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球 菌 1.如何从脓汁标本中分离出A群乙型链球菌？写出检验程序、所用培养基、生化反应及结果。答 脓汁其他鉴定试验胆盐溶菌试验Opto-chin敏感试验 杆菌肽敏感试验血清学分类鉴定报告2.如何确定从标本中分离的细菌为葡萄球菌？并确定其有无致病性。答：直接镜检，经革兰染色后镜检发现革兰染色阳性呈葡萄状排列的球菌，可初步报告疑为葡萄球菌，需进一步分离培养鉴定。分离培养：血培养需经增菌后转种血平板进一步鉴定，若无细菌生长，需连续观察7天，并以血平板确定有无细菌的生长。脓液、尿道分泌物、脑脊液沉淀物可直接接种血平板，37过夜，可形成直径约2-3mm、产生不同色素的菌落。金葡菌菌落周围有透明溶血环。试验鉴定：血浆凝固酶试验，甘露醇发酵试验，耐热核酸酶试验，肠毒素测定，SPA检测。致病性葡萄球菌菌落周围有透明溶血环，血浆凝固酶试验阳性，甘露醇发酵试验阳性，耐热核酸酶试验阳性，SPA检测有A蛋白的存在。3.如何从尿道分泌物中分离出淋病奈瑟菌？写出检验程序、试验及结果。 分泌物涂片染色 G-双球菌初报 分离培养（巧克力平板） 5%CO2 35 48h 可疑菌落（无色透明菌落） 涂片染色 纯培养 G-双球菌 氧化酶、 触酶试验 均阳性 葡萄糖、蔗糖发酵试验 肠 杆 菌淋病奈瑟菌1什么是不耐热肠毒素（LT）？它的物理性质、基本结构、致病机理及与霍乱毒素（CT）的关系如何。答：LT是肠产毒型大肠杆菌产生的致病物质，因对热不稳定，故称为不耐热肠毒素。其6530min可被破坏。LT分为LT-和LT-，LT-与人类疾病无关，LT-是引起人来胃肠炎的致病物质。其结构包括1个A亚单位和5个B亚单位，其中A亚单位是毒素的活性部分。B亚单位与肠粘膜上皮细胞表面的GM1神经节苷脂结合后，使A亚单位穿越细胞膜与腺苷环化酶作用，令胞内ATP转变为cAMP。胞质内cAMP水平增高后，导致肠粘膜细胞内的水、氯和碳酸氢钾等过度分泌到肠腔，同时钠的吸收减少，导致可持续几天的腹泻。LT-与霍乱肠毒素两者间的氨基酸的同源性达75%，他们的抗原高度交叉。2什么是O157：H7大肠杆菌？其致病物质和所致疾病是什么？答：O157：H7为肠出血性大肠杆菌的一个血清型，为出血性结肠炎和溶血性尿毒综合征的病原体。其致病物质是其表达的志贺毒素。3如何根据O抗体和H抗体的变化特点判断肥达试验的结果？答：若O、H凝集效价均超过正常值，则肠热症的可能性大，若两者均低，肠热症的可能性小，若O不高H高，可能预防接种或非特异性回忆反应，若O高H不高，则可能感染早期或与伤寒沙门菌O抗原有交叉反应的其他沙门菌感染。4对肠热症患者进行微生物学检查时标本采集应注意什么？答:根据不同的疾病、不同的病程取不同的标本。肠热症第1、2周取外周血，第2、3周取粪便、尿液，全程可取骨髓分离培养细菌。5.简述对疑似痢疾患者进行病原学诊断的常规及快速方法。 答：常规鉴定：初步鉴定最后鉴别鉴别试验血清学鉴定非典型菌株可用传代法及毒力试验进行鉴定。 快速诊断：直接凝集免疫荧光菌球法协同凝集试验乳胶凝集试验分子生物学方法非发酵革兰阴性杆菌1. 假单胞菌属的代表菌种是何菌？其生物学性状有何特点？答：铜绿假单胞菌是假单胞菌属的代表菌种。其生物学特性主要有4不生长，而42生长。在血琼脂、麦康凯培养基上均可形成5种不同形态的菌落，在普通培养基上可产生多种色素。2.非发酵菌鉴定原则及初步分群试验答：分群依据：氧化酶试验葡萄糖氧化发酵动力麦康凯培养基上生长情况。3.