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J o u r n a l o f On c o l o g y 2 0 0 8 V 0 1 1 4 N 0 6 肿瘤干细胞在肿瘤研究中的进展 R e s e a r c h P r o g r e s s in C a n c e r S t e m C e ll s ff W E N X u e 文雪梅 大连市第i人民医院 辽宁大连 1 1 6 0 3 3 摘要 肿瘤干细胞学说认为肿瘤组织 中有极少量肿瘤干细胞具有启动 和维持肿瘤 恶性 表达 的潜能 找到肿 瘤干细胞并 了解其 生物学特性 对 解肿瘤的发生 发展及 转归机制 根治肿瘤 防止肿瘤复发及克服肿瘤耐药具有积极意义 文章就肿瘤 干细 胞研究 的新进展作一综述 主题词 肿瘤干细胞 肿瘤 中 图分 类 号 R7 3 0 2 文献 标 识 码 A 文 章 编号 1 6 71 1 7 0 X 2 0 0 8 0 6 0 5 1 2 0 4 早 在 2 0世纪 6 0年 代就 已经有 人提 出肿 瘤 干细 胞 学说 认 为肿瘤 组织 中存在 极少 量 干细 胞 样癌 细 胞亚群 它具有无限增殖的潜能 在启动肿瘤形成和 生长中起着决定性的作用 而其余 的大多数细胞 经 过短暂的分化 最终死亡 肿瘤干细胞只占肿瘤细胞 总数的极小 比例 约为 0 1 1 0 具有 自我更新能 力 能够 分 化 为表 型不 一 致 的癌 细 胞 并 且 能够 维 持肿瘤 的生长和扩大 这与组织中正常干细胞维持 组织更新和修复损伤的机制很相似 有学 者提 出肿 瘤细 胞起 源于 干细胞 认 为肿 瘤 细胞最重要的特性是具有无限增殖能力 分化细胞 已失去增殖能力或增殖能力有限 如果发生转化首 先需 突 变获得 增殖 能力 或永 生化 而干 细胞 已具 有 此能力 只需突变获得过度增殖能力 比分 化细胞需 要 的突变 次数 少 所 以干细胞 比分化 细胞 易发 生转 化 目前一些科学家认 为肿瘤发生之前必须积累许 多基 因 突变 而干 细胞也 许是 能长 时间存 活 以接 受 所有突变的惟一一种细胞 其他种类的细胞仅分裂 几 次就死 亡 了 而 干细胞 却具 有 罕见 的几 乎无 限 的 自我更新能力 当它们分裂时 一个子细胞可完整地 复制 成母 细胞 而另一 个子 细胞 则走 向成熟 经 过短 暂分化 最终死亡 1 个正常细胞成为转化细胞至少 发生 4 7个 突变 这需 要 几 年甚 至 几 十年 时 问 干 细胞 是一直 存在 的 而分化 细胞 则周期 性更 新 所 以 通讯作者 文 雪梅 收稿 日期 2 0 0 7 1 0 2 5 51 2 突变更 容易 在 干细胞 中 累积 从 这几 方 面 的原 因 可 以推测 肿瘤 细胞 的突变 最早 发生 于 干细胞 干细胞 是 突变 的靶 1 肿瘤干细胞在 白血病 中的研 究 肿 瘤 干细 胞 的 研 究 最 初 是在 白血 病 中取 得 突 破 在 白血病 及多发 性 骨髓瘤 中只有极 少数 肿瘤 细 胞 亚 群能广 泛增 殖 如从 鼠腹 水 中得 到 的骨髓 瘤 细 胞 在体外进行克 隆实验 结果仅有 1 1 0 0 0 0 1 1 0 0 的癌 细胞能 形成 克隆 生长 这些 形成 克 隆 的 白血病 细胞可能就是白血病干细胞 即多数的白血病细胞 不能过度增殖 而只有少数 固定的细胞亚群才能不 断 地 形 成 克 隆 此 观 点 由 D i c k在 1 9 9 7年 证 实 B o n n e t 等提 取 纯化 C D 3 4 C D 3 8 一 表 型 的急性粒 细 胞 白血病 A ML m 胞 尽管这些细胞仅 占全部 AML 细 胞 的 0 2 但 这 是惟 一 能够 在 非肥 胖 型 糖尿 病 重 症 联 合 免 疫 缺 陷 n o n o b e s e d i a b e t i c s e v e r e C O B b i n e d i mmu n e d e fi c i e n t N OD S C I D 鼠启动人类 A ML 和形成移植瘤 的细胞 因此认为 C D 3 4 C D 3 8 一 白血 病细胞可能是 A ML的肿瘤干细胞 B l a i r 等也用 同 样方法证 明 只有表型为 C D 3 4 C D 7 1 