检测中心培训-硝基呋喃类药物的残留检测.ppt

检测中心培训 二 080115 硝基呋喃类药物代谢物的残留检测 LC MS MS 一背景简介 硝基呋喃类药物对大肠杆菌 沙门氏菌引起的消化道感染效果很好硝基呋喃类药物价格低廉 一背景简介 硝基呋喃类药物有致畸 致癌等副作用1997年欧盟禁用2002年美国 中国禁用2006年肯定列表把它列为禁用药 二硝基呋喃类药物的性质 硝基呋喃类药物在体内代谢很快 原形药物是无法检测的代谢产物可稳定存在数月 所以残留检测以代谢物作为指示该类药物残留的标识物 二硝基呋喃类药物的性质 呋喃唑酮分子量225 2 其代谢产物是AOZ 分子量102 1 其代谢产物的衍生物是2 NP AOZ 分子量236 二硝基呋喃类药物的性质 呋喃它酮分子量342 3 其代谢产物是AMOZ 分子量201 2 其代谢产物的衍生物是2 NP AOZ 分子量335 2 二硝基呋喃类药物的性质 呋喃妥因分子量238 2 其代谢产物是AHD 分子量115 1 其代谢产物的衍生物是2 NP AHD 分子量249 二硝基呋喃类药物的性质 呋喃西林分子量198 1 其代谢产物是SEM 分子量75 1 其代谢产物的衍生物是2 NP SEM 分子量209 三残留检测的前处理 洗涤水解 衍生化和提取净化 三残留检测的前处理 洗涤方案一 2g均质好的样品 15ml的甲醇 水 2 1 混匀1min 4000rmp离心 弃掉上清液 GB T20752 2006 方案二 5g均质好的样品 10ml的甲醇 水 8 2 混匀0 5min 振荡5min 3800rmp离心5min 弃掉上清液 同样再依次用10ml甲醇 10ml乙醇 10ml乙醚洗涤 农大 方案三 1g组织 不用洗涤 SN T1627 2005 三残留检测的前处理 水解和衍生化试剂方案一 加入20ml0 2M盐酸 加入0 3ml的衍生化试剂 75mg2 硝基苯甲醛溶于10ml二甲基亚砜 0 05M GB T20752 2006 方案二 加入20ml0 1M盐酸 加入0 2ml的衍生化试剂 0 1M 农大 方案三 加入30ml0 125M盐酸 加入1ml的衍生化试剂 100mg2 硝基苯甲醛溶于12 5ml二甲基亚砜 SN T1627 2005 三残留检测的前处理 水解和衍生化的时间方案一 37 避光振荡16h GB T20752 2006 方案二 37 避光振荡过夜 农大 方案三 37 避光振荡16h SN T1627 2005 三残留检测的前处理 水解和衍生化的时间方案一 37 避光振荡16h GB T20752 2006 方案二 37 避光振荡过夜 农大 方案三 37 避光振荡16h SN T1627 2005 三残留检测的前处理 净化方案一 加入5ml0 1M的磷酸氢二钾 并用1M氢氧化钠调pH到7 4 离心上清液过HLB柱 5ml乙酸乙酯洗脱 40 吹干 定容到1ml 10ml乙腈 0 3ml 用水定容到100ml GB T20752 2006 三残留检测的前处理 净化方案二 加入4ml0 1M的磷酸氢二钾 并用2 5M氢氧化钠调pH到7 加入10ml乙酸乙酯 混匀1min 3800rmp离心5min 吸取上清液 乙酸乙酯10ml重复提取1次 合并乙酸乙酯 45 吹干 定容到0 5ml 含10 乙腈的0 02 乙酸溶液 再加入5ml正己烷 振荡20次 3800离心3min 下层进样 农大 三残留检测的前处理 净化方案三 加入4ml1M的氢氧化钠 并用1M盐酸和0 1M氢氧化钠调pH到7 7 5 3000rmp离心10min 上清液倒入250ml的分液漏斗中 残渣用5ml水洗 3000rmp离心10min 上清液也倒入250ml的分液漏斗中 加乙酸乙酯40ml 振摇1ml 静置3min 重复提取1次 合并乙酸乙酯 通过装无水硫酸钠的漏斗过滤至鸡心瓶中 50 旋蒸至3 5ml 再转移到试管中 50 吹干 定容至1ml 0 1 乙酸 乙腈 甲醇3 3 2 SN T1627 2005 四色谱条件 方案一 GB T20752 2006 色谱柱 Atlantis C18 3 5um 150 2 1ml或相当者柱温 35 进样量 40ul流动相 A 水 含0 3 乙酸 B 乙腈 含0 3 乙酸 梯度洗脱方式 四色谱条件 方案二 农大 色谱柱 Symmetry C18 5um 150 2 1ml或相当者柱温 进样量 10ul流动相 A 水 含0 02 乙酸 B 乙腈 含0 02 乙酸 梯度洗脱方式 四色谱条件 方案三 SN T1627 2005 色谱柱 C18 5um 150 2 1ml或相当者柱温 25 进样量 15ul流动相 A 水 含0 1 乙酸 B 乙腈梯度洗脱方式 五质谱条件 方案一 GB T20752 2006 离子源 ESI 电喷雾的电压 5V辅助气 7L min 480 聚焦电压 150V碰撞室出口电压 11V去簇电压 45V 五质谱条件 方案二 农大 离子源参数离子源 ESI 毛细管电压 2 8KV萃取电压 3VRF透镜电压 0 6V离子源温度 80 锥孔气流 30L 小时雾化器流速 440L 小时 五质谱条件 方案二 农大 质量分离器参数低质量数分辨率LM1 13 0高质量数分辨率LM1 13 0离子能量1 1 0入口电压 1V出口电压 2V低质量数分辨率LM2 13 0高质量数分辨率LM2 13 0离子能量2 1 0V氩气示数 2 5e 3mbar 五质谱条件 方案三 SN T1627 2005 离子源 ESI 雾化喷嘴压力 35psi干燥器流量