临床常见酵母样真菌鉴定方法的比较.pdf

医学信息 2012 年 12 月第 25 卷第 8 期 Medical Information Dec 2012 Vol 25 No 8临 床 医 学 分级标准 IV 级膝关节 OA 患者纳入其中 因为我们认为 IV 级患者 X 线检查已显示膝关节间隙明显狭窄 关节周围大量骨赘及严重软 骨下骨硬化及明显畸形 膝关节镜清理术已经无法去除关节内增生 骨赘 破坏骨关节炎的恶性循环 4 所以对于此类患者 膝关节置换 是最好的选择 参考文献 1 骨关节诊治指南 2007年版 中华医学会骨科学分会 2 Belickas J Vitkus L Fiodorovas M et al Efficiency of arthroscopic treatment in the knee osteoarthritis J Medicine Kaunas 2003 39 11 1028 1029 3 李光淳 张利恒 桑平等 关节镜下清理术治疗膝关节骨关节炎的临床研究 J 吉林医学 2008 29 23 2150 2151 4 Steadman JR Rodkey WG Briggs KK Microfracture to treat full thickness chondral defects surgical technique rehabilitation and outcomes J Knee Surg 2002 15 3 170 176 编辑 许言 收稿日期 2012 11 15 近年来 随着免疫受损宿主如肿瘤 自身免疫病 器官移植 糖尿 病 艾滋病等患者的不断增多 临床上以酵母样真菌为主的真菌感染 越来越多 而新的条件致病真菌菌不断发现 真菌感染菌种构成的 变化又给临床诊治带来困难 国内有报道 ICU 病房酵母样真菌感染 分离到的菌种中 白念珠菌远远低于一般临床标本所占的比例 其 他菌种大幅度增加 原因可能与近年应用氟康唑预防治疗有关 1 因 此快速 准确鉴别念珠菌对指导治疗真菌感染意义重大 现用三种 方法对 21 株酵母样真菌进行鉴定 寻求快速 准确 满足临床要求 的鉴定酵母样真菌的方法 1资料与方法 1 1 一般资料 21 株酵母样真菌来源于我院 2009 年 3 月 5 月间临 床各科室 主要为呼吸科和 ICU 病房 其中痰和咽拭子 13 份 肺泡 灌洗液 4 份 分泌物 3 份 血培养 1 份 1 2 培养基和试剂 血平板 麦康凯及巧克力平板购自郑州安图生物 工程有限公司 CHROMagar 念珠菌显色培养基干粉购自郑州博赛公 司 沙氏培养基干粉 玉米 吐温 80 琼脂干粉购自杭州天和微生物 试剂有限公司 按说明配制 Vitek32 YBC 卡为法国生物梅里埃产 品 酵母样真菌同化试验编码鉴定管为杭州天和产品 1 3 仪器 法国生物梅里埃 Vitek32 微生物鉴定仪 Nikon Microphot 显微镜 30 培养箱 1 4 质控菌株 采用从健康志愿者口腔分离 经鉴定确认为白念珠菌 的菌种为质控菌株 1 5 方法 1 5 1 分离培养 临床标本接种于血平板 麦康凯 巧克力及沙氏平 板 待菌落形成后 观察菌落形态及革兰染色镜检观察孢子及菌丝 确认是酵母样真菌后分别采用同化试验 显色法及 YBC 卡进行鉴 定 1 5 2 同化试验 取沙氏平板或血平板上单个菌落 配成 0 5 麦氏浊 度菌液 取 25 l 接种于同化鉴定管及阴性对照 