2012410支原体肺炎的诊治.ppt

肺炎支原体感染的实验室诊断 儿科韩殿丽 概述 支原体是一类能在无生命人丁培养基中生长 繁殖的最小原核型微生物 该类病原体中对人类致病的有肺炎支原体 人型支原体 解脲脲原体等 肺炎支原体是介于细菌和病毒之间的一种病原微生物 无细胞壁 能通过细菌滤器 需要含胆固醇的特殊培养基 在接种10天后才出现菌落 菌落很小 很少超过0 5mm 革兰氏染色阴性 肺炎支原体感染的特点 肺炎支原体感染广泛发生于世界各地 平时散在发病 3 7年一次性地区流行 支原体肺炎好发年龄为5 30岁 潜伏期可长达2 3周 支原体肺炎是Mp感染的主要表现 Mp感染引起的急性呼吸道感染除肺炎外绝大部分表现为咽炎 扁桃体炎及急性支气管炎和毛细支气管炎等 Mp可诱发哮喘 慢性阻塞性肺疾病等急性发作 可累及神经 血液 心血管等系统 以及皮肤 肌肉 关节等器官 肺炎支原体的实验室诊断 由于Mp无细胞壁 作用于细胞壁的抗菌药物对其没有杀伤作用 故Mp引起感染的治疗与其他细菌和病毒感染的治疗方案不同 因此及时有效地Mp感染的实验室诊断是十分必要的 它可及时指导临床治疗 进而预防可能发生的流行和并发症 1 常用的肺炎支原体实验室诊断方法 目前国内外采用的Mp诊断方法主要包括经典的培养法 血清学抗体检测法 抗原检测法 核酸检测等方法 检测MpIgG抗体应采急性期及发病后2 3周的双份血清抗体进行比较 血清IgG抗体呈4倍以上升高或降低者 同时Mp分离阳性者 有绝对诊断意义 血清IgM抗体阳性伴Mp分离阳性者 也可明确Mp感染诊断 如仅有4倍以上IgG抗体改变或IgM阳性 推测有近期感染 应结合临床表现进行诊断 2 肺炎支原体实验室诊断方法探讨 Mp的分离培养和鉴定可以客观反映Mp感染的存在 至今仍是支原体鉴定的金标准 可用于验证各种其他方法的检测结果 其缺点是费时耗力 由于Mp对培养条件要求苛刻 生长缓慢 作出判断需3 4周 当标本中Mp 数量极少 培养基营养标准不够或操作手法不当时 均会出现假阴性 因此 多数实验室诊断都采取血清学方法 1 血清学检测方法 最早是应用补体结合实验 现已被改良 20世纪八十年代以来许多方法进入市场 间接免疫荧光 颗粒凝集试验和酶联免疫试验 间接免疫荧光法的结果判断受人的主观影响 并需要荧光显微镜 还可受到类风湿因子的影响 使其试剂盒的使用受到限制 颗粒凝集试验 主要是利用乳胶和凝胶作为携带颗粒与实验血清进行孵化 如果血清中含有特异抗体 颗粒附着 产生可见反应 但其检出的阳性标本 多不能区分IgG和IgM 除了操作简单 与其他实验技术相比没有任何优势 酶联免疫试验 EIA 在检测急性感染时比培养法敏 感 在有足够的抗体产生时间 而且患者免疫系统正常情况下 其敏感性相当于PCR 2 抗原检测 包括直接免疫荧光 对流免疫电泳 免疫印迹和抗原捕获EIA 这些方法敏感性较低 与其他支原体存在交叉反应 使其应用受到限制 3 核酸检测 1980年以来 人们通过实验室和临床研究 确定了PCR方法检测Mp感染的可靠性 认为可以用PCR方法与血清学方法和或培养法联合进行临床诊断 PCR优点 可以检测经过处理用于组织学检测的 组织 或者已经污染不能进行分离培养的组织 只需要一份标本 一天内可以完成检测 与血清学方法比较 可以检测更早期的感染 检测标本中的支原体不必须是活体 在PCR法与培养法联合使用时 PCR检测阳性而培养结果阴性很容易用PCR法的敏感性解释 但是 当PCR阴性而培养结果或血清学检测阳性时 必须考虑到PCR实验中出现了抑制因素或实验技术问题 稀释标本可能减少PCR抑制因素 但同时可能降低PCR的敏感性 阳性的PCR结果和阴性的血清学结果同时出 现 可能是由于标本采集过早 抗体尚未产生的原因 而PCR结果阴性 伴随IgG或IgM水平久高不降 也有血清学检测假阳性的可能 经抗生素治疗后24小时的标本 PCR结果可能是阴性的 但血清学检测结果可以是阳性的 总之要结合临床表现