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文档简介

定量一站式问题 汇报人 贾彦军 主要内容 1 RT PCR基础知识 2 RNA提取要点 3 逆 反 转录注意事项 4 Qrealtime PCR分析 PCR基础知识 PCR 定量PCR 实时荧光定量PCRRT PCR定量PCR的原理定量PCR的用途定量PCR的基本流程 用途 GWAS 流程 实验设计 引物设计及合成 结果整理 数据分析 Realtime PCR 反转录cDNA 基因组DNA去除 TotalRNA提取 TotalRNA提取 1 样品的保存2 试剂的选择3 操作的细节4 RNA质与量的检测及保存 样品的保存 试剂的选择 广谱RNA提取试剂小RNA提取试剂体液RNA提取试剂体液miR RNA提取试剂病毒 细菌 多糖多酚植物RNA提取试剂 操作 速度 质量 全程低温 cen 液氮使用 器械耗材准备 个人防护 实验环境 手法得当 DEPC 快 冷 准 细 细节决定一切 操作细节 细节总结 RNA RNA质与量的验证 浓度 完整性 纯度 琼脂糖凝胶电泳 TBE 沉降系数紫外分光光度计 荧光光度计 反转录注意事项 加样 顺序 预混 低温 涡旋 离心 上机 程序 位置 手法 cDNA的保存 20 80 Qrealtime PCR 试剂选择与保存 Syber ddH2O Primer 操作要点结果分析注意事项 试剂保存 SyberGreen FAM 4 20 80 白色沉淀处理 ddH2OPrimer 稀释 保存 顺序 量 cDNA 用量选择适当 决定Ct值 结果分析 扩增无峰值 扩增有杂峰 扩增有杂峰 填充好的Needleman Wunsch表格 扩增有杂峰 欧洲生物信息学研究所BLAST服务器的用户界面 扩增有杂峰 扩增有杂峰 扩增效率有异常 注意事项 不经一番寒彻骨 哪得梅花扑鼻香 天道
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