10[1].高温耐热菌检测.doc

高温耐热菌的测定方法 （企业标准）1、设备和材料1.1工作台：超净工作台或放于清洁、光线充足的实验室里的水平工作台，琼脂平板在工作台上暴露15min，每平板不得超过15个菌落。1.2恒温培养箱：361。1.3恒温水浴箱：451。1.4 水浴锅、50ml试管。1.5吸管：1、5 ml和10ml，具0.1ml刻度。1.6平皿：直径为90mm。1.7稀释瓶：广口瓶或三角烧瓶，容量为150ml和200ml。1.8天平：感量0.1g。2、培养基和试剂2.1 平板计数琼脂。2.2 75%乙醇。2.3 稀释剂：0.85%生理盐水。3、操作程序3.1 样品制备3.1.1无菌取检液10ml放入灭菌试管中,把试管放入沸水锅中,从再度沸腾时起算加热10分钟,取出样品,然后分析与一般生菌数的测定方法相同。3.1.2液体食品：用灭菌吸管吸取5g样品，放入装有45ml稀释剂的150ml稀释瓶中，制成1：10的样品匀液，吸取样品时，吸管插入液面下不要超过2.5cm。吸管内液体要在2-4s内完全排入稀释剂中，不要在稀释剂中吹洗吸管。3.1.3用1ml灭菌吸管准确吸取1：10的样品匀液1ml，放入装有9ml稀释剂的试管中。制成1：100的样品液，从容器中吸取样品匀液和以后的稀释操作中，吸管尖不要碰着瓶口。吸入的液体应高于所要求的刻度，然后提起吸管使其尖端离开液面并贴在容器内壁将液体调至所要求的刻度。3.1.4分别用1ml灭菌吸管按3.1.2条所述方法将样品匀液制成10倍递增稀释的样品液，如10-3。10-4 。3.1.5分别用灭菌吸管吸取1ml样品液放入适宜标志的平皿内，每个稀释度的样品液用两个平皿，如果某一样品液在取出供试部分前的放置时间超过3min，应再振摇该样品液。3.1.6分别加12-15ml平板计数琼脂（已放451的水浴中恒温）到各平皿内。立即将平皿内的样品液和琼脂等培养基充分混合，混合方法是将平皿倾斜和旋转，要防止把混合物测到平皿壁和盖上。同时将平板计数琼脂倾入加有1ml稀释剂的另一灭菌平皿作空白对照。将样品液加入平皿后应立即倾注琼脂培养基，每个样品从开始稀释到倾注最后一个平皿所用的时间不得超过20min。3.2 培养待琼脂凝固后将平皿翻转，立即放进541的恒温培养箱内培养482h。培养箱应保持一定的温度，经48h培养的琼脂培养基的失重不得超过15%。541培养的为高温耐热菌。3.3菌落计数和记录3.3.1 培养后，立即计数每个平板上的菌落数。25250个菌落为合适范围。如果不能立即计数，应将平板存放于04，但不得超过24h。3.3.2 如只有一个稀释度的两个平板上的菌落在合适范围内，先计算两个平板的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（毫升）样品中平板菌落数（下表、样品1）。3.3.3如有两个称释度在合适范围内，先计算每个稀释度两个平板的平均值，再计算两个稀释度的平均值，然后计算每克（毫升）样品中平板菌落数（下表，样品2）。3.3.4当最低稀释度的两个平板上都少于25个菌落时，计数这一稀释度两个平板上的实际菌落数，计算两个平板上的平均菌落数，将平均菌落数乘以最低稀释倍数，得到估价的平板菌落数。给这个数注上星号（*），表明该数系从菌落数在25250这一范围之外的平板估计所得（下表、样品3）。3.3.5当所有平板上的菌落都超过250时，则应将最高稀释度的两个平板的平均菌落数乘以稀释倍数，得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号（*）（意义3.3.4）（下表，样品4）3.3.6如果所有稀释度的平板都没有菌落，则以小于1乘以最低稀释倍数报告平板菌落数。给这个数注上星号（*）（意义同3.3.4条）（下表，样品6）。3.3.7同一稀度的两个平板中，一个有25250个菌落，另一个菌落多于250个，两个平板都要计数。计算方法同3.3.4（下表、样品6）。3.3.8两个连续稀释度中的每个稀释度都有一个平板的菌落数在25250个范围内，而另一个的菌落数高于250或低于25，四个平板都要计数。计算方法参照3.3.2和3.3.3条（下表、样品7）。3.3.9某稀释度的两个平板都有25250个菌落，而另一个稀释度的两个平板中只有一个平板的菌落数在25250范围内。四个平板都要计数，计算方法参照3.3.2和3.3.3条（下表、样品8、9）。3.4计算和记录数字适宜稀释度的两个平板的菌落数平均值或两个稀释度的平板菌落数平均值乘以相应稀释倍数计算出每克（毫升）样品中平板菌落数。记录时，只有在换算到每克（毫升）样品中平板菌落数时，才能定下两位效数字，第三个数字采用四舍五入的方法记录，也可将样品的平板菌落数记录为10的指数形式（见下表中的例子）。3.5结果报告报告每克（毫升）样品中平板菌落数或估计的平板菌落数。平板菌落数计算样品号菌落数平板菌落数g/（ml）1：1001：10001：100001多不可计1751619000 (19103)多不可计208172多不可计22425250000 (2.5105)多不可计24530318201600 (16103)14004多不可计多不可计5235100 000 (5.1105)多不可计多不可计4875000100（1.0102）0006多不可计24523260 000（2.6105）多不可计278207多不可计22521270 000（2.710