生物工程毕业论文前言.doc

1前言1.1植物内生真菌在自然界中广泛存在，在长期的进化中，一些真菌寻找到一个理想的生活环境植物体，它们进入植物体，并且和谐地与植物生活在一起，成为植物体微生态系统的组成部分。它们生活在植物的根、茎、叶等器官的组织内部，但一般不引起植物体病害。其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官内部，被感染的宿主植物一般不表现出外在病症，但是可通过组织学方法或从植物组织中分离或从植物组织内直接扩增出微生物DNA的方法来证明其内生。由于内生真菌生活在健康植物组织内部，没有外在感染症状，所以内生真菌的存在和作用长期以来一直为人们所忽视1。20世纪30年代，科学家发现发现造成畜牧业重大损失的牲畜中毒是由于食用了感染内生真菌的牧草引起的，内生真菌的研究才得以广泛深入地开展起来。国外自发现内生真菌以来，由最初的发现、检测、分类和培养，到80年代以后关于内生真菌对植物有益影响的研究，经历了一个逐步深入的过程。虽然自1898年得到Guerin等从黑麦草中分离出第一株内生真菌以来经有一百多年的历史2。但是直到80年代初期内生真菌的研究才被重视，并且大多数的研究工作集中在温带地区和亚热带地区具有重要经济价值的植物。最近才有少数研究工作对热带地区植物开展研究。目前，内生真菌的研究不仅涉及到价值的高等植物。还包括低等的孢子植物，如苔藓、蕨类和地衣。内生真菌普遍存在于各种陆生和水生植物中，不同植物体内分离到的内生真菌数量少则十几种，多则近百种。但对于植物内生真菌的系统研究仅有20多年，所研究的宿主植物类群仅有一百多种，因此目前我们对内生真菌的认识还比较肤浅3。1993年，美国科学家StierleA.从短叶红豆衫的韧皮部分离到一株产紫杉醇的内生真菌安德氏紫杉霉(Tax-omyces andrean)， 引起了植病学家、微生物学家、生态学家的对内生真菌的广泛重视，使之成为真菌学中一个引人注目的重要研究领域，也掀起了人们对植物内生真菌及其活性物质开发的热潮。人们开始研究内生真菌对植物影响的生理生化机制和内生真菌代谢活性物质的开发应用。近20年来，在内生菌的多样性、对宿主植物影响的生理生化机制、次生代谢活性产物的开发利用等方面的研究趋向活跃。1.1.1植物内生真菌的多样性多年的研究表明，植物内生真菌是一个庞大的特殊真菌类群。植物内生真菌多数为子囊菌类(Ascomycetes)的核菌纲(Pyrenomycetes)、盘菌纲(Discomycetes)和腔菌纲(Loculoaseomycetes)，无孢菌群的多种真菌以及少量担子菌、接合菌和半知菌中常见的镰刀菌属(Fusarium)、青霉属(Penicillium)、链格抱菌属(Alternaria.)等。在多种植物中广泛分布的几个属是:半壳霉属(Leptostroma)、拟隐抱霉属(Ctyptosporipsis)，拟茎点霉属(Phomopsis)和叶点霉属(Phyllosticta)，其宿主范围涉及藻类、针叶树、灌木和草本等多个植物类群，但禾本科植物尤为常见4。在低等的苔鲜、蔗类及裸子植物和被子植物等所有研究过的陆生及水生植物中都有内生真菌的存在。Petrini对分布在不同纬度地区的200多种植物进行调查，发现几乎所有活植物体内均存在内生真菌。内生真菌分布于植物的叶鞘、种子、花、茎、叶片和根等的细胞间，其中叶鞘和种子中菌丝含量最多，而叶片和根中含量极微。植物组织内有足够的碳源、氮源，而且植物组织可以良好的保护内生针具，使之具有稳定的生存环境。