H L A D R h u ma n l e u k o c y t e a n t i g e n D R 1 的 白血病 细胞 属于 肿瘤 起 源 细 胞 随后 的 研 究 证 明 白 血 病 干 细 胞 f l e u k e m i a s t e m c e l l s L S C s 1 的免 疫 表型 在许 多 方 面与 造血 干 细 胞 h e m a t o p o i e t i c s t e m c e l l s ns c 相似 都表达 C D 3 4 学 杂 志 獬熊 熊 维普资讯 而不 表达 C D 3 8 但 H S C s中表 达 细胞 表 面抗 原 T h y 一 1 f C D 9 0 H c k i t C D1 1 7 1 而 L S C s 中则 不表 达 I L 一 3 受 体 链 C Dl 2 3 是 L S C s的一个独特的标志 与人类 癌 细 胞 抗凋 亡 相 关 的 N F K B的话 化形 态 也 在 L S C s 中表 达而 在正 常 的 H S C s中不 表达 体外 试 验抑 制 N F K B的活 性 诱 导 了 L S C s的凋 亡 而保 存 了正 常 十 细胞 所 以进一 步研 究 L S C s 不仅 对靶 向 L S C s的 治疗 方法 非常 关键 也 是 了解 白血病 进程 的一个 关 键 因素l 3 l 2 肿瘤干细胞 在实体 肿瘤 中的研究 实体瘤 干 细胞 的纯 化非 常困难 冈细胞 表 面标 记很少 难 以进行 细胞 分选 而且传 统 上人 原 代实体 瘤 干 细胞 的异种 移植 检测是 在 裸 鼠 中进 行 这些 小 鼠仍然 具有 一定 的免 疫功 能 会造 成异 种移 植肿 瘤 形 成 的差异 所 以有 可能是 小 鼠 的免疫 排斥 使人 们 检 测不 到实体 瘤十 细胞 的存 在 2 1 乳腺癌 肿瘤 干细 胞 的研 究 2 0 0 3年 研 究 人 员 利 用 癌 细胞 膜 表 面 抗 原 的 差 异 使用特 异 的抗体 及 流式细 胞技 术 将 人 类乳 腺 癌 组织 的细 胞 接种 到 N O D S C I D小 鼠体 内 结果 证 明 只 有 一 种细 胞 表 面抗 原 为 C D 4 4 C D 2 4 7 1 o w 的癌 细 胞 能 在 NO D S C I D 鼠体 内形 成移 植瘤 并且 只 需 细 胞 数为 1 0 0个 即可 l 0 0 形成 肿 瘤l 4 I 他们将 鼠体 内 移 植瘤 传代 培养形 成 的肿瘤 进行 表 型分 析 结果 显 示第 一次 接种后 形 成 的肿 瘤 和第 二次 接种 后形 成 的 肿瘤 表型 异质性 相 似 证 明移植后 可 以重 建肿 瘤 组 织的不 同成分 验证 了其具有再生原始肿瘤 的能力 及 多 向分化 的特点 以上 细胞 的成 功分 离 以及 可靠 的异种移 植 检测方 法 的建立 证 明肿 瘤 中绝 大 多数 细胞 没有 能力 增殖 或形 成肿 瘤 只有 极少 部分 细 胞 能够无 限 增殖 产生 更多 的具 有相 同特点 的细 胞 和 缺乏肿 瘤 源性 潜 力 的肿瘤 细胞 这 是 首次 寻找 和证 实实体瘤肿瘤干细胞的实验 最近 P o n t i 等 5 l从乳腺 癌组织 和 乳 腺癌 细 胞 系 中 分离 出 肿瘤 源性 细 胞 并 在 体外 培养 乳 腺 癌细 胞 培养液 中包 含 了能 自我 更 新 的未分 化细胞 扩大增 殖 的非 黏 附单克 隆 细胞 球 丛 能 向不 同 的乳 腺 上 皮 细胞 系f 导管 细 胞 肌 上皮 细胞 分化 表 面标 志 为 C D 4 4 C D 2 4 一 和 C x 4 3 一 的细胞 过表达新生血管网子及细胞保护因子以及公认的干 细胞 标 志 物 O c t 4 并且 在 细 胞 数 为 1 0 0 0时 注 射 肿瘤学杂志 2 0 0 8年 第 1 4卷第 6期 到 S C I D 鼠乳腺 脂 肪 垫下 即 可形 成 新 的肿 瘤 因此 为乳 腺肿瘤 源性 细胞 能 够在 体外 增殖 分化 形成 新肿 瘤 提 供 了直接 证据 2 2 脑 肿瘤 中肿 瘤 干细胞 的研 究 S i n g h等l 6 I应用分离正常神经干细胞的方法 自人 脑 肿 瘤 中鉴 定 细 胞 表 面标 志 为 C D1 3 3 的具备 明 显增 