上海海洋大学显微技术复习资料.doc

一、填充题：1、 光学显微镜的分辨率约为 0.2-0.4 毫微米，最高放大率为1500倍左右。电子显微镜的分辨率约为 几个埃，放大率在几百万倍左右。2、 人眼只能感受光谱中很窄的可见光波长约为 400700毫微米范围内的电磁波。3、 数值孔径（NA）又称“镜口率”、“开口率”，简写NA或A。是物镜和聚光镜的主要技术参数，是判断其性能高低的重要标志。4、 相差显微镜是应用光衍射和干涉原理，把可见光的光程差变成振幅差，使人眼能够分辨。5、 相衬物镜用于相衬镜检术的专用物镜，其特点是在物镜的后焦点平面处装有相板。6、 透镜所形成的象除了象的位置、大小、倒正、虚实之外还有成象的质量问题，也就是说，物体通过透镜后所形成的象与理想象在形状、颜色上有着一定的差异，这种差异称为象差。7、 特种（专用）显微镜包括7种类型：1、暗场，2、荧光，3、倒置，4、相衬，5、偏光，6、干涉，7、体视。8、 荧光现象有二种，一种为自发荧光直接经紫外线照射后就能发生的荧光；另一种为激发荧光必须经荧光素处理后再经紫外线照射才能发生荧光。9、 照明系统有透射式及落射式照明，采用柯勒照明法是为了获得均匀的照明效果，这种照明的热焦点不在被捡物体的平面处，即使长时间的照明，也不致损伤被捡物体。是成功进行显微照相必须的一种照明法。10、 电子束实际上是一种阴极射线，是带负电荷的粒子，它和其它的光线一样，具有双重性:一种具有波动性，另一种具有粒子性。11、 透射电子显微镜为了获得高分辨率和高质量的像，要求电子枪和所有的透镜以及光栏等所有光学部件的轴都要精密重合，即在同一轴线上，其操作主要完成合轴操作 ，消像散及聚焦这三大步骤。12、 扫描电镜的分辨率主要取决于电子束的直径，所以要尽可能缩小它。电子与样品的相互作用会产生多种的信息，基本上分成两大类：一是电子，二是射线，其中二次电子、背散射电子、俄歇电子等信息与扫描电镜的成像有关。13、 目前有许多种型号的超薄切片机，但主要包括两类：一类是热胀式，另一类是机械式。14、 固定液的按照成分划分可分为单固定、双固定和多重固定，双固定效果好，应用广泛，即先用1-3的戊二醛缓冲液在室温或4下进行前固定，一般单细胞可固定10-30分钟，后用1饿酸缓冲液在4下固定10-60分钟。15、 最常用的磷酸钠缓冲液主要由A液磷酸钠氢二钠和B液磷酸钠二氢钠这二种工作液调配成PH值在7.0-7.4之间混合液，但根据样品的需要，也可以调到6.8以下或7.6以上。16、 脱水剂包括：乙二醇、乙醇、聚乙二醇、甲醇、丙酮、环氧丙烷等，最常用的脱水剂是乙醇和丙酮。17、 二次电子在扫描电镜成像过程中担任主角。它是样品本身的原子中的外层电子，被入射电子激发出来后，形成带有样品的形貌和成分等信息的电子束，主要反映样品浅表层（约5-50nm）的信息。18、 在制备扫描电镜生物样品时常采用镀膜方法，一种是金属镀膜法，另一种真空喷镀镀膜法。19、 德国物理学家Busch早在1926年即已指出“具有轴对称性的磁场对电子束说来起着透镜的作用”。他从理论上奠定了可利用磁场作为电子透镜的基础。20、 镀膜有如下作用：（1）更好地再现样品表面的形态（2）提高二次电子的溢出提高图象质量3）可以防止样品受传导和对流引起的热损伤，防止样品受金属氧化引起的污染。21、 普通超薄切片术指不需要特殊的冷冻条件的常规包埋切片技术。其过程一般与光学显微镜的石蜡切片过程原则上基本相似，它也包括取材、固定、脱水、渗透、包埋、聚合、切片、染色等几个环节。22、 一般厚度在10-100毫微米的切片称为超薄切片，可分为普通超薄切片术和冷冻超薄切片术两大类。23、 负染色技术又称阴性反差染色，是将颗粒或者纤维样品分散在具有亲水性支持膜的载网上，然后滴加磷钨酸或醋酸双氧铀等染料，并随即吸去多余染液，样品干燥后残余染料将沉积在样品的周围以及样品的凹陷、缝隙处，而样品本身呈浅色，所以称为负染。