按照共生部位的不同，内生真菌可分为两大类:一类是存在于植物根部的菌根真菌;另一类是存在于健康植物茎叶中的内生真菌。内生真菌主要通过两种形式传播:一种是不产生孢子，而是在植物开花期间，通过菌丝生长进入植物的胚株，经宿主的种子传播;另一种是产生孢子，通过风、降水等途径传播5。就目前的研究结果来看研究发现，从不同植物体内分离到的内生真菌的种类和数量均有差异。内生菌的宿主专一性有较大的变化，一些内生真菌能够从不同种属的植物宿主体内分离出来，有些种类的内生真菌专一性较强，它们仅限于某些特殊种属的几种植物，或专一的寄生在某一种特定的植物中。那么根据内生真菌与宿主专一性的分析，平均每种宿主植物有4一5种寄生菌，目前世界上己知的植物种类大约有25万种，据此推算内生真菌的种类至少有 110x106种。这无疑为科学研究提供丰富的资源，并将极大的丰富物种的多样性，将成为宝贵的真菌资源库6。1.1.2内生真菌的分布在同一地区同一种植物上的内生真菌类群是基本相似的，但在不同的地理区域具有不同的内生真菌类群分布。有的内生真菌在不同株龄和组织上的丰度和分布明显不同。一般情况下，随着树龄的增加，植物内生真菌种类和丰度也随之增加，这主要是因为一方面孢子通过空气和雨水传播，可以使较长年龄的树有更多机会被真菌感染；另一方面，Fisher等的研究表明随着树龄增加，植株生理状况和树木表皮结构发生改变，从而使植株更加容易受到真菌的感染7。此外，内生真菌类群的分布也受树冠高度及郁闭度的影响，一般情况，在较高、密度大、封闭均质的树冠上内生真菌的数量和丰度要比较矮、开放、暴露混合的树冠上的多。在不同气候带(如热带和温带)植物内生真菌分布也有明显区别。因为在生物多样性较高的地区，环境资源相对地更加有限，生物的生存竞争激烈，生存压力较之其他地区更大。生物要在激烈的生存竞争中取胜就必须加快自己的进化速度，这将直接影响到其代谢产物，所以在这样的地区当中，内生真菌及其代谢产物的化学多样性也是相当高的。有人将热带雨林和温带地区分离到的内生真菌做过比较，数据显示热带雨林的内生真菌产生的活性代谢产物数量更多，而且可以产生活性代谢产物的热带雨林内生真菌数目也要多于温带地区8。1.1.3植物内生菌之间及其与宿主植物之间的关系在内生真菌中，宿主的专一性变化很大。一些真菌能够从生长在不同的生态和地理条件下的属于不同科属的多种宿主植物内分离出来，但是其它一些内生真菌仅限于某一特殊种属的几种宿主植物，仅有少数几种内生真菌专一地出现在某一种特定的植物中。某些植物内生真菌具有宿主专一性9。内生真菌在长期的进化过程中为了能够更好的适应宿主植物而发展出对宿主植物有益的功能，帮助宿主植物抵抗不良环境，增强宿主植物的竞争能力，从而引成了各种各样的关系，最终发展成为共生关系以及宿主专一性。内生真菌与植物之间的相互作用还受到外在环境的影响，环境条件和宿主基因型决定内生菌的遗传多样性，环境与宿主基因型的相互作用可能使宿主对某一种特殊内生菌基因型敏感性会随环境的改变而改变，一种特殊的内生菌基因型需要找到正确的宿主基因型才能成功感染。在宿主的影响下，在不同的环境中会形成不同亚群的内生菌，在环境恶化的情况下，宿主会选择那些增强其抵抗恶劣环境的内生菌亚群的侵染10。1.2植物内生真菌的作用内生真菌长期生活在植物体内的特殊环境中，并与宿主协同进化，在演化过程中二者形成了互惠共生关系，一方面内生真菌可以从宿主中吸收营养供自己生长，另一方面内生真菌、在植物体中的生物量虽然很小，但是在宿主的生长发育和系统进化过程中起重要作用，具体说来主要有以下几方面:1.2.1促植物生长作用感染内生真菌的植物一般比没有感染植株生长速度快，许多内生真菌可产生IAA，吲哚乙腈以及细胞激动素等植物生长激素。