殖 自我更 新及 多 向分 化能力 的肿瘤 干细胞 将 这 一细胞 表 面标 志为 C D 1 3 3 的肿瘤 干 细胞 在 N O D S C I D 鼠 脑 内进 行 异 种 移 植 实 验 结 果 证 明 只 有 C D1 3 3 的肿瘤 细胞 才 能移 植 成 功 且 仅需 1 0 0个 细 胞 这 给实 体肿 瘤 中存在 肿瘤 干 细胞 的假设 提 供 了 强 有力 的证 据I7 8 2 3 卵巢 癌 中肿 瘤 干细 胞 的研 究 B a p a t 等 的研 究 提示 人类 卵巢 癌 的进 行 性 发 展可 能是 卵巢 内正 常 十细胞 的转 化 与功 能异 常造 成 的 B a p a t 等 从 1例 晚期 卵巢癌 患者 腹水 中直 接分 离 得 到 了一个 致癌 性 细胞 克 隆 在 培养过 程 中获 得 了 另一个发生 了自发性分化的克隆 两者为疾病的进 展 提供 了研 究模 型 这 两个细 胞 克隆具 有 干细胞 样 特 征 体外 培养 时能 形成 锚着 不依 赖性 的细胞 球 用 两 个克 隆制 备小 鼠肿 瘤模 型 所得 肿瘤 的组织学 和 细胞 结 构都 与患 者原 发肿瘤 相 似 所得 肿瘤 在 系列 移 植 过 程 中也 能 够 形 成 肿 瘤 证 明其 拥 有 C S C特 征 此 外 K i m 等 1 存 支 气 管 与肺 泡 的交 界 处 分 离 到 了拥 有 干细胞 特性 的细胞 认 为这 群细 胞与 肺腺 癌 的发 生有 关 3 C S C与肿瘤发生 的机制 3 1 C S C概 念 的 提 出为 癌 症 机 制 的 研 究 带 来 了新 的思路 肿瘤 细胞 的基本 生物 学行 为表 现为 细胞 的增 殖 与分 化 的失调 肿 瘤 细胞 生长失 去控 制 具有无 限增 殖能力 肿瘤的发生 发展是一个多基因 多因素 多 阶段 的复 杂病 理过 程 致癌 剂 和遗传 因素 及 细胞微 环 境共 同作 用 于干 细胞 引起 生 长调控 途 径 中某些 分 子发 生改 变 造成 细胞 过度增 殖 这可 能是 肿瘤 发 生 的始 动 因素 其 中 干 细胞 所处 的微 环境 又称 为壁 龛 n i c h e 成体 干 细胞 长 期存 在 于各 种 组织 内 其 自 我更 新 和分化 始终 受 到所处 微环 境 的影 响 成 体 干 细胞 在 向 C S C转 变 的 过程 中 除 了可 以发 生多 次基 5l 3 维普资讯 J o u r n a l o f On c o l o g y 2 0 0 8 V o 1 1 4 N o 6 因突变之 外 干细胞 所处 的微 环境 发生变 化尤 其重 要 因为调节成体干细胞的信息大部分是来 自其微 环境 的 3 2 C S C与干细 胞有 相似 的生长 调控 机制 N o t c h S HH Wn t 途 径 是 目前 研 究较 为深入 的 与细胞生长分化有关 的信号转导途径 对调节干细 胞 自我更新 自我调控起着重要 的作用 许多与正常 干 细胞 有关 的调 控途 径 在某 些 肿瘤 组织 中 也起 着 重要 的调控作用 N o t c h基 因参与早期造血功能 的 调节 大 多数 人认 为 N o t c h活 化主要 启 动 自我 更 新 S H H信号传导途径中 P T C H基因 编码跨膜蛋白 属 抑 癌 基 因 S H H 途 径 的激 活 S HH蛋 白水 平 过 高 与人类的多种癌症有关 Wn t 信号通路下游效应物 1 3连环 蛋 白 的表达 与肠 上 皮l l J 中枢 神 经 系统 造 血 系统的干细胞 自我更新密切相关 N o t c h细胞信号 转导途径的激活I 2 1 wn t 信号途径的失控 1 3 1 S HH G l i 途径的下调 4 1 等诸多信号转导途径与造血系统 乳 腺 组织及 肠上 皮组织 的干细胞 自我更 新 分化 失 调 而致 恶性转 化 有关 3 3 肿 瘤 的侵 袭 转移 肿瘤 的侵袭 和转移 是恶 性肿 瘤 的生 物学 特 征之 一 肿瘤的侵袭是肿瘤转移的前奏 干细胞具有迁移 的特性 而 肿瘤 细胞有 转移 的能力 肿瘤 的生 长 和转 移是 受一小 群 C S C驱动 的 T u等认 为 干 细胞 的迁 移和肿瘤细胞 的转移皆受特异化学因子及其受体的 调节 使它们迁移到特定的组织和器官 这可以解释 