三波长分光光度法测定白桦树皮中缩合鞣质含量.pdf

山东农业大学学报 自然科学版 2 0 0 8 3 9 2 1 8 0 1 8 2 J o u r n a lo fS h a n d o n gA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y N a t u r a lS t i f n e e 三波长分光光度法测定白桦树皮中缩合鞣质含量 孙宏H 张泽2 1 齐齐哈尔大学化学化工学院 齐齐哈尔1 6 1 0 0 6 2 齐齐哈尔市环境监测中心 齐齐哈尔1 6 1 0 0 6 摘要 建立了三波长分光光度法测定白桦树皮中缩合鞣质含量的分析方法 在强酸介质中 硫酸铁铵一铁氰化 钾与缩合鞣质在室温下反应2 0m i n 以儿茶素为标样 对白桦树皮中缩合鞣质进行测定 实验表明 线性范围为 2 斗g m L 一1 4 g m L 一 线性回归方程 A 8 3 3 2 1 c 0 0 7 2 相关系数为0 9 9 9 8 m a x 为3 7 1 2 1 0 4L t o o l c m 检测限为0 3 2p g m L 精密度为0 8 9 回收率为9 5 5 一1 0 0 2 该法操作简单 灵 敏度高 关键词 白桦树皮 缩合鞣质 三波长分光光度法 中图分类号 06 5 7 3 20 6 2 9文献标识码 A文章编号 1 0 0 0 2 3 2 4 2 0 0 8 0 2 0 1 8 0 0 3 D E T E R M I N A T I o No FC o N D E N S A T I o N T A N N I SI NB E T U L AB A R KB YT H R E E W A V E L E N G T HS P E C T R o P H o T o M E T R Y S U NH o n gh Z H A N GZ e 2 1 C h e m i c a la n dC h e m i s t r yE n g i n e e r i n gC o l l e g eo fQ i q i h a rU n i v e r s i t y Q i q i h a r1 6 1 0 0 6 C h i n a 2 Q i q i h a rE n v i r o n m e n tM o n i t o r i n gC e n t e r Q i p i h a r1 6 1 0 0 5 C h i n a A b s t r a c t At h r e e w a v e l e n g t hs p e c t r o p h o t o m e t r i cm e t h o di sp r o p o s e df o rd e t e r m i n a t i o no fC o n d e n s a t i o n t a n n i s i nB e t u l ab a r kb a s e do nt h er e d u c t i o no fp o t a s s i u mf e r r i c y a n i d e a m m o n i u mf e r r i cs u l p h a t eb yC o n d e n s a t i o n t a n n i si nt h ea c i dm e d i u m 卟el i n e a rr a n g ei sf r o m2I x g m L t o1 4 斗g m L 1a n dt h el i m i to fd e t e c t i o ni s 0 3 2 斗g m L 1 1 1 1 ep r e c i s i o nR S Di s0 8 9 T l er a t eo fr e c o v e r yi s9 5 5 1 0 0 2 K e yw o r d s B e t u l ab a r k c o n d e n s a t i o n t a n n i s t h r e ew a v e l e n g t hs p e c t r o p h o t o m e t r y 白桦树皮中富含缩合鞣质 鞣质属多酚类化合物 具有清除体内自由基 阻断N 一亚硝基化合物形成 抑制脂氧化酶活性和脂质过氧化物的特殊功效 儿茶素含多个酚羟基 是组成缩合鞣质的基本单元 极易被氧化 在酸性介质中 儿茶素能将F e 3 还原成F e 2 F e 2 与铁氰化钾发生反应可产生两种化合物 当高铁含量少时 生成滕氏蓝F e F e C N 沉淀 当高铁含量大时 生成可溶性蓝色络合物K