赤霉素、吲哚乙酸、脱落酸、玉米素、玉米核苷等植物激素来源于兰科药用植物中分离出的五种内生真菌，它们对植株的生长起到良好的促进作用。内菌也能通过增强植物吸收氮、磷等营养元素，或与病原菌竞争营养和空间或直接产拮抗物质而抑制病原菌，从而间接促进植物生长11。 1.2.2增强宿主植物抗逆境、抗病虫害等作用内生真菌对植物抗逆性的增益作用既表现在非生物胁迫（如抗高温、抗干旱等）方面，也表现在生物胁迫（如阻抑昆虫和食草动物的采食、抵体病虫害等）方面。Read和Camp通过3年的放牧实验观察到受内生真菌感染的高羊茅的产草量比未受感染的高，尤其是在夏季干早高温时期，未受感染的高羊茅产量减少54%，而受感染的仅减少4%。Mark和Clay进步对高羊茅的光合特性进行了研究，发现当气温超过35时，感染植株的光合速率比未感染柏林高20%25%。感染植物的内生真菌能产生多种生物碱和真菌毒素如黑麦草碱、麦角碱、波胺和覃青毒素等，这些次生代谢物因对食草动物和昆虫等有毒性或能升高宿主植物的适应性，从而能提高植物对多种食草昆虫的抗性12。Prestidge等观察到内生真菌感染的多年生黑麦草可以抵抗阿根廷茎象鼻虫的侵袭。Cheplick和Clay用黑麦草和高羊茅感染植株叶片饲喂秋粘虫幼虫，发现其存活率和生长速率明显降低，且发育延迟。Arachevalete等发现感染内生真菌的高羊茅植株在水分胁迫条件下的生产力高于未感染的植株。同时也有报道指出内生真菌的侵染还可以提高植物对其它生物如病原菌和真菌、线虫、昆虫及哺乳动物的抗性，如毛白杨中的内生真菌能增强其对常见病害的抵抗作用13。1.2.3增强宿主植物的他感作用他感作用就是一种植物通过向体外分泌代谢过程中的化学物质对其它植物产生直接或间接的影响。牧草内生真菌产生的毒麦碱对邻近植物有较强的他感作用。禾本科植物内生真菌能产生4大类(即有机胺类如peramine，毗咯里西啶类如loine，吲哚二菇衍生物类如loitrem B，麦角碱类如ergouallne等)多达数十种的生物碱，其中毒麦碱使得一定范围内感染内生真菌的牧草连年蔓延，而其它植物不能生长，增加了被感染牧草的生存竞争能力14。在木本植物中，也己发现由于内生真菌的感染，使得害虫对该植物的取食频率大为降低。Springer研究发现，内生真菌感染的苇状羊茅种子抽提物可使三叶草发芽率降低,幼苗茎长增加，根长缩短；与生长在水中的幼苗相比，生长在抽提物中的三叶草幼苗根毛长度和密度分别减少34%和45%。对多年生黑麦草进行此类研究时也得出类似结论。生长旺盛的被内生真菌感染的多年生黑麦草草场中，三叶草含量通常较未感染草场少15。1.3内生真菌代谢产物的研究1.3.1抗肿瘤活性物质1.3.1.1紫杉醇紫杉醇（Taxol）是从红豆杉属植物中分离得到的一种紫杉烷类二萜化合物。紫杉醇的化学结构分为两个部分:由紫杉烷类的三环二菇构成的基本骨架和连于C13上复杂的p-苯丙胺酸侧链。紫杉醇对许多肿瘤细胞都有明显疗效，尤其是晚期卵巢癌和乳腺癌。其作用的靶位点是细胞骨架的微管系统，其结合位点是p微管蛋白N端的第31位氨基酸残基和第217-231位氨基酸位点上，增加微管蛋白聚合的速度和产量，缩短聚合潜伏期，降低微管蛋白聚合所需的临界温度，并能拮抗Ca2+或冷引起的微管解聚，使微管蛋白在缺乏微管相关蛋白、GTP或低温等条件下产生聚合，而且也可直接结合于微管上使微管的稳定性增加，从而抑制了纺锤体的形成，导致有丝分裂无法完成，细胞周期阻断于G2/M期，但对DNA、RNA或蛋白质的合成没有显著影响。