大豆磷脂含量及有关物质_测定方法研究-职业学院工业分析与检测与毕业论文

徐州工业职业技术学院工业分析与检测专业毕业论文 0 毕业设计 论文 大豆磷脂含量及有关物质 测定方法研究 Study on determination of Soya Lecithin and its related substances 班级工业分析与检测 药物分析 081 学生姓名姜 军学号830311010 指导教师陈亮 慕金超职称工程师 讲师 导师单位 江苏恩华药业 徐州工业职业技术学院 论文提交日期2010 年 11 月 18 日 徐州工业职业技术学院工业分析与检测专业毕业论文 1 徐州工业职业技术学院 毕业论文 设计 任务书 课题名称 大豆磷脂含量及有关物质测定方法研究 课题性质 毕 业 论 文 系 名 称 环境工程系 专业 工业分析与检测 班级 药物分析 081 指导教师 陈亮 慕金超 学生姓名 姜军 徐州工业职业技术学院工业分析与检测专业毕业论文 2 一 选题意义及背景 磷脂是生命的基础物质 是人体正常代谢与健康生存不可缺少的物质 已被广 泛应用于食品 药品 化妆品 化学工业等领域 大豆磷脂系从大豆中提取精制而 得的磷脂混和物 它是由磷脂酰胆碱 卵磷脂 简称PC 高等级为PPC 磷脂酰 乙醇胺 脑磷脂 简称PE 磷脂酰肌醇 肌醇磷脂 简称PI 磷脂酰丝胺酸 丝 胺酸磷脂 简称PS 等成分组成 多烯磷脂酰胆碱是大豆磷脂的主要成分而它的药 理作用是保护肝脏主要用于动脉粥样硬化 急 慢性肝炎 脂肪肝 肝硬化 神经 衰弱 溶血性磷脂酰胆碱在血管中有溶血作用 必须严格控制其含量 本课题以大 豆磷脂为研究对象 建立大豆磷脂含量及有关物质的测定方法 采用HPLC ELSD法 检测多烯磷脂酰胆碱及溶血性磷脂酰胆碱等杂质 并分别采用紫外分光光度法测定 大豆磷脂中磷含量和HPLC ELSD法测定多烯磷脂酰胆碱的含量 通过实验来探讨获 得大豆磷脂含量及有关物质的合适高效的测定方法 并用精密度 准确度等实验来 证明新方法的可行 以便为进一步完善磷脂类保健品和药品的质量标准以及进一步 开发磷脂类保健品和药品提供一定理论依据 二 毕业论文 设计 主要内容 探讨大豆磷脂含量及有关物质的测定方法 制定新的测定和色谱条件 并用 精密度 准确度等实验来证明新方法的可行性 以大豆磷脂含量及有关物质的测量 为考察指标 来探讨获得大豆磷脂含量及有关物质的合适高效的测定方法 并完成 产品留样期间的含量的检测工作 同时附有实验记录及完整数据 本次专题的目的是训练学生独立完成一项实际测定任务的能力 使学生学会制 定可行的检测方案 合理地选择和确定检测项目 准确选择样品的预处理方法以及 分析检测方法 训练学生科学地处理检测数据的能力 对各项检测结果的综合分析 和评价能力 三 计划进度 第一周 查阅收集论文相关资料 文献 第二周 准备相关仪器设备 材料 药品 设计实验方案 第三周 第五周 相关实验实施阶段 数据整理 第六周 论文撰写 修改 定稿 答辩 四 毕业论文 设计 结束应提交的材料 1 毕业论文报告 包括打印稿和电子稿 2 实验过程记录本 原始记录 徐州工业职业技术学院工业分析与检测专业毕业论文 3 指导教师教研室主任 年月日年月日 摘要 磷脂是人体细胞 细胞膜 核膜 质体膜 的基本成分 并对神经 生殖 激 素等功有重要关系 具有很高营养价值和医用价值 现代人生活节奏紧张 磷脂营 养大量流失 因此补充完整磷脂 PC PE PI 对现代人而言是绝对必要 医学 家们也开始重视磷脂在预防疾病发生方面的积极作用 本课题以大豆磷脂为研究对 象 建立大豆磷脂含量及有关物质的测定方法 采用 HPLC ELSD 法检测多烯磷脂酰 胆碱及溶血性磷脂酰胆碱等杂质 并分别采用紫外分光光度法测定大豆磷脂中磷含 量和 HPLC ELSD 法测定多烯磷脂酰胆碱的含量 结果是由外标对数两点法对 PPC 进 行定量分析 线性范围为 5 068 10 4mg 4 0544 10 3mg r 0 99979 RSD 0 61 磷含量测定的线性范围为 A 0 0021 0 0901C r 0 99984 外标法测定溶血性磷脂 酰胆碱 磷脂酰乙醇胺及磷脂酰肌醇含量 分离度较好 理论板数较高 上述方法 简单 快速 准确 专属性好 可用于大豆磷脂含量及有关物质的测定 本课题的 研究工作将对于大豆磷脂类保健品的质量控制及进一步开发大豆磷脂类保健品有 一定的意义 关键词 大豆磷脂高效液相含量有关物质 Abstract Phospholipids is the body cells membrane nuclear membrane membrane quality of the basic componentsAnd neurological reproductive hormonal and other functions have an important relationship with high nutritional value and medical value Intense pace of modern life