色谱法 Chromatography 简介.ppt

02081116周熹 色谱法 Chromatography 简介 前言 色谱法亦称色层法 层析法等 是分离 纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一 色谱法首创于1903年 是俄国植物学家茨维特首次成功地用于植物色素的分离 将色素溶液流经装有吸附剂的柱子 结果在柱的不同高度显出各种色带 而使色素混合物得到分离 色层分析由此而得名 基本原理 色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某一物质中的吸附或溶解性能 即分配 的不同 或其他亲和作用性能的差异 使混合物的溶液称为流动相 固定的物质 可以是固体或液体 称为固定相 根据组分在固定相中的作用原理不同 可分为吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱 排阻色谱等 根据操作条件的不同 又可分为柱色谱 纸色谱 薄层色谱 气相色谱及高效液相色谱等 色谱法在有机化学中的应用主要包括以下几个方面 4 观察一些化学反应是否完成 3 利用比移植鉴定化合物 2 精制提纯化合物 1 分离混合物 尤其是用化学方法很难分离的一些结构 性质相似的化合物 柱色谱 柱色谱常用的有吸附色谱和分配色谱两类 前者常用氧化铝或硅胶等为吸附剂 后者以硅胶 硅藻土和纤维素为支持剂 以吸收较大量的液体作为固定相 下面以吸附色谱说明 气相色谱 气相色谱是五十年代初期发展起来的一个分离和分析的新实验技术 已广泛应用于石油工业 有机合成 医学 生物化学和环境检测中 特别适用于多组分混合物的分离 具有高分辨能力 选择性强及快速分析等优点 但是对于不易挥发或对热不稳定的化合物 以及腐蚀性物质的分离还有其局限性 其基本原理是以气体作为流动相 根据固定相是液体或固体 而分为气液色谱和气固色谱 气液色谱是分配色谱的一种形式 其固定相是吸附在载体表面上的高沸点液体 称为固定液 由于被分离各组分在固定也中的溶解度不同 而达到分离的目的 气固色谱的固定相是固体吸附剂 又称担体 如硅胶 氧化铝和分子筛等 主要利用不同组分在固定相表面吸附能力的差别而达到分离的目的 下面我们举例说明一下气相色谱的应用问题 气相色谱法测定新鲜茶叶中有机氯农药残留量 主要仪器和试剂 惠普589O型气相色谱仪 配53Ni电子捕获检测器 色谱工作站 玻璃柱 2000minX3mm 1 6 OV 17小64 OV一201 K一D浓缩器 超声波清洗仪 农药标准混合样 一BHC BHC 一BHC 一BHC PP 一DDE PP 一DDD OP 一DDT PP 一DDT含量均为100 g mL 国家标准物质研究中心提供 丙酮 无水硫酸钠 石油醚 浓硫酸均为分析纯 水为双蒸馏水 石油醚50mL浓缩为5mL经气相色谱仪检查无干扰峰 色谱条件 进样口温度 230 柱温 200 检测器温度 250 载气为高纯氮气 流速为40mL min 进样量为1 L 外标法定量 操作步骤 将新鲜茶叶打成浆状 准确称取样品10g放入200mL具塞三角瓶中 加人20mL丙酮和80mL石油醚 超声波提取15min 将提取液移入250mL分液漏斗中 加入2 硫酸钠溶液100mL 洗去丙酮 滴加10mL浓硫酸 轻轻振摇几次 弃去磺化层 再滴加10mL浓硫酸 净化一次 再加2 硫酸钠溶液100mL 振摇 静置 分层 弃取水层 醚层经过无水硫酸钠小柱滤入K D浓缩器中 减压浓缩至1mL 进行色谱测定 标准曲线的测绘 用标准储液分别配制出质量浓度为0 5 g mL 0 l g mL 0 05 g mL 0 01 g mL的标准溶液 进样后计算标准曲线 峰面积法 r一09995以上 结果与讨论方法的检测限 回收率和精密度本法所选用的仪器检测灵敏度很高 取样品10g 提取净化浓缩至lmL 进样l L 最低检测浓度大于1 8ng g 进行标准添加回收率实验 每个水平三次重复 结果表明回收率在782 一99 0 范围内 具体数据见表1 取上述样品六份 添加标准质量浓度为0 01 g g标准溶液 进行测定 计算出 BHC BHC BHC BHC PP DDE PP DDD OP DDT PP DDT的相对标准偏差RSD 分别为 6 4 7 5 8 0 4 8 7 3 4 6 8 8 实际样品测定用本法对地产不同地点的新鲜茶叶及成品茶叶进行三次平行测定 取其中间值 测定结果见表2 根据以上实验结果可以看出 本法检测限 回收率及精密度均符合农药残留量分析要求 对同一