24、 制备扫描电镜的样品的干燥方法有 1、临界点干燥，2、冷冻干燥，3、空气干燥（自然干燥），4、化学药品干燥。25、 临界点干燥中有很多物质可用做干燥剂，如 一氧化二氮、氟里昻13 、液体二氧化碳 、干冰等等，而常用的干燥剂是液体二氧化碳。26、 支持膜有多种，较常用的有：孚尔瓦膜、碳膜、火棉胶膜等27、 什么是分辨率：又称“鉴别率”、“解象力”和“分辨本领”.是指将邻近两点清晰区分辨认的能力。是衡量显微镜性能的又一个重要技术参数。28、 分辨本领公式：德国著名理论光学家Abbe早在100多年前就给出分辨本领：R=0.61/nSin，n为物体所处媒介的折射率；为孔径角；为发射光波长。29、 二次电子：二次电子的发射是由于入射电子碰撞样品的核外电子，核外电子获得能量脱离原子而成为二次电子。二次电子所形成的像（二次电子像）反映了样品表面的形貌。它在扫描电镜成像过程中担任主角。它是样品本身的原子中的外层电子，被入射电子激发出来后，形成带有样品的形貌和成分等信息的电子束。二次电子主要反映样品浅表层(约550nm)的信息。30、 超薄切片支持膜：载网的目数再高也是有孔隙的，为了防止极微小的样品在捞片时漏掉；或切片在电子束的轰击下卷曲；或为了加强孔隙大的载网的支持作用等，需要在载网上复盖一层支持膜。31、 固定剂：为了使样品在固定过程中维持细胞本身的pH值和渗透压，以防止因样品收缩和膨胀等引起超微结构的改变，采用适当的缓冲液来配制的一种溶液称固定剂，它能较好地阻止样品细胞的自溶，稳定细胞的化学成分和超微结构的介质。32、 脱水的目的是用系列梯度浓度的脱水剂（有机溶剂）逐步替代样品中的游离水，以达到既不破坏超微结构，又能彻底除去样品中的游离态水的目的过程。33、 包埋剂：经过脱水和浸透的样品不能直接进行超薄切片，还需要用某种在一定条件下能聚合成硬块的单体树脂，来填充样品的各个空间，我们把这一过程称为包埋。包埋的目的是一方面要支撑样品本身的超微结构，另一方面能用于切片。我们把具有这种特性的单体树脂称为包埋剂。34、 常用的包埋剂有：环氧树脂EPON 812 ，国产环氧树脂618，GMA，K4M等。35、 简述研究用显微镜“库勒照明调节法”操作步骤：必须用10x物镜观察。先将聚光镜的视场光阑缩小并进行中心调正。在视场内可见到视场光阑的轮廓象，如不在视场的中央，则利用聚光镜外侧的两个调正螺丝将其调正至中央部分。当缓慢地增大视场光阑时，能看到光束两视场周缘均匀展开直至视场光阑的轮廓象完全与视场边缘内接，说明已经台轴。合轴后再略为增大视场光阑，使轮廓象刚好处于视场外切或稍大一些，这样最适于作观察之用。36、 普通超薄切片术样品制备的基本过程：指不需要特殊的冷冻条件的常规包埋切片技术。它包括取材、固定、脱水、渗透、包埋、聚合、切片、染色等几大部分。第一步骤为：取材、固定、脱水：用乙醚使动物轻微麻醉，迅速解剖，准确地取下材料，立即浸入2一5戊二醛进行前固定，并用锋利的双面刀片将样品剁成1mm的碎块，于4固定1小时以上。(如果需要更长时间的前固定，需适时更换新鲜的固定液，并尽可能在4冰箱中保存。)接着用缓冲液处理1030分钟，以洗去前固定液，然后在4下，用1四氧化饿(即饿酸)进行后固定l一2小时。然后进行梯度脱水。第二步骤为：渗透、包埋、聚合、切片、染色：经过脱水和浸透的样品不能直接进行超薄切片，还需要用某种在一定条件下能聚合成硬块的单体树脂，来填充样品的各个空间，然后经固化、修块、超薄切片、电子染色等步骤。37、 荧光显镜微原理和特点：原理：是用人眼不可见的一定波长的紫外线作光源照射被检物体；使之受激发后而产生人眼可见的荧光，然后再经显微镜成象系统放大来进行镜检。