a huge loss of phospholipid nutrients so add the full phospholipids PC PE PI is absolutely necessary for modern people Medical scientists are beginning to place emphasis on preventive aspects of phospholipid in the active role The topics to soy lecithin as the research object the establishment of soybean lecithin and related substances determination methods Detected by HPLC ELSD Polyunsaturated phospholipids and lysophosphatidyl choline and other impurities and were determined by ultraviolet spectrophotometry and phosphorus content of soybean phospholipid HPLC ELSD determination of polyene phosphatidylcholine content The result is the number of points by the external standard method of quantitative analysis of PPC the linear range of 5 068 10 4mg 4 0544 10 3mg r 0 99979 RSD 0 61 the linear range of determination of phosphorus contentas A 0 0021 0 0901 C r 0 99984 externalstandardmethodlysophosphatidylcholine phosphatidylethanolamine and phosphatidylinositol content better resolution theoretical plate number is higher The method is simple fast accurate and specific and can be used for soybean phospholipid content and related substance determination The research topic will be health care products for soybean phospholipids in the quality control and further development of soybean lecithin health products have a certain significance 徐州工业职业技术学院工业分析与检测专业毕业论文 4 KeywordsSoybean lecithinHigh Performance LiquidContentRelated substances 目录 摘要 3 Abstract 3 第一章 前 言 6 1 1 大豆磷脂简介 6 1 2 大豆磷脂成分研究进展 6 1 3 本课题的研究意义 6 1 4 本课题的研究内容 7 1 4 1 有关物质含量测定 7 1 4 2 大豆含量测定 7 第二章 实验材料与方法 8 2 1 材料与仪器设备 8 2 1 1 试验原料 8 2 1 2 仪器与设备 8 2 2 试验方法 8 2 2 1 有关物质的测定 8 2 2 2 大豆磷脂含量测定 10 第三章结果与分析 12 3 1 有关物质考察 12 3 1 1 溶血性磷脂酰胆碱及有关物质流动相选择 12 3 1 2 溶血性磷脂酰胆碱破坏性试验 12 3 1 3 溶血性磷脂酰胆碱及有关物质检测限测定 13 3 1 4 溶血性磷脂酰胆碱及有关物质含量测定 13 3 1 5 磷脂酰乙醇胺 磷脂肌醇含量测定流动相选择 14 3 1 6 磷脂肌醇 磷脂酰乙醇胺检测限测定 14 3 1 7 大豆磷脂磷脂酰乙醇胺 磷脂肌醇含量测定结果 14 3 2 大豆磷脂含量考察 15 3 2 1 多烯磷脂酰胆碱线性图 15 3 2 2 多烯磷脂酰胆碱重复性试验结果 16 3 2 3 多烯磷脂酰胆碱稳定性试验结果 16 3 2 4 多烯磷脂酰胆碱含量测定结果 16 3 2 5 磷含量线性图 16 3 2 6 磷含量重复性试验结果 17 3 2 7 磷含量稳定性试验结果 18 3 2 8 大豆磷脂中磷的含量测定结果 18 徐州工业职业技术学院工业分析与检测专业毕业论文 5 第四章 结 论 19 参考文献 20 致谢 21 徐州工业职业技术学院工业分析与检测专业毕业论文 