30 孵育 48h 取出 判读结果 同时取单个菌落转种玉米粉 吐温 80 琼脂 30 孵育 48 小时后于显微镜下观察有无菌丝产生 酵母菌在同化鉴定管上部生 长 浊度明显强于对照管判定为阳性 玉米粉 吐温 80 琼脂上有菌 丝生成判定为阳性 按所得编码查询所代表的酵母菌菌名 再根据 鉴定值 T 值和该编码在鉴定结果中的排位进行结果分析 得出判定 结果 编码在 10 位以后且鉴定值和 T 值较低者 重复试验 结果仍 不可靠者 判定为未检出 1 5 3 显色法取沙氏平板或血平板上单个菌落 划线法转种于 CHROMagar 念珠菌显色培养基 30 培养 24h 后观察颜色变化 在 培养基上生为翠绿色菌落为白念珠菌 蓝灰色菌落为热带念珠菌 紫红色为光滑念珠菌 粉红色边缘模糊有微毛为克柔念珠菌 白色 及灰色为其他念珠菌 颜色不典型者延长培养时间观察或分纯后重 新接种 1 5 4 YBC 卡 取沙氏平板或血平板上单个菌落配成 2 0 麦氏浊度菌 液 放置负压冲灌 VITEK 真菌培养鉴定卡 置 30 培养箱 孵育培养 24h 48h 各读卡 1 次 记录鉴定仪鉴定出的结果 并以 48h 的为最终 结果 2结果 2 1 鉴定结果 见表 1 显色法鉴定结果见图 1 图1显色法鉴定21株酵母样真菌 其中 1 3 4 5 6 7 9 10 12 16 18 鉴定为白念珠菌 2 11 13 15 19 鉴定为热带念珠菌 14 17 20 鉴定为光滑念珠菌 8 21 未能 鉴定出 2 2 符合率 同化试验 显色法鉴定与 YBC 卡的符合率见表 2 2 3 鉴定时间21 株酵母样真菌经三种方法鉴定得出结果的时间见 表 3 临床常见酵母样真菌鉴定方法的比较 许丽虹 周竞贤 昆明市延安医院检验科 云南 昆明650051 摘要 目的 为寻求快速 准确 满足临床要求 比较3种常见酵母样真菌鉴定方法 方法 对我院临床分离出的21例酵母样真菌分别采用同化 试验 显色法 YBC卡进行鉴定比较 结果 同化试验鉴定出11例白念珠菌 3例光滑念珠菌 2例近平滑念珠菌 与YBC卡总符合率为76 2 16 21 显色法鉴定出11例白念珠菌 3例光滑念珠菌 5例热带念珠菌 与YBC卡的总符合率为90 5 19 21 YBC卡鉴定出12例白念珠 菌 3例光滑念珠菌 4例热带念珠菌 2例近平滑念珠菌 结论 对于酵母样真菌首选CHROMagar念珠菌显色培养基对进行培养 少数显色不 典型或不能显色的菌落再采用Vitek32 YBC或同化试验及形态学进行鉴定 关键词 酵母样真菌 同化试验 CHROMagar念珠菌显色培养基 Vitek32 YBC 表121株酵母样真菌经三种方法鉴定结果 菌种 白念珠菌 热带念珠菌 光滑念珠菌 近平滑念珠菌 同化试验 2 3 2 2 显色法 1 2 2 2 YBC 1 1 1 1 表2同化试验 显色法鉴定与YBC卡的符合率 菌种 白念珠菌 热带念珠菌 光滑念珠菌 近平滑念珠菌 总符合率 同化试验与 YBC 卡 100 11 11 0 0 5 100 3 3 100 2 2 76 2 16 21 显色法与 YBC 卡 100 11 11 100 5 5 100 3 3 0 0 2 90 5 19 21 表321株酵母样真菌经三种方法鉴定得出结果的时间 菌种 白念珠菌 热带念珠菌 光滑念珠菌 近平滑念珠菌 同化试验 2 3 2 2 显色法 1 2 2 2 YBC 1 1 1 1 216 