微生物检验血清学试验.doc

第十四章血清学试验本章考点：（1）血清学鉴定（2）血清学诊断体外的抗原抗体反应常称为血清学反应或血清学试验。血清学试验包括血清学鉴定和血清学诊断。一、血清学鉴定血清学鉴定即采用含有已知特异性抗体的免疫血清（诊断血清）与分离培养出的未知纯种细菌或标本中的抗原进行血清学反应，以确定病原菌的种或型。血清学鉴定常用的血清学试验是凝集试验、沉淀试验（毛细管法）、荚膜肿胀试验和毒素-抗毒素中和试验等。二、血清学诊断血清学诊断是指用已知抗原检测患者血清中相应抗体的方法，以诊断感染性疾病。抗体效价必须明显高于正常人群的水平或随病程递增才有诊断价值。多数血清学诊断需取患者急性期和恢复期双份血清标本，若后者的抗体效价比前者升高4倍或4倍以上才有诊断意义。除非检测IgM，单份血清一般诊断意义不大。在患者血清中检出病原微生物的抗原有诊断意义。血清学诊断常用的血清学试验是凝集试验（直接凝集试验和间接凝集试验）、酶联免疫吸附试验、免疫荧光技术和放射免疫测定法。表5-9-2 微生物感染的血清学诊断 试验抗原疾病（举例）凝集试验细菌全细胞抗原人O型红细胞伤寒、副伤寒（肥达反应）斑疹伤寒、恙虫病（外斐反应）、布鲁菌病、土拉热、钩体病、支原体肺炎（冷凝集）沉淀试验（包括絮状沉淀、免疫扩散、对流免疫电泳）心类脂-卵磷脂-胆固醇微生物可溶性抗原梅毒（VDRL、RPR）真菌病、肝炎等乳胶凝集试验乳胶吸附微生物可溶性抗原脑膜炎奈瑟菌、新型隐球菌脑膜炎，流感嗜血杆菌、病毒感染等间接血细胞凝集试验红细胞吸附微生物可溶性抗原梅毒、肝炎补体结合试验微生物全细胞或可溶性抗原许多病毒病、一些真菌病、Q热间接免疫荧光技术微生物抗原或感染细胞内形成的抗原各类微生物感染放射免疫测定微生物抗原乙型肝炎ELISA微生物全细胞或可溶性抗原肠毒素各类微生物感染血凝抑制试验病毒呼吸道病毒、虫媒病毒感染中和试验病毒链球菌体外产物（溶血素O、DNA酶等）大部分病毒病风湿热链球菌咽部感染本章练习题关于血清学试验结果分析时错误的是A.试验阳性说明机体接触过相应的病原体B.单次试验阳性不能完全证明新近感染C.试验阴性不能完全排除病原体感染的可能性D.试验阳性即有诊断意义E.双份血清标本,后者抗体效价比前者高四倍或四倍以上时有诊断意义答疑编号500735140101正确答案D第十五章动物实验动物实验是细菌学检验的重要技术之一。一、实验动物的分类 根据实验目的不同，对实验动物要求亦不同，因此对实验动物作如下的分类。（一）遗传学控制分类1.近交系动物：近交系动物即一般称的纯系动物。此类动物是指采用兄妹交配（或亲子交配）繁殖20代以上的纯品系动物。2.突变种纯系动物：是指实验动物正常染色体中某个基因发生了变异的具有各种遗传缺陷的突变品系动物。3.纯杂种动物：是指无计划随意交配而繁殖的动物，即一般动物室供应的杂种动物。（二）微生物学控制方法分类1.无菌动物：这种动物无论体表或肠道中均无微生物存在，并且体内不含任何抗体。2.悉生动物：是给无菌动物引入已知517种正常肠道菌丛培育而成的动物。3.无特殊病原体动物：又称无病动物或屏障系统动物。无任何传染病的病原体或对实验结果产生干扰的微生物存在。此种动物是标准级动物，适用于多数科研。4.清洁动物或最低限度疾病动物：该种动物是饲养在设有清洁走廊和不清洁走廓的设施中，其种群均来自剖腹产。5.常规动物：指一般在自然环境中饲养的带菌动物。二、实验动物的选择实验动物种类很多，生理性状也不同，为保证动物试验的准确性，必须选择适宜的实验动物做试验。常用的有小白鼠、大白鼠、豚鼠、家兔及绵羊等。通常按实验目的、要求选择实验动物，选择时应考虑如下几点：1.根据实验的要求而选择不同的实验动物：如在分离、鉴定病原菌时选用最敏感的动物作实验对象。如小白鼠对肺炎链球菌、破伤风外毒素敏感、豚鼠对结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌等易感；测定金黄色葡萄球菌肠毒素以幼猫最敏感等。2.选用动物的数量必须符合统计学上预计数字的需要。3.根据实验的性质也可选不同品系的动物：其目的在于使动物试验结果有规律性、重复性和可比性。如测定对病原体的感染性，最好选用无菌动物或悉生动物。4.由于同一种实验动物存在着个体差异，还应注意个体的选择：（1）年龄：一般均选用成年动物来进行实验。动物年龄常按其体重来估计，选用的动物体重大体上小白鼠2030g、豚鼠500g左右、家兔2kg左右。（2）性别：在实验研究中，动物如无特殊需要，一般宜选用雌雄各半。（3）生理状态：实验动物应证明确实健康外，雌性动物若处于怀孕、授乳期不宜采用。三、接种途径和方法包括：皮内接种：通常以背部皮肤为宜。皮下接种：选用腹壁、背部或腹股沟等处。肌肉接种：一般选用臀部和大腿部肌肉，若为禽类以胸部肌肉为宜。静脉接种：家兔以耳静脉外缘为宜，小鼠和大鼠科注射尾静脉，豚鼠科注射后腿静脉，鸡可注射翅下静脉。腹腔接种：常用于小白鼠。脑内接种：常用于小白鼠。家兔、豚鼠由于颅骨较硬，需用钢锥先打孔后注射。脚掌（垫）接种。四、接种后的观察与解剖（一）接种后的观察根据实验目的与要求，一般每天或每周观察一次。观察动物的食欲、精神状态及接种部位的变化，局部有无异常反应，周围淋巴结有无肿大等。必要时，测其体温、体重及血液学指标。并将观察测定的结果记录在实验动物登记卡上。如死亡,应立即解剖或冷藏。（二）动物解剖实验动物死亡后，应及时解剖和微生物学检验。到期未死的动物，通常亦应麻醉后剖验。五、动物采血法动物采血法包括 心脏采血法：常用于家兔和豚鼠的采血。 静脉采血法：颈静脉采血常用于绵羊；耳静脉采血常用于家兔；尾静脉采血常用于小白鼠和大白鼠。 颈动脉采血法：常用于家兔的全采血。采血时注意严格消毒，避免微生物污染血液。六、动物试验在微生物检验中的应用1.分离和鉴定病原菌：有些微生物必须通过动物试验进行分离，如立克次体及某些病毒等，结核分枝杆菌的致病性也只有动物试验才能最终确定。2.细菌毒素检测:用动物试验检测细菌毒素是了解病原微生物毒力和致病力的一个重要方面，常用方法有白喉棒状杆菌毒力试验、破伤风梭菌毒力保护试验、大肠埃希菌肠毒素检测。本章练习题：