6 第一章第一章 前前 言言 1 1 大豆磷脂简介 大豆磷脂系从大豆中提取精制而得的磷脂混和物 它是由磷脂酰胆碱 卵磷脂 简称 PC 高等级为 PPC 磷脂酰乙醇胺 脑磷脂 简称 PE 磷脂酰肌醇 肌醇 磷脂 简称 PI 磷脂酰丝胺酸 丝胺酸磷脂 简称 PS 等成分组成 大豆磷脂主 要成分为多烯磷磷脂酰胆碱 其活性成分为多聚磷脂酰胆碱二酰甘油 或多聚乙酰 卵磷脂 是构成细胞膜和亚细胞膜的重要组成部分 其化学结构与内源性卵磷脂相 同 但因它含有丰富的多种多价不饱和脂肪酸 亚油酸 亚麻酸和油酸 尤其是 亚油酸取代了 C1 C2位上的饱和脂肪酸 进入人体后 很容易结合到肝细胞膜结构 中 对肝细胞的再生和重构具有非常重要的作用 它明显改善了营养物质和电解质 的跨膜过程 增加了磷脂依赖性酶类的活性 作为肝细胞膜的稳定剂对肝脏细胞有 重要的保护和修复作用 所以在功能上比体内的磷脂更卓越 PPC 除了是一种生理 性磷脂以外 还有减少氧应激与脂质过氧化 抑制肝细胞凋亡 降低炎症反应和抑 制肝星状细胞 HSC 活化等功能 从多个方面保护肝细胞免受损害 磷脂自被人 们利用以来 广受好评 大豆磷脂可以抑制肠内胆固醇的吸收 故能降低血液 胆固醇和抗脂肪肝的作用 此外本品还能促进细胞增殖 使其活力旺盛 主要 用于动脉粥样硬化 急 慢性肝炎 脂肪肝 肝硬化 神经衰弱等 制成软膏 可用于慢性溃疡等 1 2 大豆磷脂成分研究进展 大豆磷脂国内用高效液相色谱对磷脂进行分离测定的研究多集中在食品 医 药 工业 基础科学等领域 如食品 保健品 血浆 熊胆中的磷脂测定 正相 反相色谱方法都有报道 多用紫外检测器 也有蒸发光散射检测器 示差折光检测 器及质谱检测器的报道 近几年来质谱检测器的使用逐渐增多 对磷脂分子构型 的研究已开始起步 曹栋 夏海涛等用硅胶柱分离了大豆磷脂酰胆碱 然后用C18 柱 ODS柱对磷脂酰胆碱分子进行进一步的分离 分别得到5种 11种分子类型 国 外对磷脂的研究涉及更加广泛 如食品 医药 生命科学 地球化学等领域 研究 深度和广度上都较国内大 目前已可用高效液相色谱与质谱联用 在不破坏磷脂 分子结构的前提下 得到更加全面 准确的磷脂分子结构信息 这在医药科学 生 命科学等基础科学的研究中尤其重要的药理研究进展 1 3 本课题的研究意义 国内外对大豆磷脂的研究发表论文较多 但许多方法报道大多采用紫外检测器 进行检测含量和薄层层析方法测定 但是多烯磷脂酰胆碱在紫外区吸收较弱属于末 端吸收 干扰较大而薄层层析的误差较大 方法繁琐 故本次采用通用型 ELSD 检测 器对大豆磷脂中多烯磷脂酰胆碱和溶血性磷脂酰胆等杂志进行含量测定 因为大豆 磷脂中可能含有溶血性磷脂酰胆碱 磷脂酰乙醇胺 磷脂酰肌醇等杂质 而大豆磷 脂是用于生产必需磷脂注射液的主要原料 其中溶血性磷脂酰胆碱在血管中有溶血 作用 所以必需控制溶血性磷脂酰胆碱等有关物质的含量 以保证用药的安全 本 次研究完善并提高了大豆磷脂中多烯磷脂含量测定及有关物质测定方法的质量标 准 使标准确实可行 项目设置合理 检验方法简便有效 能够很好得保证该药品 的质量 徐州工业职业技术学院工业分析与检测专业毕业论文 7 1 4 本课题的研究内容 1 4 1 有关物质含量测定有关物质含量测定 药品中的有关物质泛指在药品的生产与储存过程中产生的工艺杂质或降解产 物 由于这些有关物质的存在会影响到药品的纯度 进而可能会产生毒副作用 所 以有关物质的控制是药品研发的一个重要方面 现杂质分析都向细致化转变 以往 我们都是控制总杂质量 也就是通常的自身对照比较法 杂质总量不得大于供试液 的百分之一 而检查有关物质则可以更细致的知道杂质的具体成分 溶血性磷脂酰胆碱在血管中有溶血作用 必须严格控制其含量 所以本次采用 外标法测定溶血性磷脂酰胆碱 磷脂酰乙醇胺及磷脂酰肌醇含量 1 4 2 大豆含量测定大豆含量测定 多烯磷脂酰胆碱是大豆磷脂的主要成分而它的药理作用是保护肝脏主要用于 动脉粥样硬化 急 慢性肝炎 脂肪肝 肝硬化 神经衰弱 而一些奸商利用 大豆油和多烯磷脂酰胆碱外观类似性来欺骗消费者 为了了解生活本次对大豆 磷脂中多烯磷脂酰胆碱含量进行测定 本课题主要利用 Alltimasilica 色谱柱对 大豆磷脂进行分离 利用 ELSD 检测器对多烯磷脂酰胆碱检测 采用外标对数两点 法对多烯磷脂酰胆碱进行定量分析 对大豆磷脂评价是看其含磷量 目前对磷脂含量的测定主要有紫外 分光光度 法 重量法 uV法FTIR法等 本次研究采用紫外分光光度法 徐州工业职业技术学院工业分析与检测专业毕业论文 8 第二章 实验材料与方法第二章 实验材料与方法 2 1 材料与仪器设备 2 1 1 试验原料试验原料 甲醇 上海凌峰化学试剂有限公司 冰醋酸 中国医药集团化学试剂公司 三乙胺 上海凌峰化学试剂有限公司 异丙醇 色谱纯 美国 Tedia 公司 正己烷 色谱纯 美国 Fisher 公司 硫酸 优级纯 南京化学试剂厂 硝酸 优级纯 南京化学试剂厂 30 过氧化氢 分析纯 上海凌峰化学试剂有限公司 对苯二酚 分析纯 上海雅贝科技有限公司 无水亚硫酸钠 