特点：光源为紫外线，波长较短，分辨力高于普通显微镜。检出能力高（放大作用）、对细胞的刺激小（可以活体染色）、能进行多重染色。38、 什么是临界点干燥：为避免样品在干燥过程中变形和收缩所采用的一种理想的干燥方法即为临界干燥法，其原理是依靠干燥剂在一定条件下，该种物质的气态和液态可以互相转换的，即在一定的温度和压力之下，某物质的液态和气态界面消失，由液态瞬间转化为气态，此时的温度即该物质的临界温度，同时也就是该物质的临界点，而此时的压力和该物质的密度又分别称为临界压力和临界密度，不同的物质有各自的临界点、临界压力和临界密度。物理实验证明了该物质在其气液面消失的状态下，表面张力作用消失，分子之间的内聚力等于零，临界点干燥仪的设计就依据了这种物理性质，成为较为理想的干燥方法称“临界干燥”。39、 在显微镜的光学系统中，目镜、物镜和聚光镜的光轴以及视场光栏 必须与显微镜的光轴同在一直线上。显微摄影时为了获得均匀的照明效果，应采用柯勒照明调节法进行光路对中。40、 电子显微镜是利用电子束 作为光源的一种新型显微镜，不是利用光学玻璃作透镜，而是根据“轴对称的电磁场对电子束起着透镜作用”这一理论制成所谓的电磁透镜。41、 相位差（相衬）显微镜是依靠在物镜内的相位板使直射光S和绕射光D发生干涉，将人眼不可分辨的 相位差变为可分辨的振幅差，使细菌、细胞等无色透明活体的物质亦成为清晰可见。42、 常用的超薄切片机有二种类型，（1）机械推进式（2）热膨胀式。43、 最常用固定剂有戊二醛和锇酸等。44、 最常用脱水剂有乙醇和丙酮等。45、 制备扫描电镜的样品的干燥方法有 1、临界点干燥2、冷冻干燥3、空气干燥（自然干燥）4、化学药品干燥 。46、 很多物质可用做干燥剂，如 一氧化二氮、氟里昻13 、液体二氧化碳 、干冰等等，本次实验中，我们所采用的干燥剂是氟里昻12 ，最常用的应是液体二氧化碳。47、 在制备扫描电镜生物样品时常采用镀膜方法，一种是金属镀膜法，另一种真空喷镀镀膜法。48、 镀膜有如下作用：（1）更好地再现样品表面的形态（2）提高二次电子的溢出提高图象质量3）可以防止样品受传导和对流引起的热损伤，防止样品受金属氧化引起的污染。49、 二次电子的发射是由于入射电子碰撞样品的核外电子，核外电子获得能量脱离原子而成为二次电子。二次电子所形成的像（二次电子像）反映了样品表面的形貌。它在扫描电镜成像过程中担任主角。它是样品本身的原子中的外层电子，被入射电子激发出来后，形成带有样品的形貌和成分等信息的电子束。二次电子主要反映样品浅表层(约550nm)的信息。50、 载网的目数再高也是有孔隙的，为了防止极微小的样品在捞片时漏掉；或切片在电子束的轰击下卷曲；或为了加强孔隙大的载网的支持作用等，需要在载网上复盖一层支持膜。51、 支持膜有多种，较常用的有：孚尔瓦膜、碳膜、火棉胶膜等。52、 固定剂作用是为了使样品在固定过程中维持细胞本身的pH值和渗透压，以防止因样品收缩和膨胀等引起超微结构的改变，采用适当的缓冲液来配制的一种溶液称固定剂，它能较好地阻止样品细胞的自溶，稳定细胞的化学成分和超微结构的介质。53、 一般常用的固定剂有1-3的戊二醛固定剂和1的锇酸固定剂。54、 缓冲液是为了在固定过程中维持细胞本身的pH值和渗透压，以防止因样品收缩和膨胀等引起超微结构的改变，需用适当的缓冲液来配制固定液。 一般常用缓冲液的pH在7.0-7.4之间，但根据样品的需要，也可以调到6.8以下或7.6以上。55、 缓冲液的种类有：磷酸盐缓冲液，二甲胂酸盐缓冲液，醋酸巴比妥钠缓冲液，三甲基毗烷缓冲液等。最常用的缓冲液有：磷酸钠缓冲液，二甲胂酸钠缓冲液等。56、 脱水剂包括：甲醇、乙醇、乙二醇、聚乙二醇、丙酮、环氧丙烷等，最常用的脱水剂是乙醇和丙酮。