细菌生化试验.doc

1糖类发酵试验（1） 培养基需氧菌适用的培养基配方：蛋白胨 1g，氯化钠 0.5g，蒸馏水 100ml，糖物质 0.5-1g ，0.2%溴麝香草酚蓝水溶液 1.2ml配制：除指示剂外，溶解各成分，调ph值为7.4-7.6，加入指示剂混匀，分装试管。管内事先装有倒置的小玻璃管。经高压灭菌20min。厌氧菌糖发酵培养基配方：蛋白胨 20g，氯化钠 5g，糖物质 10g，硫乙醇酸钠 1g，琼脂 1g，蒸馏水 1000ml， 1.6%溴甲酚紫酒精溶液水溶液1ml配制：除指示剂外，溶解各成分，调ph值为7.2-7.4，加入指示剂，高压灭菌。血清半固体糖发酵培养基配方：0.3%肉膏 100ml，琼脂 0.3g，糖物质 0.5-1g，0.5%酸性复红 2ml，兔血清或小牛血清 10ml。配制：争取0.3%肉膏100ml，加入琼脂，煮沸融化后，加入糖类物质及指示剂，高压灭菌，待培养基冷至50左右，缴入经56灭活30min的兔血清10ml，分装于无菌试管，无菌检查后备用。(2)恒温培养箱，高压锅，电炉，搪瓷缸以及接种针等。实验步骤：（1） 按照上述的培养基配方，根据需要选择配制培养基，高压灭菌并作无菌检查后备用。（2） 取培养18-24h的试验菌，接种于培养基中，置于37培养数小时至2周后观察结果。（3） 结果记录：指示剂由紫色变为黄色，表示糖类发酵产酸，以“+”表示；若指示剂由紫色变为黄色且试管内倒置的小管内有气泡出现，则表示产酸产气，以“o+”表示；若指示剂颜色未改变，则表示对糖类不发酵，以“-”表示。2甲基红（MR）试验器材准备（1） 培养基：葡萄糖蛋白胨水配方：蛋白胨 0.7g，磷酸氢二钾 0.5g，葡萄糖 0.5g，蒸馏水 0.5g。配制：将上述各成分混于蒸馏水中，加热溶解，调pH值为7.2-7.4，滤纸滤过，分装于小试管内，每管3-5ml，加塞包好，高压灭菌。（2） 试剂： 甲基红 0.02g 、95%酒精60ml，蒸馏水40ml.（3） 恒温培养箱、高压锅、电炉、搪瓷缸、玻棒以及接种环。实验步骤（1） 将待检菌接种于培养基中，置于37培养48h。（2） 取少量培养液于另一个试管中，加入几滴指示剂，观察颜色变化，若无颜色变化可继续培养4-5d再进行试验。（3） 结果判定：培养液呈现红色，为甲基红试验阳性，呈现黄色者为阴性。3维培二氏试验（VP试验）器材准备（1） 培养基：同MR试验。（2） 试剂 奥梅拉氏试剂：0.3g肌酸或肌酐溶于100ml40%氢氧化钾即成。贝立脱氏试剂：甲液为6% a-萘酚酒精溶液，乙液为16%氢氧化钠溶液。硫酸铜试剂：1g硫酸铜溶于40ml氨水中，再加10%氢氧化钠至1000ml。（3） 恒温培养箱，高压锅，电炉、搪瓷缸、玻棒以及接种环等。试验步骤（1） 将被检细菌接种到葡萄糖蛋白胨水中，置于37培养48h。（2） 在培养物中加入等量的奥梅拉氏试剂，混合，或1ml培养物加入0.5ml贝立脱氏试剂甲液和乙液振荡混合，观察结果。（3） 结果判定：在0.5min内呈现粉红色反应为阳性；长时间无反应，置于37培养4h或室温过夜，颜色仍不变者为阴性。4，硫化氢试验器材准备（1） 培养基醋酸铅琼脂培养基（一）配方：肉汤琼脂 100ml。硫代硫酸钠 0.25g，10%的醋酸铅水溶液 3ml。配制：加热融化肉汤琼脂，冷至60，加入硫代硫酸钠，使其溶解。调节pH值至7.2，高压灭菌，取出冷至60时加入预防灭菌的10%的醋酸铅水溶液，混匀，无菌分装小试管，直立凝固。醋酸铅琼脂培养基（二）配方：蛋白胨 20g，磷酸氢二钠 2g，葡萄糖 1g，琼脂 2g，10%的醋酸铅水溶液 2ml,蒸馏水 1000ml。配制：将除醋酸铅以外的各成分混合于蒸馏水中，加热溶解，调节pH值为7.0-7.4，然后加入醋酸铅水溶液，混合均匀，分装试管内，高压灭菌，取出摇匀，直立凝固呈柱状。三氯化铁明胶培养基 配方：硫胨 25g，氯化钠 5g，牛肉膏 7.5g，明胶 120g，10%三氯化铁水溶液 5ml。配制：将除三氯化铁水溶液以外的成分混合，加热融化并高压灭菌，趁热加入预先灭菌的10%三氯化铁水溶液，混匀，无菌分装小试管，直立凝固。（2） 恒温培养箱，高压锅，电炉，搪瓷缸等（3） 小试管。玻棒、接种环以及pH试纸等。实验步骤：1醋酸铅琼脂法（1） 用接种针取待检细菌，沿培养基的试管壁作穿刺接种，37培养1-2d，必要时可延长5-7d。（2） 结果判定：延穿刺线的培养基变为黑色为阳性，否则为阴性。2三