分析纯 国药集团化学试剂有限公司 大豆磷脂 由江苏恩华药业集团原料车间提供 批号为分别为 20091110 20091113 20091116 多烯磷脂酰胆碱 PPC 对照品 批号为 025K5204 含量为 99 0 购自于 Sigma Acdrich 公司 溶血性磷脂酰胆碱 LPC 对照品 批号为 064K5216 含量为 99 0 购自于 Sigma Acdrich 公司 磷脂酰乙醇胺 PE 批号为 104K5222 含量 99 0 购自于 Sigma Acdrich 公司 磷脂酰肌醇 PI 批号为 104K5216 含量 100 0 购自于 Sigma Acdrich 公 司 2 1 2 仪器与设备仪器与设备 LC 10P 高效液相泵 大连江申 AlltechELSD2000ES 增强型蒸发光散射检测器 美国奥泰 Model 420 型酸度计 美国热电 Mettler AG135 双量程电子天平 Alltima silica 5 m 250mm 4 6mm 美国奥泰 HB 20800 型数控超声波清洗器 天津大学 UV2450 紫外分光光度计 日本岛津 2 2 试验方法 2 2 1 有关物质的测定有关物质的测定 2 2 1 1 溶血性磷脂酰胆碱及有关物质流动相选择 1 流动相的配制 配制了下述三种流动相进行试验 流动相一 甲醇 冰醋酸 三乙胺 500 10 4 pH 6 0 流动相二 甲醇 冰醋酸 三乙胺 500 10 0 26 pH 5 0 流动相三 甲醇 冰醋酸 三乙胺 500 10 12 7 pH 7 0 2 供试品溶液的配制 徐州工业职业技术学院工业分析与检测专业毕业论文 9 分别称取多烯磷脂酰胆碱对照品 溶血性磷脂酰胆碱对照品和磷脂酰乙醇胺 对照品及大豆磷脂适量 用流动相 1 配制成含多烯磷脂酰胆碱为 0 2mg mL 溶液 1 含磷脂酰乙醇胺为 0 1mg mL 溶液 2 含溶血性磷脂酰胆碱为 0 5 mg mL 溶液 3 及含大豆磷脂为 0 2mg mL 溶液 4 和 4 mg mL 溶液 5 将溶液 2 溶液 3 溶 液 5 以适当比例混合作为溶液 6 3 试验方法及结果 取溶液 1 溶液 2 溶液 3 溶液 4 溶液 6 在流动相 1 下进样 另取溶液 6 分别在流动相 2 和流动相 3 下进样 进样量均为 10 L 记录色谱图 2 2 1 2 溶血性磷脂酰胆碱破坏性试验 1 强酸破坏 取大豆磷脂约 0 2g 加入 3 0mol L 盐酸溶液 10mL 加热回流 1h 冷却 调至 中性 用流动相超声溶解并稀释至 50mL 过滤 作为供试品溶液 1 2 强碱破坏 取大豆磷脂约 0 2g 加入 3 0mol L 氢氧化钠溶液 10mL 加热回流 1h 冷却 调至中性 用流动相超声溶解并稀释至 50mL 过滤 作为供试品溶液 2 3 氧化破坏 取大豆磷脂约 0 2g 加入 30 的过氧化氢溶液 10mL 超声 10min 用流动相超 声溶解并稀释至 50mL 过滤 作为供试品溶液 3 4 高温破坏 取大豆磷脂约 0 2g 置 120 的烘箱中烘 48h 用流动相超声溶解并稀释至 50mL 过滤 作为供试品溶液 4 分别取上述四种供试品溶液各 10 L 注入液相色谱仪 记录色谱图 2 2 1 3 溶血性磷脂酰胆碱检测限测定 分别精密称取多烯磷脂酰胆碱 溶血性磷脂酰胆碱 磷脂酰乙醇胺适量 加流 动相溶解并逐步稀释至低浓度 精密量取 10 L 注入液相色谱仪 当信噪比为 3 1 时 所进的样品量即为检测限 2 2 1 4 溶血性磷脂酰胆碱含量测定结果 取本品约 100mg 精密称定 置 25mL 的容量瓶中 加流动相溶解并稀释至刻度 作为供试品溶液 精密吸取供试品溶液 1mL 加流动相稀释至 100mL 作为自身对 照溶液 另精密称取溶血性磷脂酰胆碱对照品约 5mg 置 50mL 容量瓶中 加流动相 溶解并稀释至刻度 作为溶血性磷脂酰胆碱对照品溶液 取自身对照溶液 10 L 注 入液相色谱仪 调节检测器灵敏度 使主成分色谱峰的峰高为满量程的 10 20 再 取自身对照溶液 溶血性磷脂酰胆碱对照品溶液和供试品溶液各 10 L 注入液相色 谱仪 供试品色谱图记录至主峰保留时间的 2 倍 按外标法计算供试品中溶血性磷 脂酰胆碱含量 其相对供试品总量应不得过 3 0 供试品色谱图中若含有其他杂质 峰 杂质峰面积之和应不得大于自身对照峰面积的 1 5 倍 按照有关物质测定方法对本品三批样品进行了检测 批号 20091110 20091113 20091116 测定三批样品有关物质检查 2 2 1 5 磷脂肌醇及磷脂酰乙醇胺流动相选择 分别取磷脂肌醇 PI 对照品 磷脂酰乙醇胺 PE 对照品及大豆磷脂适量 用流动相 1 配制成含 PI 为 0 02mg mL 溶液 1 含 PE 为 0 02 mg mL 溶液 2 含大豆磷脂为 4 mg mL 溶液 3 另再取 PI PE 及大豆磷脂适量 并置于同一容 徐州工业职业技术学院工业分析与检测专业毕业论文 10 量瓶中 加流动相 1 制成含 PI 为 0 02mg mL 含 PE 