苯酚-硫酸法测定保健饮料中粗多糖含量方法研究.doc

苯酚-硫酸法测定保健饮料中粗多糖含量方法研究2008年7月第10卷第7期中国现代中药ModernChineseMedicineJu1.2008Vo1.10No?7苯酚-硫酸法测定保健饮料中粗多糖含量方法研究肖苏萍,吴剑威,曹韧楠,周林,陈波(中国药材集团公司科技研发部,北京102600)摘要目的:测定保健饮料粗多糖含量.方法:采用苯酚一硫酸法测定保健饮料中粗多糖含量.结果:最大吸收波长为485nm,粗多糖含量在00.1mg与吸光度有良好的线性关系,回归方程为Y=4.6282X一0.0066,r=0.9995,测得该保健饮料粗多糖含量约为44.85mg-(100mL),回收率为97.57%,RSD=2.97%.结论:本方法简便,准确,重复性好,可控制保健饮料中粗多糖功效成分含量.关键词粗多糖;分光光度法;保健饮料目前我国对于粗多糖含量的测定方法,中国药典和一些国际标准,行业标准大多采用分光光度法进行评价,检测.保健饮料中以粗多糖作为主要功效成分的检测没有统一的法定标准方法.本研究根据文献报道及保健食品多糖功效成分检测方法,结合该保健饮料提取工艺,建立该保健饮料粗多糖测定方法,以期对以粗多糖作为主要功效成分的保健饮料产品检测提供参考依据.1仪器与试剂1.1仪器AE240型1/10万电子分析天平(瑞士MettlerToledo公司);DL一5一B低速大容量离心机(上海安亭科学仪器厂);UV一2450型紫外可见分光光度计(日本岛津).1.2试剂葡萄糖标准品(购于中国药品生物制品检定所);中药饮料产品(中国药材集团公司提供);其他化学试剂均为分析纯;所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水.2方法与结果2.1葡萄糖标准品溶液的制备精密称取干燥至恒重的D一无水葡萄糖10mg,置于100mL容量瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度,摇匀即可.2.2供试品溶液的制备精密吸取保健饮料液体试样15.0mL,加入无水乙醇60mL,使含醇量达80%,充分搅拌混匀5rain后,以3000r?min离心5min,弃去上清液,残渣用80%乙醇洗涤3次,低温烘干.残渣用水溶解并定容至250mL,得供试品溶液,备用.2.3标准曲线的绘制精密吸取葡萄糖标准品溶液0.00,0.10,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00mL(相当于葡萄糖0.000,0.010,0.020,0.040,0.060,0.080,0.10rag)分别置于25mL比色管中,准确补充水至2.0mL,加入50g?L精制苯酚溶液2.0mL,在旋转混匀器上混匀,小心加入浓硫酸8.0mL,于旋转混匀器上小心混匀,置沸水浴中煮沸20rain,冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比,1cm比色皿测定吸光度值.以葡萄糖含量为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线,计算得回归方程为Y=4.6282X一0.0066,r=0.9995.2.4重现性试验精密吸取同一瓶保健饮料,按供试品溶液制备方法制备5份溶液,分别精密吸取供试品溶液2.0mL,置于25mL比色管中,按2.3项下于加入50g?L精制苯酚溶液2.0mL起,同法操作测定吸收度,从标准曲线上计算出葡萄糖含量,并计算该保健饮料中水溶性粗多糖含量.该保健饮料中水溶性粗多糖的含量计算公式:总粗多糖含量mg?(100mL)=CDF100(其中D为稀释倍数,C为按回归方程计算出的含量,F为校正因子),结果见表1.通讯作者陈波,E.mail:chlS263.net?37?2008年7月第10卷第7期中国现代中药ModernChineseMedicineJu1.2008Vo1.10Nn7表1重现性试验结果2.5稳定性和精密度试验对同一样品溶液,在6h内每隔1h测定1次,结果RSD=0.3%,表明吸光度在6h内基本稳定.2.6回收率试验精密吸取已知粗多糖含量的供试品9份,置于25mL比色管中,精密加入一定量葡萄糖标准品溶液,按2.3项下于准确补充水至2.OmL起,同法操作测定9份样品吸收度,计算结果见表2.表2粗多糖回收率试验结果注:供试品粗多糖含量均为28.91g3讨论目前国家还没有统一规定保健食品粗多糖的含量测定方法,大部分采用3种方法,即碱性酒石酸铜滴定法,蒽酮比色法,分光光度法.碱性洒石酸铜滴定法滴定终点较难控制,蒽酮比色法对反应条件中温度,加温时问,蒽酮试剂的质量等级以及样液的纯度均要求较高.该保健饮料由不同组分的中草药精制提取制成,很难分离到纯度较高的样液,所含多糖成分复杂.笔者通过不同供试品制备方法比较,选择分光光度法对该保健饮料进行粗多糖含量测定.胡居吾等用葡萄糖和葡聚糖两种标准品作对照品测食品中的粗多糖含量时,前者测得结果稍偏高约4.8%,但葡聚糖标准品价格昂贵,在国内难于买到,故可以用葡萄糖来代替葡聚糖作标准品.本文供试品制备方法与其不同之处在于醇沉粗多糖后,不再采用碱性二价铜试剂选择性分离出具葡聚糖结构的多糖.因此,直接选用葡萄糖作标准品.苯酚一硫酸法是将样品中水提醇沉沉淀下来的粗多糖在硫酸的作用下,水解成单糖并迅速脱水生成糖醛衍生物,与苯酚缩合成有色化合物.以葡萄糖(或葡聚糖)作为标准品,比色测定粗多糖含量.根据其水解原理及文献报道J,换算系数校正因子取0.9.本文根据供试品溶液在46050Onto的紫外扫描结果,最终选择485nm为其适宜检测波长,以葡萄糖作标准品,方法简便易操作,准确性和重现性好,干扰因素较少,可控制该保健饮料中粗多糖功效成分含量.噬参考文献1王光亚.保健食品功效成分检测方法M.北京:中国轻工业出版社,2002:19-23.2何佳奇,姚振生,熊耀康,等.苯酚一硫酸法测定麦冬须根中多糖的含量J.中国中医药信息杂志,2006,13(10):51.52.3胡居吾,范青生,肖小年.粗多糖测定方法的研究J.江西食品工业,2005,(1):1618.4李松林,任延军,崔熙.猪苓多糖测定计算方法的探讨J.中成药,1994,16(2):57.(收稿日期2008-04.30)DeterminationofPolysaccharidesinaKindofHealthDrinkbytheMethodofPhenylhydrateSulfuricAcidXiaoSuping,WuJianwei,CaoRennan,ZhouLin,ChenBofResearchandDevelopmentofChinaNationalGroupCorp.ofTraditional&HerbalMedicine,Bering102600,China)AbstractObjective:Todetectthecontentofpolysaccharidesinthehealthdrink.Methods:Phenylhydratesulfuricacidmethodwasused.Results:Themaximumabsorptionwavelengthwas485nm.Linearrangewas00.1mg(Y:4.6282X一0.0066,r=0.9995).Thepolysaccharidecontentwas44.85rag?(100mL).Theaveragerecoverywas97.57%andRSDwas2.97%.Conclusion:ImprovedPhe