄糖氧化酶 过氧化物酶法 特异性强 灵敏度高 1 67 2 78mmol L 简便快速 适用于自动化分析 2 班氏法 非特异试验 可测定尿中所有还原性物质 灵敏度低 8 33mmol L呈现弱阳性 方法稳定 成本低 维生素C对尿糖检测影响影响机制试带法 与试剂发生竞争性抑制反应 班氏法 维生素C为还原物质 可与试剂中的硫酸铜发生反应 解决办法 将尿液煮沸后几分钟再检测 不同化学物质对尿糖的影响 成分葡萄糖氧化酶试带法班氏法葡萄糖阳性阳性非葡萄糖成分果糖无反应阳性半乳糖无反应阳性乳糖无反应阳性麦芽糖无反应阳性戊糖无反应阳性蔗糖无反应阳性酮体 大量 可抑制颜色反应无反应肌酐无反应可导致假阳性尿酸无反应阳性 不同化学物质对尿糖的影响 成分葡萄糖氧化酶试带法班氏法药物维生素C可延迟颜色反应弱阳性头孢菌素类无反应阳性 棕褐色左旋多巴 大量 假阴性无反应萘啶酮酸无反应阳性葡萄糖苷酸无反应阳性对苯甲酸无反应阳性盐酸苯氮吡啶橙色影响结果不确定水杨酸盐可减弱显色无反应X射线造影剂无反应黑色污染物过氧化氢假阳性可掩盖阳性结果次氯酸 漂白剂 假阳性不确定氟化钠假阳性无反应 临床意义 1 血糖增高性糖尿 1 代谢性糖尿 糖尿病 2 内分泌性糖尿 甲状腺功能亢进 垂体前叶功能亢进如肢端肥大症 嗜铬细胞瘤 Cushing综合症 2 肾性糖尿 血糖正常性糖尿 由于肾小管重吸收能力或肾阈值降低所致 家族性糖尿 慢性肾炎或肾病综合症 哺乳 妊娠期 3 暂时性糖尿 生理性如大量进食碳水化合物等 应激性糖尿如颅脑外伤 情绪激动 脑出血 急性心肌梗死时 延脑血糖中枢受刺激后肾上腺素胰高血糖素分泌过多 4 其他糖尿 当进食过多或受遗传因素影响时 糖代谢紊乱 尿中乳糖 半乳糖 蔗糖 戊糖 果糖含量增高而出现相应的糖尿 5 假性糖尿 尿中还原性物质 如维生素C 尿酸 葡萄糖醛酸或药物如异烟肼 链霉素 水杨酸 阿司匹林等 可呈阳性反应 四 酮体 KET 是尿中 羟丁酸 78 乙酰乙酸 20 丙酮 2 的总称 检测方法 亚硝基铁氰化钠法 乙酰乙酸或丙酮与亚硝基铁氰化钠反应生成紫色化合物试带法 只与乙酰乙酸 丙酮发生反应基于该原理有多种检测方法 均不与 羟丁酸反应 临床意义 正常人定性试验尿酮 在生理或病理情况下 如糖尿病 剧烈运动 妊娠剧吐 应激状态 饥饿时 脂肪动员加速 代谢紊乱 酮体生成过多 引起血酮体过多而导致酮尿 1 糖尿病性酮症 糖尿病患者出现尿酮 应考虑糖尿病酮症酸中毒 是发生酮酸中毒性昏迷的前兆 2 非糖尿病酮尿 孕妇可因严重妊娠反应剧烈呕吐 重症子癫不能进食引起尿酮体阳性 3 氯仿 磷中毒 全身麻醉后 可呈阳性 服用双胍类降糖药由于药物抑制细胞呼吸可出现血糖降低而尿酮体阳性的现象 新生儿出现尿酮体强阳性应高度怀疑遗传性疾病 五 胆红素 BIL 血浆中的胆红素主要分为未结合胆红素 UCB 和结合胆红素 CB 未结合是非水溶性 不能从肾脏滤过 故尿中正常没有 结合性是水溶性的 可从尿中排出 检测方法 偶氮法 在强酸介质中 结合胆红素与重氮盐发生偶联反应呈红色 多用于试带法 维生素C或标本保存不当可致假阴性 正常人尿胆红素含量 2mg L 定性阴性 五 胆红素 BIL 干扰因素 尿蓝母产生的橘红色或红色可干扰结果假阳性 接受大量的氯丙嗪治疗或尿液中含有盐酸苯偶氮吡啶代谢产物假阴性 1 尿液维生素C浓度达到1 42mmol L和存在亚硝酸盐时 可抑制偶氮反应2 尿液标本保持不当遇光氧化注意 胆红素在强光下易胆绿素 1小时后下降约30 应避光棕色容器或新鲜尿液标本检测 六 尿胆原 URO 和尿胆素尿胆原是结合胆红素排入肠道后形成的 尿胆原与空气接触后变成尿胆素 尿胆红素 尿胆原 尿胆素三者共称尿三胆 主要用于黄疸的诊断和鉴别诊断 检测方法试带法 1 醛反应法 在酸性溶液中尿胆原与二甲氨基苯甲醛发顺醛化反应形成樱红色缩合物 2 偶氮法 在强酸性条件下 尿胆原与对 四氧基重氮四氟化硼发生偶联反应生成胭脂红色化合物尿胆原含量 10mg L 定性为阴性或弱阳性 干扰因素 1 偶氮法 甲醛浓度为2000mg L或亚硝酸盐50mg L以上 其灵敏度下降2 醛反应法 标本因素 标本久置尿胆原分解氧化成尿胆素 