F e F e C N 此物质在7 0 3n m 处有最大吸收 采用三波长分光光度法测定茶叶 果品 药物中茶多酚 单宁含 量有报道旧h 旧L H l 但采用该法测定白桦树皮中缩合鞣质的含量未见报道 l 实验部分 1 1 仪器与试剂 L a m b d a 一3 5 型紫外可见分光光度计 P e r k i n E l m e r p H S 一2 5 型p H 计 上海精密科学仪器厂 C S 5 0 1 型恒温水浴 中国重庆银河仪器有限公司 儿茶素标准溶液 0 1m g m L 一 准确称取儿茶素 中国药品生物制品检定所 标样5m g 溶于少量 收稿日期 2 0 0 7 0 3 2 1 基金项目 黑龙江教育厅科研项目 1 0 5 5 1 3 3 4 和齐齐哈尔市工业攻关项目 4 0 7 3 6 作者简介 孙宏 1 9 6 4 一 女 教授 主要从事天然产物分离与分析 通讯作者 A u t h o rf o rc o r r e s p o n d e n c e E m a i l s u n l 9 6 4 2 1 4 1 6 3 C O r n 万方数据 第2 期 孙宏等 三波长分光光度法测定白桦树皮中缩合鞣质含量 1 8 1 水中 加1 2 滴冰醋酸后 定容至5 0m L 现用现配 硫酸铁铵溶液 0 1m o l L 1 准确称取4 8 0 0 0g 溶于水并加入1 2m L 浓硫酸 溶解后定容2 5 0m L 铁氰化钾溶液 0 0 1t o o l L 叫 准确称取0 3 2 9 0g 用水定容至1 0 0m L 磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲溶液 p H 2 2 取2m L0 2m o l L 一的N a 2 H P O 于1 0 0m L 容量瓶中 加0 1 m o l L 1 的柠檬酸溶液定容 以上所用试剂均为分析纯 试验用水为蒸馏水 所用白桦树皮采自大兴安岭地区加格达奇林业局 1 2 缩合鞣质的提取及定性鉴定 取干燥后粉碎的白桦树皮粉末3g 加入1 0 0m L 水于1 0 0 回流提取3 0m i n 准确移取提取液5m L 定容至1 0 0m L 该提取液与三氯化铁反应显灰绿色 1 3 实验方法 移取儿茶素标准溶液0 4m L 至5m L 比色管中 依次加入0 7m L0 1m o l L 一的酸性硫酸铁铵溶 液 铁氰化钾溶液0 1m L 用N a H P 0 一柠檬酸缓冲溶液定容 以试剂参比为空白 用1c m 比色皿在波长 4 0 0 1 0 0 0n m 范围内扫描 绘制吸收曲线 用作图法确定出3 个测定波长 入 4 8 0n m 入 7 0 1n m 入 1 0 0 0n m 分别记录3 个波长处吸光度 2 结果与讨论 2 1 三波长的选择 采用计算法 根据吸收曲线选择入 和入 由作图法找到近似波长入 根据数学推导可求得 A 值与 待测物浓度成正比 因而可通过 A C 曲线求出样品中待测组分的含量 如选择的三个波长对应于吸收 曲线上三点处在一条直线上 则测得的 A 值为零 因此 当干扰组分的吸收光谱为一直线 如浑浊干 扰 只要在曲线上找到处在一条直线上的三点 在此三点对应的波长处测定 由于干扰物在此三波长处 的 A 值为零 故测得的 A 只与待测组分的浓度有关 2 2 体系最佳测定条件的选择 2 2 1 温度和酸度影响实验表明 当温度高于4 0 时 开始有滕氏蓝沉淀 温度继续升高 沉淀量迅 速增多 吸光度迅速减小 考虑实际操作方便 在室温下较好 当溶液p H I 3 0 时 吸光度明显减小 这是 因为高铁离子在弱酸性或碱性条件下会发生水解反应 形成配合物离解所致 反应应在强酸性条件下进 行 选择N a 2 H P O 一柠檬酸缓冲溶液 p H 2 2 为反应介质 表1 表1酸度对体系吸光度的影响 T a b l e1T h ec o l o r i n gr e s u l to fd i f f e r e n tp H 出Q Q 竺 A l 0 2 5 40 2 6 60 2 9 30 3 9 00 3 8 9 0 3 5 10 2 2 9 A 2 0 6 0 70 7 7 30 9 4 21 0 1 51 0 0 1 0 7 8 50 5 6 8 A 3 0 1 7 80 1 7 90 1 9 80 2 1 00 1 9 60 1 6 30 1 5 7 A AO 3 9 7O 5 5 70 7 0 3O 7 2 90 7 2 3 0 5 4 20 3 8 4 2 2 2 硫酸铁铵用量和显色反应的稳定性实验表明 硫酸铁铵溶液用量为O 7m