肿瘤转移的器官和组织特异性 4 肿瘤干细胞在治疗方面的应用 肿瘤干细胞的分离具有重要的临床意义 传统 的药物治疗是基于动物模 型中药物能抑制肿瘤生 长 针对 的是 肿瘤 中 的大多数 细胞 而肿 瘤 中的绝 大 多数细胞不具有肿瘤源性 靶向这些细胞的治疗虽 能使肿瘤缩减 但是 如果治疗不能靶 向肿瘤干细 胞 干 细胞 在治疗 后仍 然持 续存在 并且重 新 形成 肿 瘤 导致 肿瘤 的复 发 因此越 来越 多 的学者 提 出肿瘤 治 疗 应 该 针对 肿 瘤 干 细胞 I 5 1 即使 肿 瘤体 积 没 有 缩 小 但由于其他细胞增殖能力有限 肿瘤将逐渐退化 萎缩 已证明 干细胞以 定的机制 譬如通过抗凋 亡 b c 1 2家族蛋 白的高表达 膜转运蛋白的高表 达抵 抗 化疗 这 就是 当前 的治疗容 易产 生抗药 细胞 的原 51 4 因 肿 瘤干 细胞分 离后 通 过表 面标记 纯化 肿瘤 干细 胞 研究它们的基因表达模式 找到肿瘤发生过程中 必需的功能蛋 白 把该蛋 白作为新的药物靶标来治 疗 肿瘤 还 可 以针对 肿瘤 干细胞 的特 异性抗 原 制备 相应的抗体 让其携带化疗药物直接杀灭肿瘤干细 胞 能够更有效地治疗甚至治愈肿瘤 也可以通过寻 找 肿瘤 干细胞 特殊 标 志 可 以更早 检查 出肿 瘤 的发 生 为治疗赢得宝贵的时间 1 嗣 尽管新的针对肿瘤干 细胞 的特 异性 治疗还 没有 正式 确立 近来 已有 几个 研 究 报道 了针对 急性 粒细胞 白血 病 干细胞 的更 有效 的治疗方法 例如 将白喉毒素融合到白介素 3中制 造 出 的药物 可 以 消除 原 始急 性 粒 细胞 白血病 细 胞 另一 个研 究则 显示 针 对 C D 4 4 表 型 的单克 隆抗 体可 以诱导 白血病干细胞的分化 抑制其在体内适宜微 环境 的停留 最近的资料提示将传统的化疗药物 和 新合 成 的小 分子 药物 结合起 来也 是靶 向 白血 病干 细胞 的一个有效方法 相信不久的将来 针对实体瘤 干 细胞 的有效 的药 物也 会产 生 5 肿瘤的耐药 C S C是 造成 肿瘤 耐药 的最根 本 原 因 肿 瘤细 胞 对化疗药物的耐受性是肿瘤治疗 的主要障碍 现有 治疗 肿瘤 的方法 主要 是针 对肿 瘤组 织 内的大 多数 细 胞 而 不是 C S C C S C与 正常 干细胞 具有 许多 相似 的 特 征 大 多处 于 细胞 周 期 的 G 期 表 达 特 异 性 的 A T P结 合 盒 f A T P b i n d i n g c a s s e t t e A B C 如 A B C B 1 A B C G 2等介导 的膜泵耐药分子 使其对化疗 天然耐 药 A B C B 1 A B C G 2是从 肿 瘤组 织 中分 离 出来 的最 基 本 的 肿 瘤 多 药 耐 药 基 因 A B C B 1编 码 P g P A B C G 2编 码 B C R P 这些 转 运 蛋 白通过 利 用 A T P分 解 产生 的 能量 主动将 细胞 内 的药 物泵 出 从 而保 护 自身免 受细 胞毒 性药 物 的损伤 对化疗 不 敏感 如果 C S C高 表 达这类分 子 可 以将化疗 药 物泵 出细 胞 降 低细胞内的药物浓度 导致肿瘤化疗后少数 C S C仍 然存活 这可能是肿瘤耐药 复发转移的重要机制 8 A 1 Ha 等 1 9 1 证 实 C D 3 4 C D 3 8 一 白血 病 细 胞 对 柔 红霉 素的敏感性明显低于 C D 3 4 C D 3 8 肿瘤细胞 人 I J S C 对阿糖胞苷的抵抗力强于其他 白血病细胞 这些现 象 都 可 能 与干 细胞 上 的 多种 A B C转 运 蛋 白的 功能 相关 R a a i j m a k e r s 等研究发现 B C R P在 A ML中优 先 表达 于 C D 3 4 C D 3 8 一 细胞 以 K o 1 4 3阻断 B C R P介 净 菇 每 嘲 鹱 维普资讯 导 的膜 泵 细胞 中米 托 蒽醌 药物浓 度 明显增 加 但 体 外 试 验 K o 1 4 3却 未 能起 到 化 疗 增 敏 的作 用 提示 B C R P仅 为 L S C耐药 的部分 机制 最近 对 白血 病 患 者格列T J G l e e v e c 耐药 的研究 证实 了 A