01.绪论.ppt

Goodmorning HistologyandEmbryology组织与胚胎学 DepartmentofHistologyandembryology ByWangYanrong 王燕蓉教授 组织学研究内容和意义组织学研究方法和技术组织学的学习方法 第一章组织学绪论 Introduction 一 概述 1 组织学与胚胎学的研究内容组织学 研究机体微细结构和相关功能 细胞 是人体的形态结构 生理功能 和生长发育的基本单位 组织 细胞群 细胞外基质 extracellularmatrix 四大基本组织 basictissue 上皮组织 epithelialtissue 结缔组织 connectivetissue 肌组织 musculartissue 神经组织 nervetissue Organ PrimarytissueBasictissue Organhistology 器官 各种基本组织按一定的规律有机地结合在一起 System 功能相关的器官组成系统 完成连续的生理过程 epithelialtissueconnectivetissuemuscletissuenervoustissue Primarytissue Epithelialtissue Connectivetissue Muscletissue Nervoustissue 胚胎学 研究人体发生 发育过程及相关规律的科学2 组织胚胎学与其他学科间的关系生理学病理学妇产科学外科学 显微镜的发明于16世纪末的荷兰 1665年Hooke提出 细胞 开创了用显微镜研究生物构造的先河 二 组织学的研究方法和技术 透射电子显微镜 ElectronMicroscopeEM 最大分辩率为0 2nm 超微结构 显微镜观察常用的长度计量单位1微米 micrometer m 1 1000毫米 mm 1纳米 nanometernm 1 1000微米 m 光学显微镜 LightMicroscope 最大分辨率为0 2 m LightMicroscope LM 光镜结构 一 普通光镜组织标本的制备方法1 石蜡切片术 paraffinsectioning 取材 固定 脱水 包埋 切片 染色 封片 甲醛酒精复合固定剂 酒精 石蜡 5 10 m HE特殊染色 目的 使组织切片着色 便于观察 常用HE染色苏木精 hematoxylin 碱性染料染细胞核及细胞质内核糖体成紫兰色 伊红 eosin 酸性染料染细胞质及胶原纤维成粉红色 染色 染色 嗜碱性 basophilia 易被碱性染料着色嗜酸性 asidophilia 易被酸性染料着色中性 neutrophilia 与两种染料的亲和力都不强 亲银性 嗜银性 银染Silverstaining异染性 甲苯氨蓝染色 2 其他组织切片的制作方法 冰冻切片 可保存蛋白质的结构和性质取材 速冻 冰冻切片 染色 封固铺片 疏松CT或肠系膜等涂片 体液标本 如血液 精液 脑脊液等磨片 如牙 骨等坚硬组织可磨成薄片 骨磨片bonegroundsectionsilverstain 血涂片bloodsmearWrightstaining 铺片Stretchedpreparation 二 光学显微镜术 1 普通光学显微镜 2 特殊显微镜 1 荧光显微镜 fluorescencemicroscope 紫外光激发标本中的荧光物质产生各种颜色的荧光 2 相差显微镜 phasecontrastmicroscope 观察体外培养的活细胞形态结构 光 细胞内不同折射率结构时 速度和方向发生变化 特殊物镜转化为光密度差异 普通光镜图像 相差显微镜图像 3 激光共聚焦显微镜 Confocallaserscanningmicroscope 组成 激光光源共聚焦扫描系统电子光学系统计算机图象分析系统 对细胞非侵入式光学断层扫描成像 二维或三维分析 Practicalarrangementofaconfocalmicroscope Lightfromalasersourcehitsthespecimenandisreflected Abeamsplitterdirectsthereflectedlighttoapinholeandadetector 人脐静脉内皮细胞内Ca2 分布 1932年Ruska Knoll发明了电子显微镜 electronmicroscope 使观察工具的分辨率由0 2 m提高到0 2nm 1 透射电镜 transmissionelectronmicroscopeTEM分辩率为0 