脱水的目的是用系列梯度浓度的脱水剂（有机溶剂）逐步替代样品中的游离水，以达到既不破坏超微结构，又能彻底除去样品中的游离态水的目的过程。57、 包埋剂经过脱水和浸透的样品不能直接进行超薄切片，还需要用某种在一定条件下能聚合成硬块的单体树脂，来填充样品的各个空间，我们把这一过程称为包埋。58、 包埋的目的是一方面要支撑样品本身的超微结构，另一方面能用于切片。我们把具有这种特性的单体树脂称为包埋剂；59、 常用的包埋剂有：环氧树脂EPON 812 ，国产环氧树脂618，GMA，K4M等。60、 临界点干燥是为了避免样品在干燥过程中变形和收缩所采用的一种理想的干燥方法即为临界干燥法，其原理是依靠干燥剂在一定条件下，该种物质的气态和液态可以互相转换的，即在一定的温度和压力之下，某物质的液态和气态界面消失，由液态瞬间转化为气态，此时的温度即该物质的临界温度，同时也就是该物质的临界点，而此时的压力和该物质的密度又分别称为临界压力和临界密度，不同的物质有各自的临界点、临界压力和临界密度。物理实验证明了该物质在其气液面消失的状态下，表面张力作用消失，分子之间的内聚力等于零，临界点干燥仪的设计就依据了这种物理性质，成为较为理想的干燥方法称“临界干燥”。61、 透射电镜主要由电子光学照明系统 、真空系统、电子学系统三大系统组成。其中：光学照明系统包含有：照明系统（有电子枪、聚光镜），成像系统（有样品室、物镜、中间镜、投影镜），观察与记录系统（有观察室、照相室、自动曝光装置）。真空系统包含有：机械泵、油扩散泵、管道及自动阀门系统、冷阱、预抽室、真空干燥器、真空检测系统。电子学系统包含有：交直流电源、高压电源、透镜电源、真空电源与自动控制系统、束偏转，消散器等电源及控制系统安全系统和辅助电源。62、 电子与样品的相互作用会产生多种的信息，基本上分成两大类：一是电子，二是射线。电子有： 1、二次电子，2、背散射电子（反射电子），3、俄歇电子，4、透射电子，5、吸收电子。射线有： 1、X射线，2、阴极荧光。63、 与扫描电镜的成像有关的信息主要有：二次电子、背散射电子、俄歇电子。64、 普通超薄切片术指不需要特殊的冷冻条件的常规包埋切片技术。它包括取材、固定、脱水、渗透、包埋、聚合、切片、染色等几大部分。第一步骤为：取材、固定、脱水：用乙醚使动物轻微麻醉，迅速解剖，准确地取下材料，立即浸入2一5戊二醛进行前固定，并用锋利的双面刀片将样品剁成1mm的碎块，于4固定1小时以上。(如果需要更长时间的前固定，需适时更换新鲜的固定液，并尽可能在4冰箱中保存。)接着用缓冲液处理1030分钟，以洗去前固定液，然后在4下，用1四氧化饿(即饿酸)进行后固定l一2小时。然后进行梯度脱水。第二步骤为：渗透、包埋、聚合、切片、染色：经过脱水和浸透的样品不能直接进行超薄切片，还需要用某种在一定条件下能聚合成硬块的单体树脂，来填充样品的各个空间，然后经固化、修块、超薄切片、电子染色等步骤。65、 分辨本领：德国著名理论光学家Abbe早在100多年前就给出分辨本领：=0.61/nSin，式中，n为物体所处媒介的折射率；为孔径角；为发射光波长。66、 荧光镜检：荧光是一种非温度辐射，是一种冷光（紫外光），是用人眼不可见的一定波长的紫外线作光源照射被检物体；使之受激发后而产生人眼可见的荧光，然后再经显微镜成象系统放大来进行镜检。67、 二次电子：电子束与样品作用将会产生各种效应，主要是样品的二次电子发射，发射出来的电子称为二次电子。它是样品本身的原子的外层电子,被入射电子激发出后形成带有样品形貌和成分等信息的电子,主要反映了样品浅表层的信号,在扫描电镜成像过程中担任主要信息。68、 相衬显微镜的原理及特点：利用被检物体的光程（折射率与厚度之乘积）之差进行镜检的方法，有效地利用光的干涉现象。