改良LORRY法测蛋白质含量

实验室规则 实验要求实验室安全 实验服 口罩 手套试剂和仪器的使用禁止大声喧哗 保持实验环境的安静实验室卫生实验分组 实验报告格式 实验名称 姓名 班级 学号 实验原理 实验目的 实验步骤 文字简洁 尽可能采用图表 实验结果 原始数据 计算过程 结论 实验讨论 结果分析 实验注意事项 实验日期 同组人员 总分100 50 为实验理论 闭卷 50 为实验技能操作及平时平时 包括实验报告和平时表现 实验课的考核 实验安排 12临床药理 医学检验 药学 13护理班 13生工 药贸 实验四 谷丙转氨酶活性测定和竞争性抑制 22 7 实验五 质粒DNA的提取与电泳 27 实验一 改良Lowry氏法测定蛋白质浓度 1 实验二 乙酸纤维素薄膜电泳和凝胶柱层析 14 13 实验三 血清甘油三酯含量测定 26 试验六 聚合酶链式反应 28 实验七 血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳 15 一 玻璃仪器的常规清洗 P2 3 实验基本操作 清洗剂刷洗自来水冲洗 至少5遍 蒸馏水冲洗 2 3次 干燥与放置 二 吸量管的使用 P3 4 选 吸 平 减 吹 三 试剂瓶 吸量管 试管的放置 试剂瓶用后放回原处 标签面向同一方向吸量管箭头朝下放置 以免倒流空置干净试管倒扣放在试管架上 四 分光光度计的原理 P11 光源 I0 I 单色器 样品池 狭缝 检测系统 T I I0 A lgT 1 A1 A2 c1 c22 标准曲线法 Lambert Beer定律 A KcL 1 打开电源 调节旋钮至需要的波长 预热20 30min2 1档 空白管 T模式调100 显示 Blank 100 3 拉杆拉至1 5档 T模式调0 显示 0 00 4 切换到A模式 拉至2 3 4档 读取各个样品的吸光度5 使用完毕后 置于休息档 1 5档 拉杆 1 4档 样品池 读数 波长 五 分光光度计的使用 1档 空白对照 A 0 T 100 1 5档 隔板 A T 0 2档 样品1 A 3档 样品3 A 4档 样品4 A 1 分清光面 毛面手只可接触毛面 光线须从光面通过2 用溶液润洗2 3次 装至2 3至4 5体积3 粗纸吸水 柔纸擦亮光面4 从低到高依次测量 不需清洗比色杯5 蒸馏水冲洗3 5次 擦干 倒扣放置 毛面 光面 六 比色皿的使用 改良Lowry氏法测定蛋白质含量 实验一 P28 实验目的 1 学习改良Lowry氏法测定蛋白质含量的原理及方法2 了解标准曲线在物质定量测定中的应用及绘制要点 实验原理 凯氏定氮法16 紫外吸收280nm呈色反应 OH Pr Cu2 螯合物 紫红色 酚试剂 钼蓝 钨蓝混合物 蓝色 深浅与蛋白含量呈正比 双缩脲反应 改良Lowry法 费时较长 而且要精确控制操作时间 显色程度与时间有关 专一性较差 干扰物质较多 灵敏度高双缩脲法的检出限为0 2 1 7mg ml 而本法的检出限为0 015 0 110mg ml 优点 缺点 实验步骤 1 标准曲线的绘制和实测样本浓度的求得 实验结果 0 x1x2x3x4 Y3 OD650 蛋白质量 mg 蛋白浓度 mg ml Y2 Y1 样品吸光度 样品浓度 2 浓度换算 样品体积 实测蛋白质量 待测蛋白浓度 g L 实测蛋白浓度 稀释倍数 待测蛋白浓度 g L 稀释倍数 注意终体积相同的前提下 可以用质量代表浓度例如 1号管中 蛋白质量为0 02mg 而其终浓度为0 004mg ml注意溶液的稀释倍数例如 若以浓度为横坐标 根据吸光度得到实测蛋白浓度为0 02mg ml 则待测蛋白浓度 0 02mg mlx5x1000 100mg ml若以质量为横坐标 根据吸光度得到实测蛋白质量为0 1mg 则待测蛋白浓度 0 1mg 1ml x1000 100mg m