B C转运蛋 白介导 干 细胞 的膜泵 耐药 机制 研 究发 现格 列 卫是 A B C G 2的底 物 和抑 制物 使其 更 易 被表 达 A B C转 运 蛋 白 的干细胞 泵 出 2 0 1 6展 望 肿 瘤干 细胞概 念 的提 出 提 供 了靶 向性 或选 择 性 杀伤 肿瘤 干细胞 的可能性 从 而达 到根 治肿 瘤 防 止肿 瘤 复发 和转移 因此 目前肿 瘤研 究者 应该 进 一 步证实更多实体瘤肿瘤干细胞的存在 并从肿瘤 中 分离 纯化 出肿 瘤干 细胞 研 究其特 性 发现 针 对肿 瘤 干细 胞 的治疗 方法 肿瘤 干 细胞概 念 的提 出是 人类 认识 肿瘤 发病机 制 的一 大进 步 与 以往 所 提 出的肿 瘤 发病 机制 的概 念并 不矛 盾 为研 究肿 瘤发 病 机制 及 根治 恶性 肿瘤 提供 了又 一新 的方 向 可能 成 为肿 瘤 防治 研究 的新 的突破 点 现在 这 一研究 已处 于肿 瘤研 究 的最前 沿 虽然 目前人们还不能确定 C S C的来 源 但有一 点很 明确 那 就 是 C S C的免 疫 原性 和治 疗 敏感 性较 差 这 直接 导致 了肿瘤 的复发 和预 后不 良 目前 尚未 发现 分离 鉴定 C S C的统 一分 子 标 志物 将 来 研究 的 重 点应 放在 寻找识 别 C S C的方法 明确 C S C和增 殖 能 力有 限 的肿瘤 细胞 的差 异之 处 从 而 服务 于肿 瘤 的分类 与诊 断 有 选择 性地 确认 并杀 死这 些 生物 学 性状 比较 特殊 的 C S C群 参考文献 1 1 A I Ha j j M B e c k e r MW Wi c h a M e t a 1 T h e r a p e u t i c i m 一 2 2 3 3 5 J p l i c a t i o n s o f c a n c e r s t e m c e l l s J J C u r r O p i n G e n e t D e v 2 0 0 4 1 4 1 1 4 3 4 7 Hu n d y B J Gi l l i l a n d D G L e u k e mi a s t e m c e l l s a n d t h e e v o l u t i o n o f c a n c e r s t e m e e l l r e s e a r c h J N a t R e v C a n c e r 2 0 0 5 S f 4 1 3 1 1 3 2 1 Wa n g J C Di c k J E C a n c e r s t e m c e l l s l e s s o n s f r o m l e u k e m i a J T r e n d s C e l l B i o l 2 0 0 5 4 6 2 7 4 2 8 2 A I H a j j M Wi c h a M S B e n i t o He r n a n d e z A e t a l P r o s p e c l i v e i d e n t i fi c a t i o n o f t u mo r i g e n i c b r e a s t c a n c e r c e l l s J J P r o c Na t l Ac a d S c i US A 2 0 0 3 1 0 0 7 3 5 4 7 3 5 4 9 Po n t i D Co s t a A Za f f a r o n i N e t a 1 I s o l a t i on a n d i n v i t r o 一 肿 瘤学 志2 0 0 8 年第l 辱 卷第6 期 一 p r o pa g a t i on o f t u mo r i g e ni c br e a s t c an c e r c e l l s wi t hs t e m p r o g e n i t o r c e l l p r o p e r t i e s J J C a n c e r R e s 2 0 0 5 6 5 1 3 5 5 06 551 1 6 S i n g h s K C l a r k e i D T e r a s a k i M e t a 1 I d e n t