标本中大量胆红素可引起颜色干扰药物因素 假阳性 吩噻嗪类 磺胺类 普鲁卡因 氯丙嗪类药物可使尿液颜色变化假阴性 与尿液中大量维生素C或长期服用广谱抗生素抑制肠道菌群内源性物质 卟胆原 吲哚类化合物等可与醛试剂作用显红色 引起假阳性 可用氯仿抽提法鉴别和确诊 尿液指标正常人溶血性黄疸肝细胞性黄疸胆汁淤积性黄疸颜色浅黄深黄深黄深黄尿胆原阴性强阳性阳性阴性或弱阳性尿胆素阴性阳性阳性阴性胆红素阴性阴性阳性阳性 不同类型黄疸的鉴别诊断 七 血红蛋白 Hb 游离血红蛋白超过结合珠蛋白结合能力 可经尿液排出 称为血红蛋白尿 检测方法 1 试带法血红蛋白的血红素基团 具有过氧化物酶活性 能催化过氧化氢 使色原氧化呈色 色的深浅和血红蛋白含量成正比 常用色原有邻甲苯胺和四甲替联苯胺 除了与游离的血红蛋白反应外也与完整的红细胞反应但是在高蛋白高比重尿液中 红细胞不溶解 此时结果只反应血红蛋白的量假阳性 尿液中含有易热性触媒 尿液被氧化剂污染 或尿路感染时某些细菌产生过氧化物酶假阴性 尿液中含有大量的维生素C或其他还原物质 过量甲醛 大量亚硝酸盐 反应迟钝 2 化学法原理同试带法 3 免疫法免疫胶体金测定原理 灵敏度特异性好 临床意义 尿中出现Hb是血管内溶血的证据之一1 红细胞破坏 心脏瓣膜修复术 大面积烧伤 剧烈运动 急行军 严重肌肉损伤和血管组织损伤2 生物因素 疟疾 梭状芽孢杆菌中毒3 动植物所致溶血 蛇毒 蜂毒等4 微血管性溶血性贫血 DIC5 药物作用 伯氨喹啉 乙酰水杨酸 磺胺 非那西丁6 免疫因素 血栓性血小板减少性紫癜 阵发性寒冷性血红蛋白尿 血型不合的输血 八 亚硝酸盐 NIT 主要来自病原菌对尿硝酸盐的还原反应 检测方法 亚硝酸盐还原法阳性检出率主要取决于 致病菌是否含有硝酸盐还原酶 尿在膀胱中是否停留足够细菌作用的时间 尿中是否存在适量硝酸盐 影响因素 标本因素高比重尿敏感性降低 陈旧尿 偶氮剂污染尿可致假阳性 食物因素不能正常饮食者 体内缺乏硝酸盐 可出现假阴性 致病菌因素大肠杆菌 致病率最高 符合率约为80 克雷伯杆菌 变形杆菌 葡萄球菌 粪链球菌感染则为阴性 药物利尿剂和维生素C导致假阴性 非那吡啶可致假阳性 尿停留时间晨尿较好 停留时间过短可为假阴性 临床意义主要用于尿路感染的快速筛检 九 白细胞酯酶与显微镜检测白细胞有互补作用检测方法 酯酶法 中性粒细胞质中含有特异性酯酶能使试带中的吲哚酚酯产生吲哚酚 吲哚酚与重氮盐形成紫红色缩合物 只对粒细胞灵敏 与淋巴细胞不反应 假阳性率高 主要见于阴道分泌物 甲醛污染 酸性尿中呈红色或深色药物或食物影响如 高浓度胆红素 非那吡啶 假阴性 见于尿液WBC少于10 25 ul 尿蛋白 5g L 尿葡萄糖 30g L 高比重尿液 尿液中含有维生素C 庆大霉素 头孢菌素等 如尿液PH 4 4草酸盐还原成草酸则白细胞酯酶反应偏低或出现阴性 临床意义 用于诊断泌尿系统感染 肾移植排斥反应时尿中以淋巴细胞为主 此时应以镜检为准 十 维生素C检测方法 还原法只能检测左旋抗坏血酸 还原型 不能检测左旋脱氢抗坏血酸 氧化型 临床意义 用于判断其他检测项目结果是否准确可靠 是否受到维生素C浓度的影响 以免出现假阴性 隐血 胆红素 葡萄糖 亚硝酸盐试带反应产生严重干扰 维生素C对干化学检查项目的干扰检查项目干扰检测项目反应物所需浓度隐血 Hb 90mg L试剂模块浸渍的H2O2胆红素 250mg L试剂模块浸渍的重氮盐亚硝酸盐 250mg L反应过程中产生的重氮盐葡萄糖 500mg L反应过程中产生的H2O2 十一 尿比重试带法 1 操作简便快速2 不受高浓度葡萄糖 尿素 高浓度放射造影剂影响 但受强酸 强碱 尿蛋白影响较大3 灵敏度低 精密度差 检测范围窄4 只用于筛检试验 不作为评价肾功能变化的指标折射法 尿比重计法 超声波法 称量法 十一 尿比重临床意义 升高 急性肾小球肾炎 肾病综合征 流行性出血热少尿期 高热 脱水 心功能不全 周围循环衰竭尿少时 以及尿中含有较多的蛋白质和葡萄糖时 降低 大量饮水 尿崩症 间质性肾炎 肾衰竭等导致远端肾单位浓缩功能严重障碍的疾病 经常排出尿比重近于1 010的尿液称为等张尿 见于肾实质严重损害的终末期