近年来，许多研究者发现紫杉醇能够诱导多种癌细胞的凋亡，但紫杉醇对微管系统的作用及G2/M期的阻滞并不是诱导细胞凋亡的唯一机制，可能还有许多其它的信号传导通路参与紫杉醇诱导的细胞凋亡16。紫杉醇在红豆杉植物中含量极低(一般在干树皮中含量只有(0.01%),并且红豆杉属于濒危珍稀植物,资源有限,生长又很慢,所以价格及其昂贵。通过大量砍伐红豆杉属植物的方法不但危及到自然界的生态平衡,而且也会带来紫杉醇原料的枯竭。因此,寻找紫杉醇未来新的生产途径,已成为摆在人类面前的一项重大研究课题。1991年美国蒙大拿州立大学有机化学家Strobel首次从短叶红豆杉(Taxusb-revifolia Nutt.)的韧皮部分离到一株产紫杉醇(Taxol)的内生真菌安德鲁紫杉菌（Taxomycesandreana），经培养,采用质谱、色谱(TLC/HPLC)和放射性化学标记等方法证明了T.andreanae三周培养物中存在紫杉醇及其类似物。尽管产量较低（每升发酵液含紫杉醇2450 ng）但是，这些真菌产生的紫杉醇与红豆杉紫杉醇结构和性质完全一样17。随后，许多人分离到不同的产紫杉醇的真菌。例如，Strobel等从西藏红豆杉枝条上分离到一株小孢拟盘多毛孢(P.microspora)，紫杉醇的产量达到每升发酵液含6070g，比安德烈紫杉菌高出1000多倍。Li等从红豆杉属植物以外的落羽松中分离到20多株真菌，多数为小盘多拉毛霉，其中有9株可产紫杉醇，在其中一株菌的液体培养物中测得紫杉醇产率为1487ng/L18。我国学者也发现了多种产紫杉醇的内生真菌，1994年邱德有等首先从云南红豆杉(T.yunnanensis)的树皮中分离出一株可产紫杉醇的内生真菌。王建峰等也从南方红豆杉的主干和侧枝树皮中分离到一株瘤座孢菌，发酵产物分析表明可产紫杉醇，产量为185.4g/L19。周东坡，平文祥等从东北红豆杉(Taxus cuspidata)、杉属植物分离出多株内生真菌，利用PDA培养基分离到单菌落，在无红豆杉浸汁的S-7液体培养基中扩培，然后采用氯仿与甲醇的混合液萃取培养物培养后的上清液，再用CHCl3溶出，进行柱层析提纯，采用TLC/HPLC技术检测到其液体培养物中含有紫杉醇或紫杉醇类似物成分，其中3株产紫杉醇的内生真菌产率为51.06一125.70g/L20。1.3.1.2鬼臼毒素鬼臼毒素(Podophyllotoxin)是一类天然木脂类化合物，有显著的抗肿瘤活性，能抑制微管蛋白的聚合作用和DNA拓扑异构酶活性，以它为母体改造所得的一些衍生物如:依托泊甙和替尼泊甙等已用于临床。但是鬼臼类植物生长缓慢，全世界分布极少，鬼臼毒素在植物中含量也很低。2002年杨显志等从云南境内的桃儿七、南方山荷叶和川八角莲等药用植物中，分离到6株能产鬼臼毒素的内生真菌，分属于青霉属(Penicillium)、交链霉属(Alternaria)、丛枝霉属(Monilia)和无孢菌群(Mycelia sterilia)，此外从中华山荷叶(Diphy-lleia sinesis Li.)的根状茎中分离出的纠缠青霉(Penicillium implicatim)和从桃儿七地下茎的韧皮部中分离到的两株内生真菌，也均能产鬼臼毒素类物质21。