白细胞计数sop文件.doc

1 检验目的: 1.1 参考值： 4.0-10.0X109/L1.2 临床意义：1.2.1 生理变化：因年龄，日夜变化，运动，疼痛与情绪作用，妊娠分娩等因素有所变化。1.2.2 病理变化：1.2.2.1 增高：大部分化脓细菌所引起的炎症、尿毒症、严重烧伤、传染性单核细胞增多、传染性淋巴细胞增多，急性出血、组织损伤、大手术、白血病等。1.2.2.2 减低：病毒感染、伤寒、副伤寒、黑热病、疟疾、再障、极度严重感染，防射线，肿瘤化疗后，非白血性白血病等。2 检验程序的原理：2.1 XE-2100采用一束半导体激光照射标本，并依据每个细胞产生的三种信号来相互区分，即前向散射光，侧向射散光和侧向光和侧向荧光。前向散射光反映细胞体积，侧向散射光反映细胞内涵物，如核和颗粒，侧向荧光反映细胞脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。2.2 DIFF通道：表面活性剂可完全溶解红细胞和血小板，部分溶解白细胞。第2种试剂使核酸染上颜色。XE-2100的DIFF通道可将白细胞分成4类。在STROMATOLYSER-4DL试剂中的表面活性剂可溶解或破坏红细胞和血小板，并在白细胞膜上打出小孔。在STROMATOLYSER-4DL试剂中的聚次甲基染料可进入破损白细胞，与核酸和细胞器结合，经波长633nm的激光照射，所产生荧光强度与细胞核酸含量成一定比例。在在STROMATOLYSER-4DL试剂中的有机酸能与嗜酸性颗粒特异结合，根据侧向散射光信号强度，能提高嗜酸性粒细胞从中性粒细胞区分出来能力。2.3 WBC/BASO通道：在XE-2100中，此通道运用前向和侧向散射光信号。酸性试剂可引起除嗜碱性粒细胞外的红细胞(影红细胞)、血小板(影血小板)和白细胞(裸核)溶解和皱缩。因而此通道可检测白细胞数和嗜碱性粒细胞数。在STROMATOLYSER-FB试剂中的表面活性剂作用细胞可形成影红细胞，影血小板和除嗜碱性粒细胞外的裸核白细胞。根据前向散射光信号，使嗜碱性粒细胞和其他细胞容积差异而区分。前向散射光强度代表细胞体积，侧向散射光代表细胞殘余物复杂性。嗜碱性粒细胞形成独立群体。核殘余物也可从影细胞中区分出来。嗜碱性粒细胞和裸核数之和代表白细胞总数。有核红细胞也包括在内。2.4 NRBC通道：在NRBC通道中，表面活性剂可使红细胞和血小板皱缩，使白细胞和有核红细胞核酸染色。XE-2100应用半导体激光束照射标本，根据侧向荧光和侧向散射光信号来计数有核红细胞。在在STROMATOLYSER-NR试剂中表面活性剂可溶解红细胞膜，仅留下有核红细胞核，白细胞膜不被溶解，胞质完整。在STROMATOLYSER-4DL试剂中的聚次甲基荧光染料，可渗入白细胞胞膜，使细胞器染上颜色。根据荧光强度的差异可将细胞分成2组，根据前向散射光信号、容积差异可将有核红细胞和影细胞区分出来。3 性能参数：3.1精密度（重现性）全血模式：3.0%或更低(4.0 103 / 微升或更高)末梢血模式：5.0%或更低(4.0 103 / 微升或更高)3.2准确度：在3%范围内，或在0.20 103 / 微升范围内（在10%之内）3.3线性全血模式：在3.0%或0.3 103 / 微升范围内（0 100.0 103 / 微升）末梢血模式：在5.0%或0.5 103 / 微升范围内（0 100.0 103 / 微升）4 原始样品系统4.1受检者的准备：病人避免采血前剧烈活动。4.2用含EDTA-K2抗凝剂的真空采血管，肘静脉采血1ml，轻轻混匀，室温4小时内完成检测，不能在4小时内检测的标本，放置于冷藏冰箱（28）中保存，8小时内有效，使用前从冰箱中取出回复室温后检测。