将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差，是普通显微镜难以达到的一种镜检方法，能使无色透明活体标本的细微结构在相衬显微镜下变得清晰可见。69、 简述透射电镜的成像工作原理：在真空条件下，电子束经高压加速后形成极细的快速电子束流，此时为不带样品信息的入射电子射线。当它与样品发生作用时，由于样品的厚度和质量有差异，能产生多种带有样品信息的讯号，而与透射电镜成像密切相关的有透射电子、非弹性散射电子和小角度弹性散射电子，以及吸收电子。这些带有样品信息的电子束流经物镜作用产生样品的最初放大像，接着经中间镜和投影镜两种电磁透镜再次放大之后，带有样品信息的电子最终激发荧光屏，产生强度不同的可见光，形成能用肉眼观察的电子显微图像。70、 透射电镜主要由哪三大系统组成：透射电镜主要由电子光学照明系统 、真空系统、电子学系统三大系统组成。其中光学照明系统包含有：照明系统（有电子枪、聚光镜），成像系统（有样品室、物镜、中间镜、投影镜），观察与记录系统（有观察室、照相室、自动曝光装置）。真空系统包含有：机械泵、油扩散泵、管道及自动阀门系统、冷阱、预抽室、真空干燥器、真空检测系统。电子学系统包含有：交直流电源、高压电源、透镜电源、真空电源与自动控制系统、束偏转，消散器等电源及控制系统安全系统和辅助电源。71、 简述扫描电子显微镜生物样品制备步骤：研究整体表面的超微结构，是扫描电镜样品制备技术中最常用的，一般方法为：取材：取样时还是要准确，体积不宜过大，以减少不必要的观察量。并且解剖用具要锋利，动作要轻巧，防止因挤压而损伤样品。固定：一般进行双固定，即先用1-3的戊二醛缓冲液在室温或4下前固定，具体时间可根据样品的需要而定，一般单细胞可固定10-30分钟，较大的或较硬的样品可达1-2小时，甚至更长。再用1饿酸缓冲液在4下固定10-60分钟。清洗：对于一些表面凹凸不平较厉害，且粘有许多杂质的样品，在固定的前后都要进行彻底的清洗，以免影响成像的质量。脱水和置换：为了防止样品猛烈收缩，需用系列乙醇或丙酮逐级脱水，一般从30，50，70，80，95至100，每步1015分钟。接着用乙酸异戊酯置换100的乙醇，置室温下，20分钟以上。干燥：这是样品制备过程中很关键的一步，直接关系成像的质量。干燥的方法有：临界点干燥、空气干燥、化学药品干燥和冷冻干燥等。临界点干燥的效果最理想。粘样：在喷涂之前，用导电胶或双面透明胶纸把样品平展地粘在样品台上。喷涂：用离子溅射仪或真空喷涂仪喷涂，要在真空条件下进行，一般喷涂10-20nm厚的金或铝，使样品有良好的导电性，能顺利释放二次电子。为了既能改善图像的亮度和反差，又不掩盖样品的结构，喷涂厚度要适当。72、 显微镜的成像原理：当物体位于透镜物方二倍焦距以内，焦点以外时，则在象方二倍焦距以外形成放大的倒立实像；当物体位于透镜物方焦点以内时，则像方也无象的形成，而在透镜物方的同侧比物体远的位置形成放大的直立虚像。73、 显微镜由那些部分组成的：照明系统包括光源、聚光器、光学放大系统由物镜和目镜组成，机械装置用于固定材料和观察方便，有镜座、镜臂、载物台、镜筒、调焦装置、物镜转换器等74、 什么是分辨率（Resolution），请写出分辨率公式：又称“鉴别率”、“解象力”和“分辨本领”.是指将邻近两点清晰区分辨认的能力。是衡量显微镜性能的又一个重要技术参数。75、 分辨本领：德国著名理论光学家Abbe早在100多年前就给出分辨本领：R=0.61/nSin，n为物体所处媒介的折射率；为孔径角；为发射光波长。76、 如何提高显微镜的分辨能力：分辨本领是由物镜的NA值与照明光源的波长两个因素决定，NA值越大，照明光线波长越短，分辨率就越高。介质折射率越接近镜头玻璃的（1.7）越好；sin的最大值小于1；介质为空气，镜口率一般为0.050.95；油镜头用香柏油为介质，镜口率可接近1.5。