1.3.1.3长春碱类长春碱(Vinblastine)、长春新碱(Vincristine)是五十年代末，从长春花中发现的具有抗肿瘤活性的生物碱，尤其对白血病具显著疗效。这些生物碱在植物体内含量低，且植物生长缓慢，资源短缺，限制了抗癌药物的进一步开发。而从长春花的内生真菌中分离提取出长春新碱解决拉了这一难题22。目前已经从长春花中分离出了70多种生物碱，具较强的抗肿瘤活性成分主要是二聚吲哚类化合物，如长春碱(VLB)、长春新碱(VCR)等。郭波等从长春花树皮中分离到多株内生真菌，其中有两株经鉴定为交链孢霉(Alternaria sp.)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)，用TLC和HPLC分析液体培养物，检测到长春新碱成分的存在23。杨显志等从长春花叶中分离出一株内生真菌97CY3，属无孢菌群(Mycelia sterilia)，用TLC和HPLC技术对其发酵液提取进行分析检测，长春新碱的产率约为0.205g/L24。.1.3.1.4喜树碱喜树碱(Camptothecin)是一种色氨酸衍生的萜烯类吲哚生物碱，1966年从我国引种的特有树种喜树（Campotothecaacuminata Decaisne）茎的提取物中首次分离。喜树碱类药物是迄今为止发现的唯一一类专门通过抑制拓扑异构酶I发挥细胞毒性作用的抗癌药物。喜树碱在临床上广泛应用于肝癌、胃癌、膀胱癌及白血病等的治疗，是继紫杉醇之后第二个获准上市的具高效抗癌活性的天然药物。但是喜树中喜树碱、羟基喜树碱的含量极低(0.01%0.10%)，且结构复杂难以合成，远远不能满足临床治疗的需要25。2005年Puri SC等从印度西海岸臭味假柴龙树中分离到一株Phycomycetes属的真菌能产生喜树碱，他们通过UV，IR，CD，LC/MS，LC-MS/MS等方法确定真菌所产的喜树碱结构和植物中所提取的相同。同时还验证了它们具有相同的生物学活性。我国科学家陈贤兴等从喜树果实中分离到5株内生真菌，初步鉴定分别属于半知菌亚门的匙孢霉属(Mystrosporium Cda)、鲜壳孢属(Zythia Fr.)及无孢菌群(Mycelia sterilia)，其中有一株内生真菌能产生喜树碱类似物26。Liu等人从喜树树皮中分离纯化了42株真菌，其中有1株炭角菌属（Xylaria sp.）内生真菌在摇瓶培养中，添加0.1 mmol/L水杨酸作为外源诱导子，10-羟基喜树碱产量可达到5.4 mg/L27。1.3.2抗菌类活性物质植物内生真菌能产生种类繁多的抗菌类活性物质，如肽、有机酸等28。Strobl等从药用植物雷公藤的内生真菌栋树拟隐抱壳(Cryptopsoripsis quecrnia)中分离到一种具有抗霉菌活性的环肽类化合物一一一Cyrptocandin，其含有很多稀有氨基酸，不仅对许多植物病原菌如核盘菌(Scelortnia sclerotioum)和灰葡萄孢(Botrydtis cinerea)等有抗菌活性，还对一些重要的人类病原真菌如白假丝酵母(Candida albicans)、毛癣菌(Trichophyton sp.)等有抗菌活性，其MIC值与临床应用的抗真菌药两性霉素B相当，有望开发成抑制皮肤和指甲真菌感染的潜在药物。分离自同一内生真菌的另一代谢产物一种新的生物碱Cryptocin，对稻瘟病菌(pyricularia oryzae)及其他多种植物病原真菌有抑制作用(MIC=0.39g/mL)，但对人体病原菌没有抑制作用29。