L 时 吸光度最大 表 2 当显色反应2 0m i n 时的溶液吸收值最大 随后吸光度逐渐减小 超过1h 后出现滕氏蓝沉淀 故显色 反应时间为2 0r a i n 表2硫酸铁铵用量对体系吸光度的影响 T a b l e 2T h ec o l o r i n gr e s u l to fd i f f e r e n tA m m o n i u mf e r r i cs u l f a t e 万方数据 1 8 2 山东农业大学学报 自然科学版 第3 9 卷 2 3 标准工作曲线及方法检出限 按实验方法在比色管分 J t I A 0 1 0 2 0 3 0 4 0 5 0 6 0 7m L 儿茶素标准溶液 以试剂参比为空 白 测定三波长下的吸光度 实验表明 线性回归方程 A 8 3 3 2 1 c 0 0 7 2 线性范围为2I x g m L 1 4 P g m L 相关系数R 为0 9 9 9 8 一为3 7 1 2 1 0 4L m o l e m 取试剂空白 以蒸馏水为参 比 平行测定1 1 次 由3 R S D S 求得检测限为0 3 2l t g m L 1 4 0 习l 2 0 台1 0 0 七0 8 0 o 皇0 6 0 篓o 4 0 餐0 2 0 O o o 00 0 0 60 0 1 浓度C o o n c e n t r a t i o n m g m 1 图1儿茶素的标准工作曲线 F i g 1 C a l i b r a t i o nc u r v eo fC a t e c h i n 2 4 干扰实验 由于鞣质属多酚类物质 故含有酚羟基的物质和还原性物质均产生干扰 本文选择苯酚 对苯二酚 间苯二酚 焦性没食子酸四种物质进行研究 实验结果表明 苯酚含量低于1m g 间苯二酚含量低于0 5 m g 对苯二酚低于0 0 1 m g 没食子酸低于0 1 5m g 时不会产生明显干扰 样品中的纤维素和三萜类物质 的吸收峰的波长与儿茶素相差很多 不形成干扰 2 5 样品测定及方法的回收率和精密度 取白桦树皮提取液0 1m L 按实验方法测得缩合鞣质的含量O 1 2m g m L 即每克样品缩合鞣质 含量为0 2 0m g 再取白桦树皮提取浓缩液 采用药典中锌离子络合滴定法 测定鞣质的含量为每克样品 缩合鞣质含量为0 1 9m g 测定结果略低于光度法 可能是还原性物质干扰 分别移取0 1m L 提取液 加入相当于样品量1 倍 2 倍 3 倍的标准物 在选择波长下测定 样品的回 收率在9 5 5 1 0 0 2 之间 取标液0 4m L 在实验选定的条件下连续测定1 1 次 其重现性良好 精密度R S D 为0 8 9 3 结论 采用硫酸铁铵一铁氰化钾一N a H P O 一柠檬酸体系三波长分光光度法测定白桦树皮中缩合鞣质的含 量 与锌离子络合滴定法测定结果相近 且更方便快速 重现性好 适于微量分析 为开发和利用这一丰富 的自然资源提供了定量依据 可实际推广 参考文献 1 程书钧 何其傥 黄茂端 绿茶提取物抑制T P A 促癌作用及其机制的研究 J 中国医学科学院学报 1 9 8 9 l l 4 2 5 9 2 6 4 2 陈湘宁 綦菁华 碳酸钠一苯酚溶液测定柿子中单宁含量方法的研究 J 2 0 0 4 5 6 2 一 3 郎惠云 廖小玲 差示分光光度法测定茶多酚的含量 J 分析科学学报 2 0 0 3 1 9 2 1 5 1 1 5 3 4 魏毅 王鹃 香荚兰素比色法测定茶多酚I I 含片中儿茶素的含量 J 中国中药杂志 1 9 9 9 2 4 6 1 3 万方数据 三波长分光光度法测定白桦树皮中缩合鞣质含量三波长分光光度法测定白桦树皮中缩合鞣质含量 作者 孙宏 张泽 SUN Hong ZHANG Ze 作者单位 孙宏 SUN Hong 齐齐哈尔大学化学化工学院 齐齐哈尔 161006 张泽 ZHANG Ze 齐齐哈尔 市环境监测中心 齐齐哈尔 161006 刊名 山东农业大学学报 自然科学版 英文刊名 JOURNAL OF SHANDONG AGRICULTURAL UNIVERSITY NATURAL SCIENCE EDITION 年 卷 期 2008 39 2 参考文献 4条 参考文献 4条 1 程书钧 何其傥 黄茂端 绿茶提取物抑制TPA促癌作用及其机制的研究 期刊论文 中国医学科学院学报 1989 04 2 陈湘宁 綦菁华 碳酸钠 苯酚溶液测定柿子中单宁含量方法的研究 期刊论文 食品科技 2004 05 3 郎惠云 廖小玲 差示分光光度法测定茶多酚的含量 期刊论文 分析科学学报 2003 02 4 魏毅 王鹃 香荚兰素比色法