77、 放大率的概念：放大率即为放大倍数,是指被捡物镜经物体放大再经目镜放大后，人眼所看到的最终图象的大小对原物体大小的比值。是物镜和目镜放大倍数的乘积。是指长度的放大，而不是指面积的放大。78、 什么是有效放大率：把由显微镜的分辨本领所能分辨开的两点间的距离，放大成相当于人眼能分辨的距离。79、 什么是无效放大率：当选用的物镜数值孔径不够大，即分辨率不够高时，显微镜不能分清物体的微细结构，此时即使过度地增大放大倍率，得到的也只能是一个轮廓虽大但细节不清的图像，称为无效放大倍率。80、 什么是数值孔径（NA）：又称“镜口率”、“开口率”，简写NA或A。数值孔径（NA）是物镜前透镜与被检物体之间介质的折射率（n）和半孔径角（）的正弦之乘积。NA=nsin，是物镜和聚光镜的主要技术参数，是判断其性能高低的重要标志。数值的大小分别标刻在物镜和聚光镜的外壳上。物镜的数值孔径（NA）一般在0.85-1.4之间。81、 什么是像差：从一点发出的光束在通过透镜后，光束的同心性或多或少地受到破坏（由光具有的物理性质及使用的光源的特点以及光具的制作技术而造成），在象空间并不相交于一点，而是分布在一个很小的区域内，所形成的象与理想象在形状、颜色上有着一定的差异，这种差异称为“象差”（Aberration）。82、 常见的像差有哪些：球面像差、彗形像差、像散、像面弯曲、畸变。83、 明场显微镜的优缺点：优点：视野亮度高、均匀，应用范围广，操作简单，价格低，物镜适用于荧光观察；缺点：透明标本对比度低，标本没有立体感。84、 暗视野显微镜原理：根据丁达尔效应原理设计。丁达尔现象：在日常生活中，室内飞扬的微粒灰尘是不易被看见的，但在暗的房间中若有一束光线从门缝斜射进来，灰尘便粒粒可见了，这就是微粒发光。85、 暗视野显微镜成像特点及优缺点：在暗视野中所观察到的是被检物体的衍射光图像，并非物体本身，所以只能看到物体的存在和运动，不能辨清物体的细微结构。但被检物体为非均质时，并大于12波长，则各级衍射光线同时进入物镜，在某种程度上可观察物体的构造。一般暗视野显微镜虽看不清物体的细微结构，但却可分辨0.004um以上的微粒的存在和运动，这是普通显微镜(最大的分辨力为0.2um)所不具有的特性，可用以观察活细胞的结构和细胞内微粒的运动等。多用于：微小粒子、细菌形态、细菌记数，透明标本观察等。86、 相差显微镜原理：基本原理：应用光衍射和干涉原理，把可见光的光程差变成振幅差(明暗差)，使人眼能够分辨。87、 微分干涉显微镜原理：利用特制的渥拉斯顿棱镜来分解光束。分裂出来的光束的振动方向相互垂直且强度相等，光束分别在距离很近的两点上通过被检物体，在相位上略有差别。由于两光束的裂距极小（小于显微镜的分辨率），而不出现重影现象，使图象呈现出立体的三维感觉。88、 浮雕相衬显微镜原理：斜射光照射到标本产生折射、衍射，光线通过物镜光密度梯度调节器产生不同阴影，从而使透明标本表面产生明暗差异，增加观察对比度，提高未染色标本的可见性和对比度；浮雕相衬系统能够产生高反差的3D图像，类似于DIC效果，可用于塑料器皿中的样品。89、 荧光显镜微原理和特点：是用人眼不可见的一定波长的紫外线作光源照射被检物体；使之受激发后而产生人眼可见的荧光，然后再经显微镜成象系统放大来进行镜检。特点：光源为紫外线，波长较短，分辨力高于普通显微镜。检出能力高（放大作用）、对细胞的刺激小（可以活体染色）、能进行多重染色。90、 激光共聚焦显微镜原理和特点：在荧光显微镜成像的基础上装有激光扫描装置，以单色激光作为光源，使样品被激发出荧光，逐点、逐行、逐面快速扫描；利用计算机进行图像处理，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像。