Zou等从黄花篙(Artemisia annua)和蒙古篙(Artemisia mongolica)分离到10余种内生真菌，其中一株刺盘孢霉(Colletorichum sp.)内生真菌能产生炭疽菌酸(Colletotric acid)等3种新的抗菌活性物质，对枯草芽抱杆菌、金黄色葡萄球菌和八叠球菌的MIC在25一75g/mL之间，对白色假丝酵母、黑曲霉的MIC在50一100g/mL之间30。1.3.3植物生长调节剂类已有多篇文章报道内生真菌可产生植物生长激素类物质，如IAA、吲哚乙腈等。大多数黄花蒿内生真菌在体外培养时能产生对小麦和黄瓜幼苗生长产生不同程度的抑制或促进作用的代谢产物，对其中一种炭疽菌(Colletotrichum sp.)发酵产物的深入分析表明，该菌能产生植物生长激素IAA。兰科植物内生真菌的一些菌株也可产生植物生长调节物质，如玉米素(Z)、生长素(IAA)、赤霉素(GA)、脱落酸(ABA)等，对宿主植物的生长起促进作用31。1.3.4杀虫类活性物质在早期对植物内生真菌与宿主植物的关系以及与食草牲畜中毒原因的探索中，对禾本科植物内生真菌的次生代谢产物进行了广泛研究。结果表明，禾本科植物内生真菌能产生多种生物碱，如有机胺类，麦角碱类等。这些生物碱具有抗病原菌、抗线虫等多种生物学活性。Rowan证实黑麦草内生枝顶孢菌产生的活性物质过胺是一种广谱性昆虫拒食剂。Blankenship等证实了禾本科植物内生真菌Neotyphodium uncinatum代谢的是一种广谱性杀虫物质。此外还从内生真菌感染的一种早熟禾(Poa ampla)中分离到数个对蚊子幼虫有毒性的黄酮类化合物32。Findlay等从胶冷杉(Abies balsamea)中分离到一株内生真菌，在其发酵产物中分离出2个二菇类化合物，它们对枞色卷蛾的胃毒致死率分别为28%和32%；从黑云杉(Picea mariana)的一株内生真菌(Canopolea elegana)的液体发酵物中分离到的2个异香豆素类化合物，它们对云杉蚜虫均有明显的毒性。由藤蔓植物(paullina paullinioides)分离出的内生真菌Muscoder vitigenus产出的Naphthalene是樟脑球的有效成分，该物质可以有效地驱赶一些昆虫，如叶蜂等。研究还发现，将内生真菌Acremonium atlernatum接种到大白菜上，能够对取食的小菜蛾（Plutella xyostella）幼虫产生影响，延迟幼虫的生长、发育和化蛹等，并提高幼虫的死亡率33。在木本植物中也已发现由于内生真菌的感染，使得害虫对该植物的取食频率大为降低的现象，还发现内生真菌的存在可以减少虫瘿的形成34。 1.3.5抗氧化类物质自由基又称游离基,是指外层轨道含有未配对电子的基团,主要可分为氧自由基和非氧自由基。它的化学性质非常活泼，容易与其它物质发生连锁反应。在正常的生命过程中，自由基是维护生命所必需，在体内处于一种不断产生、不断清除的动态平衡中，始终维持在一个正常的水平，可以说是机体的一种有效的防御系统。它可以增强白细胞的吞噬功能，提高杀菌作用，参与前列腺素、脂肪加氧酶、胶原蛋白、凝血酶原等物质的合成，同时还参与肝脏的解毒作用，在调节细胞分裂、维持人体正常的氧化代谢过程，增强抗菌素效力和抑制肿瘤等方面也发挥作用。当自由基的量过低，会对机体生命活动带来不利影响；但产生过多或清除过慢，多余的自由基就会通过攻击生命大分子物质及各种细胞器，造成机体在分子水平、细胞水平及组织器官水平的各种损伤，加速机体衰老进程并诱发各种疾病 35。