KLK7蛋白及E-钙黏蛋白在卵巢癌中的表达及意义.doc

KLK7蛋白及E-钙黏蛋白在卵巢癌中的表达及意义作者：佟丽波,杨秀莲,张丹凤,卢北燕,吕敬媛单位：佳木斯大学第一附属医院，黑龙江 佳木斯【摘要】目的：探讨KLK7蛋白和E-钙黏蛋白(E-cad)在卵巢癌中的表达。方法：应用免疫组化法检测40例卵巢癌中KLK7蛋白和E-cad的表达,将二者的表达情况与临床指标的关系进行统计分析。结果：(1)KLK7蛋白和E-cad在上皮性卵巢癌中的表达与患者年龄、组织类型无关;随着临床分期增高、组织分化降低、患者手术时有淋巴结或大网膜转移和腹腔液中有癌细胞，KLK7蛋白的阳性表达率呈上升趋势(P<0.05)，而E-cad的阳性表达率呈下降趋势(P<0.05或P<0.01);(2)在卵巢癌中KLK7蛋白和E-cad表达呈负相关(P<0.05)。结论：KLK7蛋白在卵巢癌中呈高表达，E-cad则正好相反，二者与卵巢癌的侵袭转移有关，可为评估预后的有效指标;KLK7蛋白和E-cad在卵巢癌组中表达呈负相关，在卵巢癌侵袭转移中可能存在拮抗效应。【关键词】 KLK7蛋白;E-钙黏蛋白;卵巢癌;免疫组织化学Abstract：Objective：To investigate the expression of KLK7 and E-cadherin(E-cad) proteins in ovarian cancer.Methods：The mmunohistochemistry technique was usedto detect the expression of KLK7 and E-cad in 40 cases of epithelial ovarian cancer, and the statistical analysis was used for the relationship between the expression and the clinicopathological features of KLK7 and E-cad in ovarian cancer.WTHZResults:WT(1) KLK7 protein and E-cad in epithelial ovarian cancer showed norelation to patient’s age and the tissue type. With clinical stage increasing,the histological differentiation was decreased, and surgery showed that in patients with lymph node metastasis, omentum transfer or cancer cells in the peritoneal fluid, the KLK7 positive expression rate was increased(P<0.05),while theE-cad positive expression rate was decreased(P<0.05/P<0.01).(2) KLK7 protein was negatively correlated with E-cad in ovarian carcinoma.Conclusion：KLK7 was negatively correlated with E-cad expression in ovarian cancer invasion and metastasis, both showing an antagonistic effect.Key words:KLK7 protein; E-cadherin; ovarian cancer; immunohistochemistry卵巢癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在妇科恶性肿瘤中位居第三，死亡率却居首位，至今发病机制尚未阐明，缺乏有效的早期诊断和治疗方法。肿瘤细胞的扩散转移是肿瘤患者死亡的重要原因。