能显示细胞样品的立体结构；分辨力是普通光学显微镜的3倍；用途类似荧光显微镜，但能扫描不同层次，形成立体图像。91、 油镜的原理：在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。而在普通光学显微镜配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。与其它物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片和镜头之间加滴镜油，这主要又有如下两方面的原因：1、增加照明亮度，油镜的放大倍数可达100，放大倍数这样大的镜头，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。使用油镜时需在油镜和玻片之间加入与玻璃的折射率（n=1.55）相仿的镜油（通常使用香柏油，其折射率n=1.52），可防止通过介的光线因折射或全反射有所损失。2、增加显微镜的分辨率。92、 固定的目的和作用防止组织自溶和腐败；使细胞内的蛋白质、糖、脂肪等各种成分沉淀保存下来从而保存细胞的各种组成成分使其保持与生活时相近似的形态和结构；因沉淀及凝固的关系，使细胞内不同的成分产生不同的折光率，造成光学上的差别使原来在生活情况下看不清楚的结构变得清晰易见，且有的固定剂还有助染作用(如醋酸、苦味酸)，从而使细胞各部易于染色；固定剂还兼有硬化作用，使柔软组织硬化而不易变形，有利于操作。93、 冲洗的目的：用洗涤剂渗透到材料中，把固定剂洗掉。必须充分冲洗，否则残留的固定液防碍染色，或发生沉淀物或结晶而影响观察，或继续发生作用，破坏材料或影响以后的处理。94、 透射电镜的工作原理：电子显微镜是以电子束作为光源的，电子束的波长比可见光的波长短得多，使电镜的分辨率大幅度提高。用电子束代替光束，用电磁透镜代替玻璃透镜，使用了极短的电子波，能获得极高的分辨本领。其成像是以电子束透过样品经过聚焦与放大后所产生的物像，投射到荧光屏上或照相底片上进行观察。分辨率为0.10.2nm，放大倍数为几万几十万倍。95、 超薄切片过程一般与光学显微镜的石蜡切片过程原则上基本相似，也包括取材、固定、脱水、渗透、包埋、聚合、切片和染色等几个环节。96、 负染色（negativestaining）技术又称阴性反差染色，负染法是将颗粒或者纤维样品分散在具有亲水性支持膜的载网上，然后滴加磷钨酸或醋酸双氧铀等染料，并随即吸去多余染液，样品干燥后残余染料将沉积在样品的周围以及样品的凹陷、缝隙处，而样品本身呈浅色，所以称为负染。97、 扫描电镜的工作过程：从电子枪灯丝发出的直径约2035微米的电子束，受到阳极的1-40kV高压的加速射向镜筒，并受到第一、二聚光镜（或单一聚光镜）和物镜的会聚作用，缩小成直径约几十埃的狭窄电子束射到样品上。与此同时，偏转线圈使电子束在样品上作光栅状的扫描。电子束与样品相互作用将发生多种信号，其中最重要的是二次电子。各种信息的探测要用不同的探测器。二次电子探测器如上所述。二次电子能量很低（小于50eV），受到闪烁片上的高压（+10kV）的吸引和加速射向闪烁片，闪烁片受到二次电子的冲击把电子的动能转变成可见光，光通过光导捧送到光电倍增管。在那里光被高倍放大并转换成为电流。这个电信号经过前置放大、视频放大后，用它去调制显像管的电子束强度。由于控制镜简入射电子束的扫描线圈的电路同时也控制显像管的电子束在屏上的扫描，两者是严格同步的。并且样品上被扫描的区域与显像管的屏是点点对应的。在样品上任何一点上的二次电子发射的强度的任何变化将表现为在屏上对应点的亮度的变化。用这种方法就如电视机屏上的像一样，一点一点，一线一线地组成了像。这个像可以在观察显像管的屏上观察，也可以把照相显像管屏上的像拍摄记录下来