4.3注意事项：4.3.1防止溶血：混匀时不可用力震荡，避免产生大量气泡。4.3.2避免淤血：止血带压迫时间不宜过长，最好不超过半分钟。4.3.3标本不能从输液管中或输液手的同侧静脉采集。4.3.4穿刺时须防止穿刺针刺扎采血员，以避免血液中传染性病原如肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒等以及血液中未知的可致病成分污染采血员。4.3.5抗凝管应贴有标签，并清楚注明病人姓名。5 容器和添加物类型：含EDTA-K2抗凝剂的真空采血管,有条形码的贴上条形码。乳胶手套、试管架6 要求的设备和试剂6.1设备：Sysmex XE-2100全自动血细胞分析仪6.2 试剂厂商：Sysmex公司 6.2.1试剂及包装：配套试剂包 CELLCLEAN 清洁液 (CL-50)试剂名称简写样品数每盒容量CELLPACKEPK50020LSTROMATOLYSER-4DLFFD10002LSTORMATOLYSER FBFBA1000SULFOLYSERSLS1000500mlSTROMATOLYSER-4DSFFS105042mlCELLSEATHSE6.3试剂稳定性：6.3.1原包装试剂储存在15-30，至标签所示失效日期。6.3.2试剂如出现混浊或絮状物则失效。7 校准程序（计量学溯源性）7.1校准品商品名称：SCS-10007.2校准前检查：7.2.1确认校准品瓶上批号和有效期于靶值表一致，没有过期。7.2.2确认是否按厂家建议进行仪器保养。尽可能不要再进行保养或试剂更换的当天进行校准或校准校验。7.2.3浏览最近的质控数据，确保分析仪性能稳定。7.2.4在仪器上登记试剂的批号和有效期。7.2.5进行自动清洗，确认空白表示没有超出规定范围。7.3校准准备：请严格遵守以下步骤，这对于保证SCS-1000校准品的性能正确非常重要。从冰箱或包装取出1瓶SCS-1000，放置30分钟使其温度升至室温（18-25）。保持瓶子直立的状态将其放在双手掌中轻轻滚动20秒，然后将其颠倒后再滚动20秒以上。轻轻来回倒转12次使其混合均匀，确保所有细胞都已经悬浮起来。进行分析前在平面上静置瓶子15秒，使泡沫散去。7.4校准步骤：注意：SCS-1000的分析必须在开放模式进行，此时仪器设定为维修程序-“特殊模式”-菜单的“质控血模式”。使用质控血模式可防止出现WBC通道错误。关于进入维修程序的方法，请咨询技术服务代表。7.4.1在开放模式下连续进行6次分析。在分析当中不要混匀校准品。7.4.2每次分析结束后，使用洁净无屑的纸巾或纱布拭净瓶子及瓶盖螺纹，之后盖上瓶盖。7.5平均值的计算及校核数据7.5.1排除第1次分析结果。7.5.2计算其余5次分析结果的平均值，确认各参数的平均值都在可接受极限范围内。7.5.3如果某个参数的平均值超出了可接受极限范围，并内部质控和/或室间质控的结果也显示出类似偏差，表示需要重新校准分析仪。7.5.4计算新的校准设定系数。7.6校准的频率：7.7.1一般情况：每年校准2次上半年一次下半年一次。7.72其他情况：试剂商更改，排除各种原因后的质控未能通过，主要部件更换后，仪器远距离搬动，或严重故障须重新校准。仪器进行维修和保养校准后需做质控，校准后比对失败，工程师应验证质控品是否变质，在市内质控历史数据和室间质控数据表示良好时校准品可能变质，需更换重新校准，直至通过校准。7.8校准验证：校准后及时进行验证，内容包括：精密度、线性、校准前后病人标本结果比对、新鲜血close和open进样模式结果比对、质控、白细胞分类手工和仪器分类方式的比对，由实验室操作人员完成。