假单胞菌的概念及其共同特点答：假单胞菌属为需氧、有鞭毛、无芽胞、无荚膜的革兰阴性菌，氧化酶试验阳性，多为腐生菌，少数为植物和动物寄生菌，大多为条件致病菌。其共同特点是：革兰阴性、直或微弯、较细长、散在排列、无芽胞、有荚膜，多数有鞭毛，专性需氧，生长温度范围广，最适生长温度35，少数能在4或42生长。生长中可产生各种水溶性色素。4.简述铜绿假单胞菌的检验方法答：标本的采集：按疾病和检查目的，采取不同的标本。标本直接检查：直接显微镜检查；抗原检测；核酸检测。分离培养和鉴定。棒状杆菌属1简述白喉棒状杆菌的致病过程。答：白喉棒状杆菌存在于白喉患者的喉头气管及鼻腔粘膜，有时皮肤、结膜等部位也可见到。传染源为患者及带菌者，细菌多随飞沫或污染的物品传播，感染后白喉棒状杆菌在鼻咽部粘膜处繁殖并产生外毒素，引起局部炎症和全身中毒症状。白喉杆菌在侵犯局部增殖，产生外毒素致病。2简述白喉杆菌体外毒力试验的原理、方法及结果判断。答：琼脂平板毒力试验。将含有20%牛血清肉汤琼脂分注与平皿中，每只平皿10ml，50冷却，在凝固之前，将浸有白喉抗毒素血清稀释液的滤纸条沉于琼脂内，制成平板(Elek平板)。在与滤纸条相垂直的方向将待检菌画直线接种，划线宽度约6-7mm，两端与皿壁连接。同时，与之相距10mm处平行划线接种一标准产毒菌株，作为阳性对照。37培养24-48小时，若菌苔两侧出现斜向外延伸的乳白色沉淀线，并与其邻近的标准产毒株的沉淀线相吻合，则为产毒株。SPA协同凝集试验：将白喉抗毒素IgG先吸附在SPA上，再加入待检菌培养物上清液。若有白喉外毒素，则与SPA-IgG结合出现可见的凝集反应。对流电泳：将已知的白喉抗毒素和待检菌培养液分置琼脂板两孔之中，电泳30min后，若两孔之间出现白色沉淀线，表明待检菌为产毒株。革兰阳性需氧杆菌1.临床上对疑似的炭疽患者怎样鉴定病原。答：若从标本中检出革兰阳性大杆菌，两端平截、呈竹节状排列，并有明显荚膜，在人工培养基上生长可产生芽孢，呈卵圆形，小于菌体，位于菌体中央；在普通琼脂平板上形成灰白色、扁平、干燥、无光泽的菌落；动力阴性，牛乳凝固试验、噬菌体裂解试验、串珠试验和青霉素抑菌试验均为阳性，则可报告：“检出炭疽芽胞杆菌”。有条件者可应用DNA探针，其敏感性高，特异性强。其他鉴定试验作为参考指标，可根据具体情况酌情选做。同时应注意与其它芽胞杆菌相鉴别。放线菌属与诺卡菌属分支杆菌1. 简述结核菌素试验的原理、方法及结果分析和实际应用。答：（1）原理：结核菌素试验属于迟发型超敏反应，用结核菌素试剂作皮肤试验，感染过结核分枝杆菌或接种过卡介苗者，一般都出现阳性反应。（2）方法：取5UPPD或OT0.1ml注射于前臂掌侧皮下，经4872h检查反应情况。应特别注意局部有无硬结，不能单独以红晕为标准。（3）结果分析：阳性 注射部位硬结、红肿直径0515cm之间。这表明机体曾感染过结核，出现超敏反应，但不表示正患结核病；强阳性 硬结直径超过15cm以上，表明可能有活动性结核，应进一步检查；阴性 注射部位有针眼大的红点或稍有红肿，硬结直径小于05cm，说明无结核感染，但应考虑下述情况：如受试者处于原发感染的早期，或正患有其他传染病(如荨麻疹等)、霍奇金病、结节病、艾滋病。（4）应用：选择BCG接种对象及测定接种效果，结核菌素反应阴性者应接种BCG；结核菌素试验对婴幼儿可做诊断结核病之用；可在未接种BCG的人群中作结核分枝杆菌感染的流行病学调查；可借用其测定肿瘤病人的细胞免疫功能。2. 结核分枝杆菌细胞壁中脂质含量高，这一特点有何意义？答：结核分枝杆菌胞壁含脂质多，与其染色性、抵抗力、生长速度及致病性等特性有密切关系，脂质中的分枝菌酸使其具有抗酸性；细胞壁含大量脂质，可防止菌体内水分的丢失，故对干燥的抵抗力特别强；同时影响营养物质的吸收，故生长缓慢，且脂质中的磷脂、索状因子、蜡质D、硫酸脑苷脂等毒性成分以不同机制致病。