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文档简介

近代生物学研究技术 实验操作 实验一 用三亲本杂交进行细菌质粒的接合转移 实验一 用三亲本杂交进行细菌质粒的接合转移 第一天内容 受体 供体 辅助菌混合培养 1 供体菌 E coliDH5 pTR102 luxAB TcR luxAB 2 受体菌 Sinorhizobiumfredii TcS luxAB 3 辅助菌 E coliMM294 pPK2073 SpeR 教师准备 将受体 供体 辅助菌分别培养到对数期 pTR102 luxAB LB Tc20 g ml 37OC震荡1夜 S fredii TY 28OC震荡培养2天 pPK2073 LB Spe50 g ml37OC震荡1夜 学生操作 第一天 1 吸取供体菌 辅助菌各0 4ml 吸受体菌0 6ml 都加入同一个1 5ml离心管内 1管 人 8000转 min离心1分钟 2 倒上清 向沉淀加1mlTY液体 tip上下抽吸 洗菌体 8000转 min离心1分钟 倒上清 留沉淀 3 用镊子取灭菌滤纸片贴于已准备好的TY平板上 1片 人 3片 平板 平皿背面标记姓名 4 用200 l的tip抽吸离心管内沉淀的菌体 打散成浓菌液 将之加到滤纸片中央 切勿倾斜平板 以免菌液流出滤纸片以外 5 平板静置5 10分钟 待滤纸上的培养基液体被平板吸收后 倒置放培养箱 28OC培养1 2天 第二天内容 洗含菌滤纸 涂选择平板 1 灭菌小PA瓶中加5ml无菌水 1瓶 人 镊子揭下TY平板上的滤纸片 放瓶中 在震荡混匀器上充分打散菌体 2 向1 5ml管加0 9ml无菌水 加0 1ml已打散的菌液 稀释10倍 混匀 3 吸已稀释的菌液分别涂布于SM Tc平板 每人1板 和不加Tc的纯SM 每组1板 上 200 l 板 4 放28OC培养6 7天 下周看结果 在暗室内向培养皿中加10 L癸醛 3 5分钟后即可看到
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