8 程序步骤8.1 打开电脑，单击OK，同时按下Ctrl，Alt及Delete键进行登录。8.2 在登录框中单击OK，出现XE-2100登录信息，在用户名一栏中键入“admin”，并单击OK。8.3 检查废液是否已满，并倒空。8.4 开主机电源并进行登录。8.5 仪器进行自动冲洗及本底检测，如本底在范围以内，主机屏幕上将出现登录信息。如本底超出正常范围，将出现错误提示。需要在登录完成后，再次进行自动冲洗。8.6 按一下主机上的NUM/ALPH鍵切换为字符输入，然后，在登录名一栏中鍵入“ADMIN”，登录操作菜单。8.7 每天测试质控全血，从冰箱取出质控全血，包括e-check两支，临检中心质控品一支，室温放置15分钟后检测。选择QC，分别选中相应质控全血的批号，以手工进样方式检测各质控品，每次检测结束选择OK确认，在主机电脑上观察质控结果，如在靶值范围，则可进行样本测试； 如失控则需寻找失控原因，解决后再重做质控，各参数完全在控方可检测样本。8.8 标本检测：选sampler键，以架号为1，位置号为1，起始样本号为1，检测方式为自动进样，检测参数为CBC+DIF,将样本依次放入样本架内，选sampler即开始检测。8.9 开始分析标本。9 质量控制程序：9.1质控品：9.1.1质控品品牌：Sysmex（中、低值2个水平e-CHECK）9.1.2储存条件： 28（每日须复核一次冰箱温度）。9.1.3使用期限： Sysmex e-CHECK质控开瓶后14天。 9.1.4质控品开启后应注明开启日期，失效期并签名。9.2质控频率：每天开机后在标本检测前进行一次质控品的分析（至少做两个水平质控）。9.3质控操作：从冰箱中取出e-CHECK，使用前检查有效期及状况（如极度溶血或失效，应及时更换）,在室温环境下（1830）静置15分钟。保持瓶子直立状态在双掌中轻轻滚动10次，将其颠倒再滚动10次，此过程反复8次，总共持续两分钟左右，再将质控品上下颠倒10次混匀至红细胞完全混合，在质控分析上选择相应批号质控文件，然后选择“执行”； 将质控物混匀后置于手工吸样针下方，按绿色“START”开关；分析完成后，接受数据；在IPU中单击“质控”，查看质控图。9.4质控期望值：至少满足2个e-CHECK在靶值极限值内，记录质控结果后开始做标本。9.5失控时应采取的措施：质控结果超出期望值时，需查找原因，检查质控品是否在有效期内，过期或近过期需更换新的质控品,检查试剂情况，是否需更换。再检查仪器的各项参数是否在控，如各项检查操作后质控仍失控则联系工程师，责任人需通知组长。与此同时联系急症病人相关医生，如为急诊标本及时送往门急诊化验室检测。直至质控通过，开始做标本。9.6每次失控必须分析原因，记录处理过程并签名。失控记录夹入指定的文件夹内保存，保存期为二年。9.7更换批号后靶值设定：取开始10次QC结果，计算均值，为靶值，靶值应落在厂商提供的范围内，以累计6个月CV%均值（或近两个月CV%较大值），通过均值乘以CV%=1SD, 质控范围设定为2.7SD。由组长或组长指定人员负责计算。9.8定期打印质控曲线，曲线上注明使用质控品的批号和效期，并签上责任人姓名。9.9所有室内质控打印及记录夹入指定的文件夹内保存，保存期为二年。9.10每日由操作员记录质控状况与X-barm记录于记录本。10 干扰（如乳糜血、溶血、胆红素血）和交叉反应10.1严重的黄疸或脂血使血红蛋白结果假性增高。10.2红细胞冷凝集可使红细胞和血小板计数结果假性减低，白细胞假性增高(电阻抗法)或假性减低(激光法)和MCV假性增高。10.3冷凝球蛋白增高使白细胞和血小板计数结果假性增高。10.4有血小板凝集者可使血小板计数结果假性减低。