2nm固定 包埋 切片 染色戊二醛 树脂包埋超薄切片醋酸铀锇酸双重固定 50 80nm厚 柠檬酸铅2 扫描电镜 scanningelectronmicroscopeSEM 三 电子显微镜术 图 电镜图 透射电镜图 浆细胞 电镜扫描图 扫描电镜图 血细胞 四 组织化学 histochemistry 与细胞化学 cytochemistry 组织化学术 应用化学 物理 生物化学 免疫学或分子生物学的原理和技术与组织学技术相结合而产生的技术 能在组织切片定位 定性 定量地显示某种物质的存在与否 以及分布状况 细胞化学术 应用于游离细胞的样品 1 一般组织化学在切片上加某种试剂 与组织中的待检物质发生化学反应 在原位形成有色沉淀物 例 显示糖原或蛋白多糖的过碘酸 雪夫氏反应 PAS反应 periodicacidSchiffreaction 多糖 HIO4 多醛 Shiff试剂 乙二醇基 乙二醛基 紫红色沉淀物 PAS 猫小肠上皮的PAS染色 脂类 冰冻切片 油红O等染色电镜制片 锇酸染色核酸 Fuelgen反应 DNA或甲绿 派若宁 DNA RNA 酶类 酶作用于底物 初级反应物 有色沉淀捕获剂酸性磷酸酶 甘油磷酸钠 磷酸根 Pb2 磷酸铅沉淀 电镜光镜 硫化铵 黑色硫化铅沉淀 免疫组织化学 辣根过氧化物酶标记 胰岛B细胞呈胰岛素阳性 immunocytochemistry 定义 利用抗原与抗体特异性结合的原理 检测细胞内蛋白质及膜表面受体 抗原等大分子物质的存在和分布 组织切片标记了的抗体 2 免疫组织化学 抗原抗体复合物 人或动物的肽 蛋白质 抗原 特异性抗体 标记物 标记抗体 酶标抗体 铁蛋白或胶体金标记抗体 荧光素标记的抗体 二抗 一抗 抗原 PAP复合物 过氧化物酶 抗过氧化物酶复合物法 简称PAP法 抗原 PAP法 PAP复合物 亲和素 生物素 过氧化物酶复合物法 ABC法 生物素 Biotin 能与抗体结合而不影响抗体活性 亲和素 Avidin 可与四个生物素结合 ABC法 各标记物 ABC法 抗体 图11免疫组织化学 荧光素标记 毛细血管内皮细胞呈vWF阳性 核酸分子杂交技术是通过检测细胞内基因 DNA 的有无 及在转录水平检测基因的活性 mRNA 原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达 利用带有标记物的已知硷基顺序的核酸探针与细胞内待测的核酸按硷基配对的原则进行特异性原位结合 杂交 3 原位杂交 insituhybridization 原位杂交示脐静脉内皮细胞呈心房钠尿肽阳性 4 凝集素组织化学利用凝集素可特异性与细胞表面寡糖和糖链识别和结合的原理 对这些糖链进行定位 1 荧光标记凝集素 标本 荧光显微镜观察 2 免疫组织化学方法 抗凝集素抗体显示与糖链结合的凝集素 五 组织和细胞的定量术 显微分光光度计图象分析术 形态计量术 利用数学和统计学原理对组织切片提供的平面图象进行分析 从而获得立体的组织和细胞内各种有形成分的数量 体积 表面积等参数流式细胞仪 细胞分类和定量技术分离细胞悬液被荧光标记后 单个细胞快速通过激光照射分析区 应观信号转化为电脉冲 计算机 屏幕 六 细胞培养术及组织工程 细胞培养 cellcultrue 是把从机体取的得的细胞在体外模拟体内的条件下进行培养的技术 invitro 组织工程 tissueengineering 利用细胞培养术在体外模拟构建机体组织或器官的技术 培养 Summary ResearchmethodsformicrostructurelightmicroscopyLM microstructureparaffinsectionwithHEstainingSpecialmicroscope confocallaserscanningmicroscopeElectronmicroscopyLM ultrastructureTEMSEMHistochemistryandcytochemistryactivityImmunocytochemistryProteinandpeptidesInsituhybridizationexpressionofgenes 三 组织学与胚胎学的学习方法 一 建立立体与动态的观念 二 注意结构与功能的联系 三 重视理论与实践的结合 四 掌握学习技巧 总结规律性内容 重点掌握 组织学概念常用的研究方法 光镜技术 石蜡切片 HEstaining PAS histoc