万方数据 医学信息 2012 年 12 月第 25 卷第 8 期 Medical Information Dec 2012 Vol 25 No 8临 床 医 学 收稿日期 2012 11 15 急性有机磷农药中毒 AOPP 是我国最常见的农药中毒 是基层 医院常见的临床急危重症 其并发症多 病死率高 由于治疗方法条件 不同 救治成功率差异很大 阿托品是救治有机磷农药中毒的传统治 疗的首选解毒剂 本院自 2007 年 6 月 2012 年 6 月应用盐酸戊乙奎 醚注射液 长托宁 取代阿托品救治 52 例 AOPP 患者 取得满意效 果 现报告如下 1资料与方法 1 1 一般资料 本组 52 例均为本院收治的有机磷农药中毒患者 男 性 18 例 女性 34 例 年龄 15 60 岁 平均年龄 32 5 岁 根据患者临 床表现及全血胆碱酯酶 ChE 活力测定 参照 职业性 AOPP 诊断标 准及处理原则 1 进行分级 本组中轻度中毒 12 例 中度中毒 30 例 重度中毒 10 例 均为口服中毒 其中敌敌畏 24 例 甲胺磷 13 例 对 硫磷 9 例 乐果 6 例 服药到入院时间为 0 5 4h 平均为 1 5h 1 2 方法 1 2 1 一般治疗 患者入院后均立即给予清水 10000 30000ml 彻底洗 胃 以清除毒物 保留胃管 以后可重复洗胃 清洗受污染的头发 皮 肤及衣物 防止呕吐物经皮肤或呼吸再吸收 引起症状复发 加重病 情 洗胃后经胃管注入甘露醇导泻 所有患者根据病情不同给予稳 定生命体征 维持呼吸功能 维持水电解质酸碱平衡 防治心搏骤 停 中毒性脑病 防治继发性感染 具体措施有吸氧 通畅呼吸道 利 尿 补液 营养细胞 补充能量 抗感染 进行心电监护 监测 ChE 活 力 肝肾功能等 1 2 2 解毒治疗 根据中毒程度给予长托宁 成都力思特制药股份有 限公司生产 肌注给药 除轻度中毒外 长托宁首次用药均需与氯磷 定伍用 轻度中毒者 长托宁 2mg 肌内注射 中度中毒者 长托宁 2 4mg 肌内注射 氯解磷定 1000 1500 肌内注射 重度中毒者 长托宁 4 6mg 肌内注射 氯解磷定 1500 2000 肌内注射 首次给药 30min 如 中毒症状尚未完全消失和 ChE 低于 50 时 再给予首次用药半量 如中毒症状明显消失和 ChE 活力恢复至 50 以上 暂停药观察 如 首次给药后 1 2h 症状仍未消失或又重新出现和 ChE 低于 50 时 再给予首次用药的半量 同时应重新洗胃或清除患者体内农药 中 毒 48h 后如中毒症状基本消失但 ChE 活力仍低于 50 以下时 酌情 每 6 12h 肌内注射长托宁 1 2mg 维持 长托宁化 直至 ChE 活力 恢复至 50 60 长托宁化 指标为 口干 皮肤干燥 双肺呼吸音清 楚 不能以瞳孔扩大和心跳加快等作为指标 因为长托宁对心跳无 明显加快的作用 中毒症状基本消失和 ChE 活力恢复至 60 以上 可停药观察 停药 24 48h 如 ChE 活力仍维持在 60 以上 可考虑 患者出院 2结果 本组住院时间 2 7d 平均 3 2d 本组 52 例中 12 例轻度中毒患 者均治愈 30 例中度中毒中 27 例治愈 3 例好转 10 例重度中毒患 者中 8 例治愈 1 例好转 1 例死亡 总治愈好转率 98 1 中毒症状 消失时间 轻度者 10 30min 中度者 30 60min 重度者 45 