i fi c a t i o n o f a c a n c e r s t e m c e l l i n h u ma n b r a i n t u mo r s J C a n c e r R e s 2 0 0 3 6 3 1 8 5 8 2 1 5 8 2 8 7 S i n g h S K Ha w k i n s C C l a r k e I D e t a 1 I d e n t i fi c a t i o n o f h u ma n b r a i n t u m o u r i n i t i a t i n g c e l l s J N a t u r e 2 0 0 4 4 3 2 7 0 1 5 3 9 6 4 0 1 8 1 F o mc h e n k o e L I Ho l l a n d E C S t e m c e l l s a n d b r a i n c a n c e r J J E x p C e l l R e s 2 0 0 5 3 0 6 2 3 2 3 3 2 9 9 B a p a t S A Ma l i A M K o p p i k a r C B e t a 1 S t e m a n d p r o g e n i t o r l i ke c e l l s c o n t rib ut e t o t h e a g g r e s s i v e b e ha vi o r o f hu m a n e p i t h e l i a l o v a ri a n J C a n c e r R e s 2 0 0 5 6 5 8 3 0 2 5 3 02 9 1 0 K i m C F J a c k s o n E L Wo o l f e n d e n A E e t a 1 I d e n t i fi c a t i o n o f br o n c hi o a l v e o l ar s t e m c e l l s i n n or ma l l un g a nd l un g c a n c e r J C e l l 2 0 0 5 1 2 1 6 8 2 3 8 3 5 1 1 P i n t o D C l e v e r s H Wri t s t e m c e l l s a n d c a n c e r i n t h e i n t e s t i n e J B i o l C e l l 2 0 0 5 9 7 f 3 1 8 5 1 9 6 1 2 C l a r k e R B A n d e r s o n E H o w e l l A e t a 1 R e g u l a t i o n o f h u m a n b r e a s t e p i t h e l i a l s t e m c e l l s J C e l l P r o l i f 2 0 0 3 3 6 S u p p l 1 4 5 5 8 1 3 R e y a T D u n c a n A W A i l l e s L e t a 1 A r o l e f o r Wn t s i g n a l l i n g i n s e l f r e n e w a l o f h a e ma t o p o i e t i c s t e m c e l l s J N a t u r e 2 0 0 3 4 2 3 6 9 3 8 4 0 9 41 4 1 4 T r o s k o J E C h a n g C C U p h a m B M e t a 1 i n v i v o i n h i b i t i o n o f en d o g en o u s br a i n t u mo r s t hr o ug h s y s t e mi c i nt e r f e r en c e o f H e d g e h o g s i g n a l i n g i n m i c e J M e c h D e v 2 0 0 5 1 2 2 2 2 2 3 2 3 0 1 5 L e n n a rt s s o n J R o n n s t r a n d L T h e s