1蛋白质的沉淀反应.ppt

动物生物化学实验教学 地点 逸夫楼2003 实验基本教育和基本操作训练蛋白质的沉淀反应和两性反应蛋白质透析脱盐 实验一 动物医学院动物生物化学教研室 了解生化实验的基本目的和要求熟悉生化实验的常用仪器了解蛋白质的沉淀 盐析 两性反应及透析脱盐的原理掌握蛋白质盐析和透析等操作技术 目的 实验基本教育和基本操作训练 动物生化实验的重要性生化分析技术与本专业之间的关系本学期实验安排与要求考核总分100 40 为实验理论 闭卷 30 为实验技能操作40 平时 包括实验报告和平时 实验安排 共有9个实验 动医 动药专业27学时 包括1 8个实验 动科 水产专业18学时 包括1 6个实验 实验一实验基本教育和基本操作训练蛋白质的沉淀反应和两性反应 蛋白质透析脱盐 3学时 实验二蛋白质的定量测定 双缩脲法测定蛋白质浓度 3学时 实验三唾液淀粉酶的活性观察 3学时 实验四电泳技术概论血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳 3学时 实验五聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白 3学时 实验六层析技术概论分子筛凝胶过滤分离血红蛋白和核黄素 3学时 实验七无蛋白血滤液的制备血糖的测定 3学时 实验八动物肝脏中DNA的提取和鉴定 3学时 实验九脂质的提取与薄层层析 3学时 注 为综合性实验 为设计性实验 实验报告 实验目的实验原理 简明 扼要 试剂与器材 简单 主要试剂与器材 实验步骤 详细 结果讨论 实事求是 准确 实验1蛋白质的沉淀反应 蛋白质的水溶液是稳定性的胶体溶液稳定的原因有两个1水膜2电荷蛋白质沉淀物理化学因素影响下 蛋白质稳定性遭到破坏 以固体的形式从溶液中析出的作用 包括可逆沉淀和不可逆沉淀 可逆沉淀 盐析和盐溶 盐溶 saltingin 纯水或低盐溶液中溶解度较低的蛋白质 通过增加无机盐使溶解度增加盐析 saltingout 高浓度的中性盐类可以脱去蛋白质分子表面的水膜 并中和蛋白质分子的电荷 从而使蛋白质从溶液中沉淀下来的过程常用的中性盐 硫酸铵 氯化钠 硫酸钠等 不可逆沉淀 有机溶剂沉淀 如乙醇 丙酮 生物碱试剂沉淀 如苦味酸 三氯醋酸 TCA 钨酸等 在pH值小于蛋白质pI时 其酸根负离子能与蛋白质分子上的正离子相结合重金属盐沉淀 金属正离子与蛋白质分子中负电荷结合加热或改变pH等 本实验选用卵蛋白 结合蛋白 卵清蛋白球蛋白角蛋白粘蛋白等从卵蛋白中分离出清蛋白和球蛋白 实验2蛋白质的透析脱盐 透析法 dialysis 蛋白质是生物大分子 分子的直径在1 100nm之间 不能通过半透膜 有微孔的膜 而无机盐等小分子化合物能自由通过半透膜 利用这一特性 将蛋白质与小分子化合物分离开来 这就是透析本实验利用透析的方法把实验一盐析中所用硫酸铵去掉 达到分离纯化的目的 实验所用半透膜 玻璃纸 实验3蛋白质的两性实验 酪蛋白pI的测定 蛋白质与氨基酸类似 是两性电解质蛋白质分子在等电点时不带电荷 溶解度最低 容易聚集沉淀本实验利用溴甲酚绿做指示剂 根据颜色的变化和等电沉淀的原理 确定待测蛋白酪蛋白的pI 实验步骤 见讲义 实验结果 从卵蛋白中分离并纯化出清蛋白和球蛋白 确定可逆和不可逆沉淀剂 纯化