11 生物参考区间参考区间（正常人群参考范围）是检测正常个体得出的。每一个参数的范围用95%可信区间计算而得。参数女性范围(n=133)男性范围(n=182)WBC3.98-10.044.23-9.07*女性的年龄范围为21-41岁，平均年龄为24.5岁.12 患者检验结果的可报告区间WBC： 109/L13 警告/危机值13.1危机值：如遇以下危急值，应上报临床科室，并记录在危急值报告记录表(电话上报时接听者需复述)：WBC 40.0109/L。13.2异常报警信息：WBC异常：WBC Abn ScattergramWBC散射图异常Leukocytosis白细胞增加Neutropenia嗜中性粒细胞减少Neutrophilia嗜中性粒细胞增加Lymphopenia淋巴细胞减少Lymphocytosis淋巴细胞增加Monocytosis单核细胞增加Eosinophilia嗜酸性粒细胞增加Basophilia嗜碱性粒细胞增加Leukocytopenia白细胞减少WBC怀疑：Blasts?原始细胞Immature Gran?未成熟粒细胞Left Shift?左移Atypical Lympho?异形淋巴细胞Abn Lympho/L-Blasts?异常淋巴/原始淋巴NRBC有核红细胞14 安全防护措施14.1使用时的特殊要求XE-2100D仅适用于人血或人工质控血的体外分析，无其它指定用途。使用条件还包括按规定拆卸清洁和保养。14.2通用要求操作前先阅读本手册。弄清手册和仪器上有应注意的标志。妥善保管手册以备今后参考。必须按照手册说明启动仪器。14.2.1长发、手指和衣服必须与旋转部件保持一定距离；如果仪器发出异味或冒烟，立即关掉总开关，拔掉电源线。14.2.2不要让仪器中的血样或试剂溅出，也不要让其它东西掉入仪器。否则，会引起短路。如果发生上述情况，请立即关掉总开关，拔掉电源线，并与Sysmex代理商联系。14.2.3请勿触摸仪器的电路，尤其不能用湿手，否则会有触电危险。14.2.4仪器必须连接在电压正确的电源插座上，并注意接地。14.2.5避免损坏电源线。勿将任何设备压在电源线上。不能拉电源线。14.2.6在连接其它设备（主计算机、打印机）之前必须将仪器电源关闭。14.3安装14.3.1仪器必须在干燥、无灰尘的地方安装。14.3.2防止水溅到仪器上。14.3.3勿将仪器暴露于温差大和太阳直射的地方。14.3.4避免震荡和振动。14.3.5安装地点必须通风良好。14.3.6避免在发出噪音的设备旁安装仪器，如录音机、离心机等。14.3.7不能在贮存化学品和产生气体的地方安装仪器。14.4防止感染14.4.1一般说来，仪器所有的部件和表面都有潜在的传染性。14.4.2操作、保养、服务或修理仪器时必须穿防护衣，戴橡皮手套。工作完毕后，用消毒液洗手。14.4.4勿徒手接触废弃物，以及接触过废弃物的部件。14.4.5如果不小心接触了有传染性的物质或表面，立即用水彻底清洗皮肤，然后按照实验室消毒规程操作。14.4.6即使是质控品，也是有传染性的。进行质控时，也应穿防护衣，戴橡皮手套。14.5试剂处理14.5.1检查试剂包装上的标志。14.5.2避免直接接触试剂。试剂会刺激眼睛、皮肤和粘膜。14.5.3如果皮肤接触了试剂，立即用大量清水冲洗。14.5.4如果眼睛接触了试剂，立即用大量清水冲洗，并立即就医。阅读试剂安全使用说明书。14.5.5实验室建立一整套急救措施是非常必要的。14.5.6避免试剂与灰尘、污物或细菌接触。14.5.7试剂必须在有效期内使用。14.5.8妥善处理试剂，防止产生气泡。请勿摇晃！试剂运输后不能马上使用。14.5.9勿将试剂溅出。如果溅出，用