大量科学研究证实,大约有100种疾病与自由基有关，因此寻找有效的抗氧化剂就显得十分重要。但由于人工合成的抗氧化剂成本较高,且有较大的毒副作用,因而天然产物抗氧化剂的寻求已成当务之急36。Harper等人37从Terminalia marobensis植物内生真菌Pestalotiopsismicrospora的发酵物中分离到具有抗氧化作用的异苯并呋喃类化合物Isopestacin。他们还从雨林植物的同样内生真菌Pestalotiopsis microspora中分离到具有抗氧化活性的同类化合物Pestacin。实验证实，两者既具有抑菌活性，又有抗氧化活性。Pestacin是一种消旋体，实验发现其抗氧化活性至少比Trolox(VE的衍生物)大一个数量级。Isopestacin的结构与黄酮相似，在缓冲液中，它可以消除超氧自由基和轻基自由基。王梅霞，霍娟，陈双林等38对银杏生真菌刺盘孢Colletotrichum sp.、刺孢壳Chaetomella sp. 进行了液体震荡培养，利用硫巴比妥酸(TBA)反应法证实其培养液提取物具有强抗氧化活性，通过薄层层析(TLC)和高效液相色谱(HPLC)分析初步鉴定其抗氧化活性成分为黄酮类化合物。霍娟39从不同地区杜仲组织中共分离到254株内生真菌菌株，其中刺孢壳一株菌株的发酵代谢产物具有较广谱的抗菌作用和较高的抗氧化活性，TLC与HPLC检测显示其培养物提取液抗氧化性能高于同浓度的芦丁和抗坏血酸，仅次于维生素E。刘小莉等40采用正己烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇5种溶剂分别提取银杏内生炭角菌子座粉末，提取物中总酚和总黄酮含量均与抗氧化活性存在正相关关系，甲醇提取物中的总酚和总黄酮在-胡萝卜素/亚油酸试验中，400g/ml的YX-28甲醇粗提物具有72.90%的抑制活性，显著高于阳性对照二丁基羟基甲苯(BHT)和抗坏血酸(VC)；而在DPPH自由基清除实验中则显示中等活性。史佳琴等41利用抗氧化测试盒测定了分离自槐树的12个内生真菌菌株的总抗氧化活性，结果表明在探寻天然抗氧化活性产物中槐树内生真菌具有重要价值。侯奎等42在葛(Pueraria lobata)的根、茎、叶以及果实中分离出128株内生真菌,并采用二苯基苦基苯肼自由基酶标仪法对其清除自由基活性进行检测。结果表明,有多株内生真菌具有不同程度的清除自由基活性, 同种菌株清除自由基活性与提取液浓度、反应时间成正比关系,即样品浓度增加活性增强,反应时间增长其活性也增强。其中菌株10y-4在浓度2.5mg/ml、反应时间为20min时,其清除自由基活性达到92.3%。表明葛内生真菌可作为天然的高效抗氧化剂进行开发利用。 1 吴静萍，郑师章.密花石斛菌根菌分离鉴定及其代谢产物的测定J.复旦学报，1994，33（5）：522-5472 黎万奎，胡之璧，内生菌与天然药物J.中国天然药物，2005,3(4):193-199.3 杨春平，陈华保，吴文君等.植物内生真菌次生代谢产物的多样性及潜在应用价值J.西北农业学报.2005,14:126-132.4 王永中，肖亚中.植物内生菌及其活性代谢产物J.生物学杂志，2004，21(4):l一55 任安芝 高玉葆.植物内生真菌一类应用前景广阔的资源微生物J.微生物学通.2001，24（6）:90-936 官珊，钟国华，孙之潭 等.植物内生真菌的研究进展J. 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