明确肿瘤的侵袭转移机制并能早期干预卵巢癌侵袭途径，抑制其转移具有重要意义。本研究对卵巢癌中KLK7蛋白和E-cad的表达进行了检测，旨在探讨二者与卵巢癌临床病理特征的关系，分析它们在卵巢癌侵袭转移中的作用。1材料和方法1.1研究对象 收集2006—102010—03在佳木斯大学第一附属医院妇产科进行初次手术治疗的40例卵巢癌患者的石蜡标本,患者术前均未接受过放化疗治疗，年龄3282岁,平均57岁，其病程经统计学检验差异无统计学意义。所有研究标本均再次做HE染色，由两名病理医师再次证实。1.2主要试剂 兔抗人KLK7多克隆抗体及兔抗人E-cad多克隆抗体(北京博奥森公司):SP免疫组化试剂盒及DAB显色试剂盒(北京中杉金桥公司)。1.3实验方法常规切片,HE染色，采用中杉公司推荐的SP免疫组化染色法,检测细胞中KLK7蛋白及E-cad的表达。KLK7抗体用PBS 1:100稀释为工作液, E-cad抗体用PBS 1:200稀释为工作液，PBS代替一抗作阴性对照,用已知前列腺癌阳性切片作阳性对照。1.4结果判定 判定标准以细胞浆或细胞膜呈棕黄色细颗粒状着色为KLK7蛋白表达阳性，以细胞膜呈棕黄色细颗粒状着色为E-cad表达阳性。参照综合染色强度和阳性细胞数(占总细胞数的百分比)进行半定量处理。(1)染色强度按下列标准评分:细胞无显色者为0分,呈浅黄色者为1分,呈棕黄色者为2分,呈棕褐色者为3分;(2)阳性细胞数评分方法:阳性细胞占总细胞数10%50%者为2分,51%80%者为3分,>80%者为4分。上述两项评分(1)+(2)：小于3分为阴性; 3分为(+);45分为(+);67分为(+)。1.5统计学处理 用SAS9.0软件进行统计学分析,采用χ2检验及Fishers确切概率法检验,相关性分析采用Spearman等级相关分析，取P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1KLK7蛋白和E-cad在卵巢癌中的表达与临床病理的关系由表1可知，KLK7蛋白在卵巢癌中表达的阳性率在晚期卵巢癌高于早期，低分化组高于高中分化组，有淋巴结或大网膜转移组高于无淋巴结或大网膜转移组，腹腔液有癌细胞组高于腹腔液无癌细胞组，E-cad则正好相反，各组之间KLK7蛋白及E-cad表达差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);KLK7蛋白及E-cad表达与卵巢癌患者的年龄、组织类型无统计学意义(P>0.05)。HT5”H表1卵巢癌中KLK7和E-cad的表达与临床病理特征的关系2.2卵巢癌中KLK7和E-cad表达的相关性 由表2可知，在40例卵巢癌中，KLK7蛋白与E-cad表达共同阳性的为10例，共同阴性的为2例,二者单独阳性分别为21例和7例，经Spearman等级相关分析，表明KLK7蛋白与E-cad在卵巢癌中的表达呈负相关(r=-0.385，P<0.05)。表2 卵巢癌中 KLK7和E-cad表达的相关性3讨论KLK7又名人角化层糜蛋白酶(SCCE,hK7),由Egelrud于1993年首次在人足底皮肤的角化层中分离提纯。已证实KLK7蛋白是一种丝氨酸蛋白酶,丝氨酸蛋白酶作为蛋白降解酶家族的一个成员在许多生物过程中发挥重要的作用,如补体的激活,血液凝固,细胞外基质成分的降解等。最新研究发现角化层蛋白酶之间可能存在级联反应,已证实hK5可以激活hK7的前体成为有活性的蛋白酶,最适pH57,hK7可以直接降解角化细胞间的黏连蛋白,如角化粒蛋白和桥粒糖蛋白1，2，参与皮肤脱屑过程3，脱屑可能是通过蛋白酶间相互抑制达到平衡来调节。KLK7在肿瘤的生长,浸润和转移过程中发挥重要的作用。肿瘤细胞表面的KLK7可能导致肿瘤细胞的脱落,导致肿瘤的早期转移。Prezas等4研究发现,KLK7mRNA在卵巢癌中明显高表达,提出卵巢癌细胞表面的KLK7可能与肿瘤进展中早期瘤细胞脱落有关。本研究表明,KLK7蛋白在卵巢上皮性癌中的阳性表达率与临床晚期、组织低分化、淋巴结或腹腔转移成正相关，KLK7在卵巢癌中过表达,提示其可能是导致肿瘤细胞生长、扩散和转移的一个重要潜在因素,结合KLK7在皮肤中的作用是促进角质层细胞脱落。