细菌个数的测定.docx

对返排液杀菌效果的测试方法实验原理：推测返排液主要的细菌为硫酸盐还原菌、铁细菌和腐生菌。通过加入不同杀菌剂，测量加入前后细菌含量，得出不同杀菌剂的杀菌率，优选效果最好的杀菌剂。实验仪器：1) 硫酸盐还原菌（SRB）测试瓶；2) 铁细菌（IB）测试瓶；3) 腐生菌（TGB）测试瓶；4) 注射器：1ml；5) 恒温培养箱；6) 电热消毒器。实验步骤：1) 将测试瓶排成两组，并编号；这是二次重复法，三次重复法方法类似，不过要把测试瓶分为三组。2) 用120消毒20min的无菌注射器取1.0ml水样注入第一组1号瓶内，充分震荡；3) 用另一只无菌注射器从第一组1号瓶中取1.0ml水样注入第一组2号瓶；4) 再更换无菌注射器从第一组2号瓶取1.0ml水样注入第一组3号瓶；5) 以此类推一只稀释到最后一瓶为止。根据细菌含量决定稀释瓶数，一般稀释到7号瓶；6) 将杀菌剂加入到所测试的水样，用无菌注射器去1.0ml杀菌后的水样注入到第二组1号瓶内；7) 用另外一只无菌注射器从第二组1号瓶去1.0ml水样注入第二组2号瓶；8) 以此类推。根据细菌含量决定稀释瓶数，一般稀释到7号瓶；9) 将上述测试瓶放入放入恒温培养箱中培养，温度控制在37，7d后读数；10) 用下列公式计算杀菌率： Y=B1-B2B1100% Y杀菌剂的杀菌率，%；B1加杀菌剂前水样中细菌含量，个/ml;B2加杀菌剂后水样中细菌含量，个/ml。备注：一、注意事项1) SRB测试瓶变黑或者有黑色沉淀，表示有硫酸盐还原菌；TGB测试瓶由红变为黄或浑浊，表示有腐生菌；IB测试瓶出现棕红色沉淀，表示有铁细菌。2) 杀菌剂的加量为50mg/L;3) 在室温下向水样注入杀菌剂，杀菌时间为4h；4) 腐生菌的培养时间是5d7d；铁细菌的培养时间是7d14d，硫酸盐还原菌的培养时间是14d21d。5) 测试瓶大概为3元/瓶。二、读数方法：1.生长指标的确定原则：1) 全部呈阳性反应的最后一列平行样应为生长指标的第一位数。2) 同一平行样，有X个阳性反应瓶，生长指标即为X。2.级数的确定原则：1) 全部呈阳性反应的最后一列平行样的瓶号数减去1，即为级数n，以10n表示。2) 1号瓶的2或3个平行样未全部发生阳性反应时，级数为0，即为100。3.细菌测试瓶测试方法及结果报告示例例：做三个平行样重复试验，每个样稀释5个梯度：123451234512345即分别在1、1、1号瓶中注入1ml水样，摇匀后取出1ml再分别注入2、2、2号，摇匀后取出1ml再分别注入3、3、3瓶中，以此类推直至注入到5、5、5号瓶。在恒温下放置一段时间后，观察测试瓶阳性（变色）反应个数。即：1+23451+2+3+451+2+345所以读数为：321；级数：100（1-1=0）此生长指标为321，级数为100。通过查表可知，321对应的细菌量为15个/ml，此系列报告结果为：15 100=1500个/ml。1+2+3+4+5+1+2+3+45+1+2+3+45此生长指标为312，级数为102（3-1=2）。通过查表可知312对应的细菌量为11.5个/ml。此系列报告结果为：11.5102=1173个/ml。1+2+3+4+5+1+2+3+4+5+1+2+3+4+5+ 3 0 0此生长指标为300，级数为104（5-1=4）。通过查表可知，300对应的细菌量为2.5个/ml。此系列报告结果为2.5104=2600个/ml。例子11列2列3列4列5列+此生长指标为321，级数为100（1-1=0）。通过查表可知，321对应的细菌量为15个/ml。此系列报告结果为15100=1500个/ml。例子21列2列3列4列5列+此生长指标为311，级数为2（3-1=2）。通过查表可知，311对应的细菌量为7.5个/ml。此系列报告结果为7.5102=765个/ml。例子31号瓶2号瓶3号瓶4号瓶5号瓶+此生长指标为211，级数为1（2-1=1）。通过查表可知，211对应的细菌量为13个/ml。此系列报告结果为13101=1313个/ml。例子41号瓶2号瓶3号瓶4号瓶5号瓶+此生长指标为111，级数为0（1-1=0）。通过查表可知，111对应的细菌量为2.0个/ml。此系列报告结果为2100=200个/ml注：a) 做几个平行样对应查几次重复计数表（即生化检测方法中的MPN表）。b) 计算公式为：发生阳极反应瓶号数-1=级数，即在结果后应10n。如1号瓶级数为0级，即在结果后100；2号瓶级数为1级，即在结果后101.c) 如果第一列（1、1、1）未全部发生阳性反应，报告结果应注明“”；d) 如果至最后一列（5、5、5）全部发生阳性反应，报告结果应注明“”，此情况下说明细菌量大，应增加测试瓶个数以求得较准确的结果。e) 测试瓶注入水样后应用力摇晃，以保证结果的准确性；逐级稀释水样时，应更换无菌注射器，以保证结果的准确性。附录 细菌量统计表1.稀释法三次重复菌量统计见表1：表1 稀释法三次重复菌量计数表生长指标细菌量；个/ml生长指标细菌量；个/ml生长指标细菌量；个/ml0000.02011.43026.50010.32022.03104.50100.32101.53117.50110.62112.031211.50200.62123.031316.01000.42202.03209.51010.72213.032115.01021.12223.532220.01100.72234.032330.01111.12303.033025.01201.12313.533145.01211.52324.0332110.01301.63002.5333140.02000.93014.02.稀释法二次重复菌量统计见表2：表2 稀释法二次重复菌量计数表生长指标细菌量；个/ml生长指标细菌量；个/ml生长指标