为 0 02 mg mL 含大豆磷脂为 4 mg mL 的混合溶液 溶液 4 取上述 4 种供试品溶液分别在四种流动下进样 进样量均为 10 L 记录图谱 流动相 1 正己烷 异丙醇 水 20 40 7 流动相 2 正己烷 异丙醇 水 20 40 9 流动相 3 正己烷 异丙醇 水 20 40 5 流动相 4 正己烷 异丙醇 水 30 40 7 2 2 1 6 磷脂肌醇 磷脂酰乙醇胺检测限测定 分别取磷脂酰乙醇胺对照品 磷脂肌醇对照品适量 加流动相溶解并逐步稀释 至低浓度 精密量取 10 L 注入液相色谱仪 当信噪比为 3 1 时 所进的样品量即 为检测限 2 2 1 7 磷脂肌醇及磷脂酰乙醇胺含量测定结果 取本品约 100mg 精密称定 置 25mL 的容量瓶中 加流动相溶解并稀释至刻度 作为供试品溶液 另精密称取磷脂酰乙醇胺 磷脂肌醇适量 置于同一容量瓶中 加流动相制成各含磷脂酰乙醇胺 磷脂肌醇 0 02mg 的溶液 作为对照品溶液 取 对照品溶液 10 L 注入液相色谱仪 调节检测器灵敏度 使磷脂酰乙醇胺色谱峰的 峰高为满量程的 10 20 再精密量取对照品溶液和供试品溶液各 10 L 注入液相色 谱仪 记录色谱图 按外标法计算供试品中磷脂酰乙醇胺 磷脂肌醇含量 其相对 供试品总量应分别不得过 0 5 2 2 2 大豆磷脂含量测定大豆磷脂含量测定 2 2 2 1 多烯磷脂酰胆碱线性范围测定 精密称取多烯磷脂酰胆碱对照品约 62 5mg 置于 50mL 的容量瓶中 加流动相 溶解并稀释至刻度 摇匀 分别精密吸取适量 用流动相稀释成每 1mL 中分别含多 烯磷脂酰胆碱 0 05mg 0 1mg 0 2mg 0 3mg 0 4mg 的溶液 取上述溶液各 10 L 注入液相色谱仪 记录色谱图 以进样量 mg 取常用对数作为 Y 峰面积 A 取常 用对数作为 X 以 Y 对 X 进行线性回归 计算回归方程及相关系数 2 2 2 2 多烯磷脂酰胆碱重复性试验 精密称取大豆磷脂 批号 20091110 20091113 20091116 6 份 每份约 200mg 分别置 50mL 容量瓶中 加流动相溶解并稀释至刻度 作为供试品溶液 按照含量 测定方法测定含量 并按外标对数两点法对数方程计算多烯磷脂酰胆碱的含量 2 2 2 3 多烯磷脂酰胆碱的稳定性试验 取批号为 批号 20091110 20091113 20091116 的大豆磷脂 按照多烯磷 脂酰胆碱含量测定方法配制供试品溶液 放在室温条件下 分别于 0h 2h 4h 6h 8h 取 10 L 注入液相色谱仪 记录色谱图 同时在每个时间段重新配制对照品溶液 分别进样 10 L 记录色谱图 按外标法计算含量 2 2 2 4 多烯磷脂酰胆碱含量测定 取本品约 200mg 精密称定 置 50mL 量瓶中 加流动相溶解并稀释至刻度 摇 匀 滤过 精密量取续滤液 5 0mL 置 100mL 量瓶中 用流动相稀释至刻度 摇匀 作为供试品溶液 徐州工业职业技术学院工业分析与检测专业毕业论文 11 精密称定本品 125mg 加流动相溶解并稀释制 100mL 分别精密量取 3 0mL 和 5 0mL 置 25mL 量瓶中 用流动相稀释至刻度 摇匀 作为对照品溶液 和对照品 溶液 照含量测定项下的方法 测定三批样品的含量 2 2 2 5 磷含量线性范围 精密称取经 105 干燥至恒重的磷酸二氢钾对照品 0 0439g 置于 250mL 的容 量瓶中 加水溶解并稀释至刻度 摇匀 精密吸取上述溶液 1 0mL 2 0mL 4 0mL 6 0mL 8 0mL 10 0mL 分别置于 50mL 的容量瓶中 各依次加入钼酸铵硫酸试液 4mL 亚硫酸钠试液 2mL 与新鲜配制的对苯二酚溶液 2mL 加水稀释至刻度 摇匀 暗处放置 40min 照分光光度法 中国药典 2010 年版二部附录 A 在 620nm 的 波长处分别测定吸光度 以吸光度 A 对磷的浓度 C 进行线性回归 2 2 2 6 磷含量重复性试验 精密称取大豆磷脂 批号为 20091110 20091113 20091116 6 份 每份约 0 15g 置凯式烧瓶中 加硫酸 20mL 与硝酸 50mL 缓缓加热至溶液呈淡黄色 小心 滴加过氧化氢溶液 使溶液褪色 继续加热 30min 冷却后 转移至 100ml 量瓶中 加水稀释至刻度 摇匀 按照含量测定方法进行测定 2 2 2 7 磷含量稳定性试验 取重复性试验项下的磷含量测定溶液在室温下放置 分别于 0min 5min 10min 15min 20min 30min 60min 测定吸光度 2 2 2 8 大豆磷脂磷含量测定 取大豆磷脂约 0 15g 精密称定 置凯式烧瓶中 加硫酸 20mL 与硝酸 50mL 缓缓加热至溶液呈淡黄色 小心滴加过氧化氢溶液 使溶液褪色 继续加热 30min 冷却后 转移至 100mL 量瓶中 加水稀释至刻度 摇匀 对照品溶液的配制 精密称取经 105 干燥至恒重的磷酸二氢钾对照品 0 0439g 置 50mL 量瓶中 加水溶解并稀释至刻度 摇匀 精密量取 10mL 