3简述从标本中检验结核分枝杆菌的方法。答：1显微镜检查 (1)直接涂片染色镜检：是一种临床常用的简易快速的检查方法。直接涂片法是用接种环取病人痰液中浓厚部分或离心沉淀(3000rmin，20min)的尿沉淀物23接种环涂片，涂片要厚。经自然于燥和火焰固定后进行齐-尼抗酸染色，或作金胺“o”荧光染色。前法用油镜检查，后法用荧光显微镜高倍镜检查。镜检时应仔细查遍整个涂片或观察至少100个视野。结核分枝杆菌抗酸染色后呈红色，其它细菌和细胞为蓝色。经荧光染色的结核分枝杆菌，在黑色背景中呈亮黄色。涂片镜检结果应报告“找到抗酸性杆菌或“未找到抗酸性杆菌”，而不能报告“找到结核分枝杆菌”。 (2)浓缩集菌涂片检查法：如果直接涂片镜检不易检出结核杆菌，应采用浓缩集菌涂片检查法，以提高结核杆菌的检出率。所谓浓缩集菌涂片即为将采集标本离心，取沉淀涂片，或是采用漂浮集菌法，集菌后标本经反复多次使涂层加厚，一般取34个接种环，涂抹面积大约直径在15mm即可，干燥固定后染色镜检。2核酸检测 用PCR法快速诊断结核分枝杆菌感染。设计结核分枝杆菌特异rRNA片段的引物进行扩增，然后用结核分枝杆菌rRNA序列特异的DNA探针与之杂交。PCR技术的特异性与敏感性均大于95。3抗PPDIgG的检测 用ELlSA法检测患者血清中抗PPDIgG，可作为活动性结核分枝杆菌感染的快速诊断方法之一。肺结核病人的血清阳性率为8090。4简述抗酸染色的步骤及结果，并举出两种抗酸菌。答：初染：石炭酸复红加温染5min脱色：3%的盐酸酒精脱色1min复染：美兰染1min 结果：抗酸菌为红色，非抗酸菌为蓝色。 结核分枝杆菌与麻风分枝杆菌均为抗酸菌5一患者怀疑患有肺结核，如何进行微生物学检查？（包括标本采集至报告结果的全过程，检查方法应有传统方法和快速检查方法。）答：1）标本采集：根据感染部位不同，采集不同的标本。 2）标本直接检查：显微镜检查核酸检测抗PPDIgG的检测。 3）分离培养与鉴定 4）药物敏感性试验 5）免疫学诊断 6）动物接种厌氧性细菌1.临床常见的致病性厌氧芽胞梭菌有哪些？其致病条件是什么？ 答：临床常见的致病性厌氧菌主要有破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌与艰难梭菌。其致病条件是大面积创伤、局部供血不足。7 2.简述破伤风梭菌的形态及培养特性。 答：形态：菌体细长，由周鞭毛，能运动。无荚膜。芽胞正圆形，比菌体大，位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状。 培养特性：专性厌氧菌普通培养基不易生长。在血平板上37培养48小时始见薄膜状爬行生长，伴溶血。8 3.简要列出破伤风的防治措施。 答：采用注射破伤风类毒素的 主动免疫法，作为特异性预防。迅速对伤口进行清创扩创，防止形成厌氧微环境，是十分重要的防治措施。特异性治疗使用抗毒素。8 4.简要比较无芽胞厌氧菌与厌氧芽胞梭菌的感染特点。 答：5.产气荚膜梭菌的形态结构及培养特性。答：革兰阳性粗大杆菌，芽胞位于次极端，呈椭圆形，无鞭毛。在菌体内可形成明显的荚膜。厌氧，但不如破伤风梭菌厌氧严格。最适生长温度45时，繁殖周期仅为8min，在血平板上，多数菌株有双层溶血环。在蛋黄琼脂平板上，菌落周围出现乳白色浑浊圈。在牛奶培养基内能分解乳糖产酸产生“汹涌发酵”现象。8 6.肉毒梭菌的致病机理及防治原则答：其致病物质是肉毒毒素，肉毒毒素是已知