实验八_凯氏定氮法.ppt

实验八凯氏定氮法测定样品中粗蛋白的含量 一 实验目的 1 掌握凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理和方法 2 学会使用凯氏定氮仪 二 实验原理 1 消化 有机物中的胺根在强热和CuSO4 K2SO4 浓H2SO4作用下 消化生成 NH4 2SO4 2NH3 H2S04 2H NH4 2S04 2 蒸馏 在凯氏定氮器中与碱作用 通过蒸馏释放出NH3 收集于H3BO3溶液中 NH4 2SO4 2NaOH2NH3 2H2O Na2SO42NH3 4H3BO3 NH4 2B4O7 5H2O 3 滴定 用已知浓度的HCI标准溶液滴定 根据HCI消耗的量计算出氮的含量 然后乘以相应的换算因子 既得蛋白质的含量 NH4 2B4O7 2HCl 5H2O 2NH4Cl 4H3BO3 二 实验原理 1 豆浆粉2 浓硫酸3 混合催化剂 CuSO4 K2SO4 0 4 64 混合指示剂 0 1 甲基红乙醇溶液200ml与0 1 甲烯蓝乙醇溶液50ml混合5 NaOH 40 6 2 硼酸溶液7 0 01N标准盐酸溶液 三 实验器材 四 实验步骤 一 消化精密称取豆浆粉1 0g 移入干燥消化管中 加入混合催化剂6 4g 摇匀后再加入15ml浓硫酸和两颗玻璃珠 放入消化炉中消化 起始电压150V 消化1h后 观察消化管内泡沫变化 泡沫消失后 加强火力到220V 继续消化 至液体呈蓝绿色澄清透明后 再继续加热0 5h 取下消化管放冷 小心加蒸馏水至50ml 混匀备用 取与处理样品相同量的混合催化剂按同一方法做试剂空白试验 二 蒸馏 1 装好蒸馏装置 如图 四 实验步骤 2 洗涤蒸馏装置 在蒸气发生烧瓶中加约70颗玻璃珠 2 3体积的蒸馏水 加入4 5滴浓硫酸及4 5滴混合指示剂 沿小漏斗加入蒸馏水约20mL到反应室 留半漏斗水 保持水封 防止漏气 加热产生蒸气后 立即关闭废液排放管上的开关 蒸气进入反应室 导致反应室内的水迅速沸腾 蒸出蒸气由反应室上端口通过定氮球进入冷凝管冷却 在冷凝管下端放置一个锥形瓶接收冷凝水 四 实验步骤 从定氮球发烫开始计时 连续蒸煮5min 停止加热 冲洗完毕 夹紧蒸气发生器与收集器之间的连接硅胶管 由于气体冷却压力降低 反应室内废液自动抽到蒸汽收集器中 打开废液排出口夹子放出废液 四 实验步骤 3 蒸馏样品 向接收瓶内加入20ml2 硼酸溶液及混合指示液2滴 并使冷凝管的下端插入液面下 吸取10 0ml样品消化稀释液由小漏斗流入反应室 并以5ml水洗涤小烧杯使流入反应室内 将10ml40 氢氧化钠溶液经小漏斗缓缓流入反应室 立即加半漏斗水水封以防漏气 开始蒸馏 蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内 从指示剂开始变色时计时 蒸馏5min 移动接受瓶 使冷凝管下端离开液面 再蒸馏1min 四 实验步骤 三 滴定用少量水冲洗冷凝管下端外部 取下接收瓶 以0 01N盐酸标准溶液滴定至淡紫红色为滴定终点 四 洗涤凯氏定氮仪 按照上述方法 四 实验步骤 五 实验结果 样品的总氮含量 A B 0 1 14 5 1000 C若测定的样品含氮部分只是蛋白质 如血清 则 样品中的蛋白质含量 A B 0 1 14 6 25 5 1000 CA 滴定样品用去