霉菌的观察.doc

实验七、霉菌的形态观察09级生科一班安明玉（200900140001）同组者：陈汶灿、陈肖然、程彬、高琳璐、秦瑶一、实验原理1.学习并掌握霉菌形态观察法；2.了解四类霉菌的基本形态。二、实验原理霉菌可产生复杂分枝的菌丝体，分基生菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段后分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝比较粗大（菌丝和孢子的直径达到310m），通常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因而可用低倍、高倍镜观察。霉菌菌丝细胞容易收缩变形，孢子容易飞扬，在制备霉菌标本时，常用乳酸石炭酸溶液作为介质，具有不使细胞变形，可杀菌防腐，不易干燥，能保持较长时间等优点。若加入棉蓝，又具有一定的染色效果。霉菌的有些结构在制片过程中易被破坏，影响观察，可采用载片培养法。此法便于直接在显微镜下观察，尤其适用于根霉的假根、曲霉的足细胞及分生孢子链等结构的着生和生长情况的观察。并且还可以在同一标本上观察到微生物发育的不同阶段的形态。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）其孢子的形态特征是分类的重要依据。例如：青霉的繁殖菌丝无顶囊，经多次分枝，产生几轮对称或不对称的小梗，小梗上着生成串的青色分生孢子，的孢子囊形如“扫帚”。而曲霉的分生孢子梗顶端膨大成顶囊，成球形。可以直接挑取生长在平板中的霉菌菌体制成水封片观察。三、实验材料1.菌种根霉（Rhizopus）的斜面培养物，毛霉（Mucor）的斜面培养物，曲霉（Aspergillus）的斜面培养物，青霉（Penicillium）的斜面培养物；2.实验试剂马铃薯培养基（PDA）（200mL），甘油，二甲苯，香柏油，95%乙醇，蒸馏水；3.实验器材烧杯，玻璃棒，电磁炉，电子天平，称量纸，接种针，三角瓶，U型管，滴管（1mL），解剖刀，滤纸，培养皿，盖玻片，镊子，酒精灯，显微镜，擦镜纸，双层瓶，载玻片。四、实验操作小室培养法1.灭菌a）如附录所示配制PDA培养基及甘油溶液；b）将培养基、甘油溶液及所需实验器材高温灭菌约30min。2.琼脂薄片制作a）将U形管置于培养皿中，再将载玻片置于U形管上；b）用记号笔在培养皿底部外侧画线将其划分为若干1cm1cm小格；c）点燃酒精灯，往培养皿中倒入少量培养基，培养基厚度要尽量薄；d）待培养基凝固后，用解剖刀沿培养皿底部画线将培养基切成小块；e）将切好的培养基小块置于培养皿中的载玻片上，每片上放两小块。3.接种a）点燃酒精灯，在酒精灯火焰上烧接种针杀菌，冷却后，从斜面上蘸取少量霉菌涂在培养基小块边缘，盖上盖玻片，在培养皿侧面贴标签标注菌种，每个菌种接种四个培养基小块；b）滴加23滴甘油于培养皿中的滤纸上以保持培养皿中环境的湿润。4.恒温培养将接种好的培养皿置于28的恒温箱中恒温7天。5.镜检在显微镜下观察四类霉菌的形态特征。五、实验结果1霉菌形态观察图1 根霉的形态观察（1040）图2 毛霉的形态观察（a，1040）图2 毛霉的形态观察（b，1040）图3 曲霉的形态观察（a，1040）图3 曲霉的形态观察（b，1040）图4 青霉的形态观察（1040）2霉菌形态特征列表菌种菌丝有无隔菌丝特点有无假根孢子囊、孢囊孢子的形态特征根霉（Rhizopus）无从孢子梗基部发出匍匐菌丝有假根处向上丛生直立、不分枝的孢囊梗，顶端膨大形成圆形的孢子囊毛霉（Mucor）无从孢子梗基部发出匍匐菌丝有菌丝体上直接生出孢囊梗，各分枝顶端着生球形孢子囊曲霉（Aspergillus）有菌丝体产生大量的分生孢子梗无孢囊梗基部有足细胞。分生孢囊梗顶端膨大成，孢囊球形，其表面长满一层或两层辐射状小梗青霉（Penicillium）有营养菌丝无色或淡色无分生孢子梗亦有横隔，基部无足细胞。孢子梗顶端不形成膨大的顶囊，而是产生帚状体六、思考主要根据那些形态特征来区分上述四种霉菌？答：根霉有匍匐菌丝和假根；毛霉菌丝体上直接生出单生、总状分枝或假轴状分枝的孢囊梗，各分枝顶端着生球形孢子囊；曲霉分生孢子梗生长在足细胞上，并通过足细胞与营养菌丝相连；青霉的分枝成帚状的分生孢子从菌丝体伸向空中，各顶端的小梗产生链状的分生孢子。七、实验小结本次实验中了解并掌握了一种新的实验方法，即小室培养法。通过本方法可以更清晰完整地观察到霉菌各部分的形态特征，但实验操作中培养基注入培养皿的量不容易掌握，且接种的稠密程度也会影响霉菌的观察。附录马铃薯培