180 min 应用长托宁救治过程中 达 长托宁化 时 心率 75 110 次 min 维 持 长托宁化 时 心率 60 95 次 min 停用长托宁无反跳现象 仅有 5 例出现躁动 谵语 3讨论 盐酸戊乙奎醚注射液 长托宁 是我国一类新药 2003 年获国 家技术发明二等奖 其是一种新型 高选择性 高效 低毒的解有机 磷药物 特别是对中枢神经 M N 受体 和外周神经有较强抗胆碱作 用 能很好地对抗有机磷毒物引起的惊厥 中枢呼吸衰竭和其他外 盐酸戊乙奎醚救治急性有机磷农药中毒临床观察 许传龙 1 刘晓春2 1 会昌县西江中心卫生院 江西 会昌341000 2 赣南医学院第三附属医院 江西 赣州341000 3讨论 3 1 结果分析 对于显色法和 YBC 卡鉴定为热带念珠菌 5 株菌种 同化试验未能鉴定出 且鉴定编码均为 67032 编码分析如下 近 平滑念珠菌 鉴定值 50 8 T 值 0 49 编码在鉴定结果中排位 13 热带念珠菌 鉴定值 29 6 T 值 0 51 编码在鉴定结果种排位 15 判 定结果 结果不可靠 未鉴定出 其鉴定失败原因是试验方法设计缺 陷 还是菌种表型发生了改变 未同化卫矛醇 还有待进一步探讨 3 2 方法评价 3 2 1 同化试验操作较繁琐 鉴定时间长 但对于基层医院酵母样真 菌的鉴定仍有价值 本次试验中除外热带念珠菌 其他菌种的鉴定 与 YBC 卡一致 若能发现鉴定热带念珠菌错误的原因 同时结合玉 米粉 吐温 80 琼脂上形态学及其他试验 可进一步提高鉴定准确 性 3 2 2 显色法鉴定程序简单 快速 显色法能鉴定临床常见 99 5 的 念珠菌 2 本次试验仅两株酵母样真菌菌落为白色不能鉴定 其余鉴 定与 YBC 卡一致 在本次试验中发现 从 CHROMagar 念珠菌显色培 养基上分离的念珠菌对于 YBC 卡鉴定无任何影响 用于同化试验也 无影响 同时发现部分细菌和丝状真菌也能在显色培养基上生长 但菌落形态 颜色和生长速度明显不同 念珠菌混合感染或与细菌 合并感染均可作出明确判断 3 2 3 有报道称 3 在 CHROMagar 念珠菌显色培养基上部分菌种也 能产生相似的颜色 酿酒酵母和异常汉逊酵母菌可产生紫色菌落 且菌落形态与光滑念珠菌菌落十分相似 白地霉菌可产生类似克柔 念珠菌的粉红色膜样菌落 但这些菌种在玉米粉 吐温 80 琼脂上 的形态有较大差别 容易区分 因此显色培养基结合玉米粉 吐温 80 琼脂可进一步提高准确性 尤其热带念珠菌与光滑念珠菌的菌落颜 色在 24h 内难以区别 需延长培养时间至 48h 才可进行准确判定 3 2 4 Vitek32 YBC 卡鉴定酵母样真菌快速 准确 但需要专门的仪 器 价格较贵 难以在基层医院 普及 且有资料报道 3 VITEK YBC 系统对少见酵母菌株 均包括在 YBC 数据库中 的鉴定并不理想 YBC 系统对都柏林念珠菌 郎比念珠菌 白吉利丝孢酵母菌及隐球 菌属 非新型隐球菌 均有错误鉴定 3 2 5 临床长期应用广谱抗生素和皮质激素 恶性肿瘤 外科手术 侵入性治疗及 HIV 感染是真菌感染的危险因素 真菌感染的状况日 益复杂 以上鉴定方法对一些新的条件致病菌 如都柏林念珠菌 异 常毕赤酵母等及一些双向型真菌如组织胞浆菌 马尔尼菲青霉菌等 菌难以鉴定 因此临床医生和微生物工作者都应提高对真菌感染的 认识 高度怀疑深部真菌感染的患者 应加种蔡氏培养基 脑心浸液 琼脂等以及延长培养时间