由此可进一步推测,卵巢癌中KLK7作用极可能与丝氨酸蛋白酶参与细胞间质的溶解和肿瘤进展中早期瘤细胞脱落有关,从而促进癌细胞浸润和转移。因此,对KLK7进行深入、广泛的研究，可了解肿瘤浸润和转移的具体机制,为卵巢癌的临床诊治及预后评估提供可靠的理论依据。E-cad全称为钙依赖性细胞黏附蛋白，属于钙黏着蛋白家族成员。E-cad是维持正常上皮细胞间黏附的重要分子,主要介导同种细胞的黏附反应,并起细胞骨架作用。在胚胎发育时期,E-cad调节着细胞间的识别、黏附和组织形成,而在成年组织中,它促进上皮细胞间相互黏附,维持着组织结构的完整性和极性。于月成等5研究显示E-cad在上皮性卵巢肿瘤组织中的表达随临床分期的增加而降低,肿瘤细胞分化越差其表达越低;有淋巴转移者,E-cad表达明显下降,这也证实了E-cad表达的高低与上皮性卵巢肿瘤的转移密切相关。E-cad表达率的下降可促进卵巢肿瘤的进展及转移。多项研究发现E-cad在低分化恶性肿瘤中与相应正常组织相比,其表达可完全丧失或下调。本研究显示，E-cad在卵巢癌中的阳性表达率与临床晚期、组织低分化、淋巴结或腹腔转移呈负相关，此研究结果基本与于月成等5研究结果相符。进而提示这可能与E-cad的低表达使细胞间黏附功能下降，利于肿瘤细胞分离，从局部脱落，获得侵袭力。同时，癌细胞间丧失接触性抑制，使癌细胞得以无限制增生，促进细胞增殖。E-cad蛋白在晚期卵巢癌中的表达减少,提示E-cad的表达下调在卵巢癌的进展中可能起重要作用。因此，E-cad的下降表达或表达缺失提示肿瘤具有更高的侵袭力和不良预后。Johnson等6研究发现,KLK7在胰腺癌组织中过量表达,在正常的组织中只是中等表达。这提示KLK7可能涉及胰腺癌的发展过程。在随后的体外细胞实验表明, hk7通过裂解细胞间连接蛋白中的E-钙黏蛋白而增强胰腺癌细胞Panc-1侵袭细胞外基质(ECM)的能力,同时减少细胞聚合的能力。从而说明异常表达的KLK7可通过降减细胞间连接蛋白中的E-钙黏蛋白发挥在胰腺癌的侵袭和转移中起重要的作用。本研究通过相关性分析表明，在卵巢癌中KLK7蛋白与E-cad表达呈负相关，提示二者之间可能存在某种调控关系，它们协同参与了卵巢癌的发展、浸润及转移过程，目前国内外尚未见到有关这方面的报道。所以，联合检测KLK7与E-cad有助于监测卵巢癌患者的病情及估计预后，有关在卵巢癌侵袭转移中是否存在KLK7降减E-cad这一相互作用机制还需应用分子生物学等相关技术进行深入研究。【参考文献】 1Caubet C,Jonca N,Brattsand M,et al.Degradation of corneodesmosome proteins bytwo serine proteases of the kallikrein family,SCTE/KLK5/hK5 and SCCE/KLK7/hK7J.J Invest Dermatol,2004,122(5):123512442Brattsand M,Stefansson K,Lundh C,et al.A proteolytic cascade of kallikreins in the stratumcorneumJ.J Invest Dermatol,2005,124(1):1982033Yamasaki K,Schauber J,Coda A,et al.Kallikrein-mediated proteolysis regulatesthe antimicrobial effects of cathelicidins in skinJ.Faseb J,2006,20(12):20684Prezas P,Arlt MJ,Viktorov P,et al.Overexpression of the human tissuekallikrein genes KLK4,5,6,and 7 increases the malignant phenotype of ovarian cancer cellsJ.Biol Chem,2006,387