置另一 50mL 量瓶中 加水稀释至刻度 摇匀 每 1mL 相当于 0 04mg 磷 精密量取对照品溶液与供试品溶液各 5mlL 分别置 50mL 量瓶中 各依次加入 钼酸铵硫酸试液 4mL 亚硫酸钠试液 2mL 与新鲜配制的对苯二酚溶液 取对苯二酚 0 5g 加水适量使溶解 加硫酸 1 滴 加水稀释成 100mL 2mL 加水稀释至刻度 摇匀 暗处放置 40min 照分光光度法在 620nm 的波长处分别测定吸光度 计算含 磷量 徐州工业职业技术学院工业分析与检测专业毕业论文 12 第三章第三章结果与分析结果与分析 3 1 有关物质考察 3 1 1 溶血性磷脂酰胆碱及有关物质流动相选择溶血性磷脂酰胆碱及有关物质流动相选择 表表 1 1 大豆磷脂有关物质测定流动相的选择大豆磷脂有关物质测定流动相的选择 流动相 峰保留时间 min 分离度 PEPCLPCPE 和 PCLPC 和 PC 流动相 14 3209 73913 1589 474 01 流动相 24 56411 58716 9049 053 96 流动相 33 9696 8149 5136 773 37 结论 从表 1 结果可看出 用流动相 1 检测本品的有关物质时 多烯磷脂酰胆 碱和相邻杂质峰的分离度较好 且各杂质峰保留时间比较合适 所以初步确定以流 动相 1 作为本品有关物质测定的流动相 并以此流动相进行检测限的测定及破坏性 试验 3 1 2 溶血性磷脂酰胆碱破坏性试验溶血性磷脂酰胆碱破坏性试验 4 345 4 606 9 762 13 203 0 30 60 90 120 150 180 210 240 mV 246810121416 min 4 586 4 707 9 861 11 510 13 106 0 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 mV 246810121416 min 图图 1 1酸破坏酸破坏图图 2 2碱化破坏碱化破坏 4 340 4 562 4 890 5 471 9 778 13 238 0 30 60 90 120 150 180 210 240 270 300 mV 246810121416 min 4 632 9 949 11 454 13 272 0 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 mV 246810121416 min 图图 3 3氧化破坏氧化破坏图图 4 4高温破坏高温破坏 从色谱图 1 4 中可看出 大豆磷脂在酸性 碱性 高温条件下不太稳定 对 氧化相对稳定 且破坏后产生的降解产物和多烯磷脂酰胆碱的峰可较好的分离 故 上述色谱条件可较好检测本品在各种苛刻条件下产生的降解产物 徐州工业职业技术学院工业分析与检测专业毕业论文 13 3 1 3 溶血性磷脂酰胆碱及有关物质检测限测定溶血性磷脂酰胆碱及有关物质检测限测定 表表 2 2 多烯磷脂酰胆碱等物质检测限测定结果多烯磷脂酰胆碱等物质检测限测定结果 样品称样量 mg 稀释倍数浓度 g mL 检测限 ng 多烯磷脂酰胆碱10 13125000 81048 104 溶血性磷脂酰胆碱10 25125000 828 2 磷脂酰乙醇胺2 53125000 20242 024 9 885 0 5 0 45 0 4 0 35 0 3 0 25 0 2 0 15 0 1 0 05 0 mV 123456789101112min 13 153 0 48 0 4 0 32 0 24 0 16 0 08 0 0 08 0 16 0 24 0 32 mV 246810121416min 图图 4 4 多烯磷脂酰胆碱检测限测定多烯磷脂酰胆碱检测限测定图图 5 5 溶血性磷脂酰胆碱检测限测定溶血性磷脂酰胆碱检测限测定 2 300 2 1 5 1 0 5 0 0 5 1 1 5 2 2 5 3 mV 0 91 82 73 64 55 46 37 28 19 min 图图 6 6 磷脂酰肌醇检测限测定磷脂酰肌醇检测限测定 结论 根据检测限测定结果表 2 及色谱图 4 6 可知 多烯磷脂酰胆碱 溶血 性磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺都能较好的检出 3 1 43 1 4 溶血性磷脂酰胆碱及有关物质含量测定溶血性磷脂酰胆碱及有关物质含量测定 表表 3 3 大豆磷脂有关物质测定结果大豆磷脂有关物质测定结果 批号LPC 其他杂质 200911100 280 41 200911130 260 44 200911160 270 44 根据中国药典 2010 版规定 含溶血磷脂酰胆碱不得过 3 5 此方法可以测定 大豆磷脂中溶血性磷脂酰胆碱 徐州工业职业技术学院工业分析与检测专业毕业论文 14 3 1 5 磷脂酰乙醇胺 磷脂肌醇含量测定流动相选择磷脂酰乙醇胺 磷脂肌醇含量测定流动相选择 表表 4 4 磷脂酰乙醇胺 磷脂肌醇含量测定流动相选择磷脂酰乙醇胺 磷脂肌醇含量测定流动相选择 流动相 单一溶液 tR min 混合溶液 tR min 理论塔板数 和最近峰的分 离度 PIPEPCPIPEPCPIPEPIPE 流动相 12 3104 57216 9602 3144 55317 032125234102 682 79 流动相 22 3593 7216 2652 3853 7256 265158026471 582 28 流动相 32 5356 21062 4032 7036 20561 92969319871 941 24 流动相 42 2813 6706 8852 3103 7066 91126720181 571 95 注 其中 tR为保留时间 PC 为多烯磷脂峰胆碱峰 理论塔板数 是指溶液 1 中 PI 峰及溶液 2 中 PE 峰的理论塔板数 和最近峰的分离度 是指混合溶液 溶 液 4 中 PI PE 和相邻最近峰的分离度 结论 从表 4 可看出 用流动相 1 检测本品的有关物质时 PI PE 峰和大豆磷 脂的其他杂质峰的分离度较好 理论塔板数较高 且各峰保留时间比较合适 所以 初步确定以流动相 1 作为本品 PI PE 测定的流动相 3 1 6 磷脂肌醇 磷脂酰乙醇胺检测限测定磷脂肌醇 磷脂酰乙醇胺检测限测定 表表 5 5 磷脂肌醇 磷脂酰乙醇胺检测限测定结果磷脂肌醇 磷脂酰乙醇胺检测限测定结果 样品初始浓度 g ml 稀释倍数浓度 g ml 检测限 ng 磷脂肌醇20 4250 8168 16 磷脂酰乙醇胺20 2250 8088 08 4 682 1 6 1 2 0 8 0 4 0 0 4 0 8 1 2 1 6 2 mV 0 71 42 12 83 54 24 95 66 37 min 2 300 2 1 5 1 0 5 0 0 5 1 1 5 2 2 5 3 mV 0 91 82 73 64 55 46 37 28 19 min 图图 7 7 磷脂肌醇检测限测定磷脂肌醇检测限测定图图 8 8 磷脂酰乙醇胺检测限测定磷脂酰乙醇胺检测限测定 结论 从表 5 数据及图 7 8 可知磷脂肌醇 磷脂酰乙醇胺检测限均较小 可较好的 检出 3 1 73 1 7 大豆磷脂磷脂酰乙醇胺 磷脂肌醇含量测定结果大豆磷脂磷脂酰乙醇胺 磷脂肌醇含量测定结果 徐州工业职业技术学院工业分析与检测专业毕业论文 15 表表 6 6 大豆磷脂磷脂酰乙醇胺 磷脂肌醇测定结果大豆磷脂磷脂酰乙醇胺 磷脂肌醇测定结果 批号磷脂肌醇 磷脂酰乙醇胺 20091110未检出未检出 20091113未检出未检出 20091116未检出未检出 3 2 大豆磷脂含量考察 3 2 1 多烯磷脂酰胆碱线性图多烯磷脂酰胆碱线性图 表表 7 7 多烯磷脂酰胆碱线性范围测定结果多烯磷脂酰胆碱线性范围测定结果 编号进样量 mg Y峰面积X 15 068 10 4 3 2951639378765 9721454 21 0136 10 3 2 99413325634596 4088264 32 0272 10 3 2 693103473706526 86750591 43 0408 10 3 2 5170052143994867 15834699 54 0544 10 3 2 392073220701547 3438054 回归方程Y 7 1994 0 65497X 相关系数相关系数 r 0 999790 图图 9 9 多烯磷脂酰胆碱线性图多烯磷脂酰胆碱线性图 结论 多烯磷脂酰胆碱的进图样量在5 068 10 4mg 4 0544 10 3mg 的范围内 进样量取常用对数与峰面积取常用对数呈良好的线性关系 在此进样量的范围内可 用于磷脂酰胆碱含量测定 徐州工业职业技术学院工业分析与检测专业毕业论文 16 3 2 2 多烯磷脂酰胆碱重复性试验结果多烯磷脂酰胆碱重复性试验结果 表表 8 8 多烯磷脂酰胆碱含量测定重复性试验结果多烯磷脂酰胆碱含量测定重复性试验结果 编号含量 平均含量 RSD 197 20 96 410 49 296 01 396 66 496 52 596 04 696 05 结论 多烯磷脂酰胆碱含量测定的 RSD 0 49 证明其方法重复性好 可以作 为大豆磷脂中多烯磷脂酰胆碱的含量测定方法 3 2 3 多烯磷脂酰胆碱稳定性试验结果多烯磷脂酰胆碱稳定性试验结果 表表 9 9 多烯磷脂酰胆碱含量测定溶液的稳定性试验结果多烯磷脂酰胆碱含量测定溶液的稳定性试验结果 时间 小时 峰面积平均峰面积RSD 07390501 73853440 57 27327213 47426909 67422332 87359765 结论 按多烯磷脂酰胆碱含量测定项下方法配制的样品溶液放置 8h 峰面积未 见明显的变化 说明样品溶液在 8h 内比较稳定 3 2 43 2 4 多烯磷脂酰胆碱含量测定结果多烯磷脂酰胆碱含量测定结果 表表 1010 多烯磷脂酰胆碱含量测定结果多烯磷脂酰胆碱含量测定结果 批号含量 平均含量 2009111096 57 96 482009111396 38 2009111696 49 结论 采用高效液相色谱法 蒸发光散射检测器法测定本品中多烯磷脂酰胆碱 的含量准确度较高 重现性和精密度较好 溶液较稳定 故质量标准中选用该法 测定本品中多烯磷脂酰胆碱的含量 3 2 5 磷含量线性图磷含量线性图 徐州工业职业技术学院工业分析与检测专业毕业论文 17 表表 1111 磷含量测定线性范围试验结果磷含量测定线性范围试验结果 编号C g ml 吸收度 A 10 80470 0751 21 60940 1491 33 21870 2892 44 82810 4322 56 43750 5899 68 04690 7243 图图 1010 磷含量线性图磷含量线性图 结论 由图 10 得知磷的浓度在 0 8047 g ml 8 0469 g ml 的范围内 吸光度 与浓度之间呈良好的线性关系 可用于大豆磷脂中磷的含量测定 3 2 6 磷含量重复性试验结果磷含量重复性试验结果 表表 1212 磷含量测定重复性试验磷含量测定重复性试验 编号样品重 mg 吸光度 A 含量 平均含量 RSD 1151 340 21582 971 2 9610 50 2161 050 22782 940 3150 370 21552 992 4155 310 22072 958 5148 460 21132 964 6155 970 22062 939 由表 12 得知磷的含量测定重复性试验结果 RSD 0 50 证明其方法重复性好 徐州工业职业技术学院工业分析与检测专业毕业论文 18 可以作为磷的含量测定方法 3 2 7 磷含量稳定性试验结果磷含量稳定性试验结果 图图 1111 磷含量测定溶液的稳定性试验结果磷含量测定溶液的稳定性试验结果 从图 11 结果可看出 本品的磷含量测定溶液在室温下放置 15min 内比较稳定 15min 后吸光度逐渐增加 所以本品的溶液应在 15min 内测定 3 2 8 大豆磷脂中磷的含量测定结果大豆磷脂中磷的含量测定结果 表表 1111 大豆磷脂中磷的含量测定结果大豆磷脂中磷的含量测定结果 批号含量 平均含量 200911102 867 2 879200911132 891 200911162 879 由中国药典 2010 版得知大豆磷脂磷量应不得少于 2 7 磷含量符合中国药典 规定 徐州工业职业技术学院工业分析与检测专业毕业论文 19 第四章第四章 结结 论论 大豆卵磷脂是从大豆中提取的精华物质 也是人体需要的脂类成分之一 主 要作用在于 延缓衰老 血管清道夫 预防心脑血管疾病 健脑益智 预防老 年性痴呆 肝脏的保护神 糖尿病人的营养品 构成生物膜的主要成分 正因为 大豆磷脂有很好的保健作用一些不法商家利用漏洞榨取钱财 在此对大豆磷脂磷 含量 多烯磷脂酰胆碱及有关物质含量测定方法进行试验 4 1 大豆磷脂中磷脂酰乙醇胺及其他杂质测定 色谱条件和系统适用性试验 用硅胶为填充剂 以正己烷 异丙醇 水 20 40 7 为流动相 使用蒸发光散射检 测器 理论板数按磷脂酰乙醇胺峰计算应不低于 1000 测出溶血性磷脂酰胆碱含 量 0 27 其他杂志含量为 0 43 并未检测出磷脂肌醇 磷脂酰乙醇胺杂质 此 方法适用于杂质的测定 4 2 大豆磷脂中的物质在紫外光下吸收很弱甚至没有吸收 为了提高灵敏度 我们选择通用型检测器 ELSD 检测器进行检测 流动相为甲醇 冰醋酸 三乙胺 500 10 4 流速 0 8mL min 漂移管温度为 85 气体流速为 2 5L min 进 样量 10 L 色谱柱Alltimasilica 5 250mm 4 6mm 美国奥泰 得出线性范 围为 5 068 10 4mg 4 0544 10 3mg r 0 99979 RSD 0 61 多烯磷脂酰胆碱 的平均含量 96 48 可以作为多烯磷脂酰胆碱含量测定的方法 4 3 大豆磷脂是含磷酸的类脂化合物 所以我们进行磷含量测定研究 而大 豆磷脂属于大分子 沸点较高不宜采用气相色谱法 在此采用了酸煮破坏有机试 样 把有机磷转化为无机离子 采用紫外分光光度法测定大豆磷脂中磷含量 在 检测波长 620nm 磷含量测定的线性范围为 A 0 0021 0 0901C r 0 99984 重复 性试验结果 RSD 0 50 证明其方法重复性好 测定其平均含量为 2 879 符 合中国药典 2010 版要求 此方法可以作为含磷的测定 徐州工业职业技术学院工业分析与检测专业毕业论文 20 参考文献参考文献 1 刘梅 陆伦根 曾民德 多烯磷脂酰胆碱对肝细胞保护机制的研究进展 J 肝 脏 2006 11 1 43 44 2 王永华 杨博 梁世中 大豆卵磷脂的分离纯化与脂肪酸分析 J 中国油脂 2000 25 5 36 39 3 Lieber CS Pathogenesis and treatment of alcoholic liver disease Progress over the last 50 years J RoczAkad Med Byalymst 2005 50 7 20 4 Schuller Perez A F Gonzalez San Martin Med Welt 1985 36 517 5 Gubsky Y Z V O Rodzinsk