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三种方法检测孕妇血清IgG抗A（B）效价的结果比较【摘要】目的：比较经典法、改良法和微柱凝胶法抗人球蛋白试验检测孕妇血清中IgG抗A（B）效价的差异。方法：用经典法、改良法和微柱凝胶法分别检测136例孕妇血清中IgG抗A（B）效价 ，计算其阳性率，再以经典法为标准计算改良法和微柱凝胶法的特异性和敏感性。结果： 经典法、改良法和微柱凝胶法检测孕妇血清中IgG抗A效价的阳性率分别为22.8%、25.0%和33.8%，IgG抗B效价的阳性率分别为19.1%、20.5%和31.6%。与经典法比较,改良法敏感性为98.1%，特异性为96.3%；微柱凝胶法敏感性为100%，特异性为63.4%。经统计学比较，,改良法和经典法的阳性率无统计学意义（P0.05），而微柱凝胶法阳性率明显高于经典法（P0.05）;The positive rate of antiA(B) IgG titers with MCG were significant higher than classic one(P0.05），而微柱凝胶法阳性率明显高于经典法（P0.05；微柱凝胶法与经典法比较P0.01。 在经典法检测阳性孕妇54例中,改良法检测53例呈阳性，1例呈阴性；微柱凝胶法检测54例均呈阳性。经典法检测阴性孕妇82例中，改良法检测79例呈阴性，3例呈阳性；微柱凝胶法检测52例呈阴性，30例呈阳性。以经典法为标准，改良法的敏感性为98.1%(53/54)，特异性为96.3%(79/82)，见表2；微柱凝胶法的敏感性为100%(54/54)，特异性为63.4%(52/82)，见表3。表2 改良法与经典法检测136例孕妇血清IgG抗A(B)效价的比较(略)表3 微柱凝胶法与经典法检测136例孕妇血清IgG抗A(B)效价的比较(略)3 讨论 ABO抗原在自然界存在较广，孕妇在妊娠前可能已接受了不同程度的A（B）类抗原的刺激产生血型抗体， O型的血型抗体含有较多的IgG，它可以通过胎盘进入胎儿血液，使红细胞致敏引起新生儿溶血和黄疸，临床上通常检测孕妇血清IgG抗A（B）效价预测HDN可能性6。据文献报道当IgG抗A（B）效价64时，很少发生HDN，随着IgG抗体效价升高，HDN发生率明显增加7。但目前检测孕妇血清IgG抗A（B）效价的方法较多，各种方法的敏感性不同，造成同一标本用不同检测方法结果差异较大，给临床诊治带来困难。 抗人球蛋白试验是由英国免疫学家Coombs于1945年发明,用于检测Rh血型的不完全抗体,又称Coombs试验。其原理是IgG类免疫球蛋白多以单体形式存在，它只能和一个抗原相结合，而不能把几个抗原联合起来，故在盐水介质中不表现凝集反应；另外，IgG分子较小，无法克服红细胞膜之间的相互排斥距离，故不能将二个邻近的红细胞架接起来，但若将抗人球蛋白血清加到吸附了半抗体的红细胞悬液中，抗人球蛋白便起到一种桥梁作用使致敏红细胞发生凝集，从而显示不完全抗体的存在。到目前为止，此试验仍是国际上公认的检测孕妇血清IgG抗A（B）效价的经典方法，根据其测定的结果，将IgG抗A（B）效价大于或等于64作为临床意义决定值预测HDN可能性已普遍得到学者的认可8，但此方法操作繁锁,耗时长，需要实验室自配试剂，不便于临床应用。 改良法是在经典法基础上，用二硫苏糖醇替代巯基乙醇裂解IgM分子，使裂解时间从2 h减至30 min；用低离子介质促进IgG抗体致敏红细胞使致敏时间从1 h减至30 min；用抗人IgG代替广谱的抗人球蛋白试剂提高抗原抗体反应的特异性。本文结果显示，与经典法比较，改良法敏感性为98.1%，特异性为96.3%，两者的结果具有良好的一致性，而且改良法明显缩短了操作时间，又有统一的商品试剂盒，便于临床普及。 微柱凝胶技术由法国科学家Lappierre于1986年发明,1994年获得美国FDA认证，目前在许多发达国家已作为常规技术应用于红细胞血型鉴定、交叉配血、抗体筛查和HDN的检查。其原理是利用红细胞在凝胶微柱中的移动来指示肉眼所不能见的红细胞与相应抗体发生的血清学反应。检测时首先将待检血清用巯基乙醇裂解IgM抗体，然后和A(B)型红细胞混合加在凝胶微柱上部反应,待检血清中IgG抗A（B）就会与相应红细胞结合，再与凝胶中抗人球蛋白结合形成凝集反应，经离心后观察：凝集的红细胞被阻挡在微柱中凝胶的上部或中央，判断凝集反应阳性；未被抗体结合的红细胞能通过凝胶的缝隙到达微柱的底部，判断凝集反应阴性。因其操作简单，实验中不用洗涤红细胞，减少了生物污染，保障了操作人员的安全，而且可以实现自动化操作和电脑化管理。本文结果显示，与经典法比较其敏感性为100%，而特异性仅为63.4%，假阳性率达36.6%。李建新等9用微柱凝胶法和传统试管法（经典法）平行检测53例O型孕妇IgG抗A（B）的平均抗体效价为160和45，前者比后者高3.56倍，两法差异非常显著（P0.001），提出微柱凝胶法灵敏度过高，需对其决定值进行界定。吴定昌等10用微柱凝胶法检测201例孕妇，IgG抗A（B）抗体效价≥64的阳性例数为164例，总阳性率为81.6%，认为微柱凝胶法比传统试管法检测IgG抗A（B）效价高，结果更敏感（P0.01），通过回归方程计算，微柱凝胶法临床意义决定值的效价为138。可见微柱凝胶法用于检测IgG抗A（B）抗体效价需重新设定临床意义决定值，以免给临床造成误诊。 综上所述，改良法和经典法检测孕妇血清中IgG抗A（B）效价的结果具有良好的一致性 ，而微柱凝胶法阳性率明显高于经典法，需重新设定临床意义决定值。【参考文献】 1金汉珍，黄德珉，官希吉. 实用新生儿学M.第2版.北京：人民卫生出版社，2000:216217.2张永顶，陈丽，李劲松,等. 孕妇血清IgG抗A（B）效价与新生儿黄疸的关系J.蚌埠医学院学报,2007,32(2):214215.3朱正洪,樊龙中,韦小芹.92例孕妇产前IgG抗体效价的微柱凝胶法检测J.实用全科医学,2007,5(6):547548.4叶应妩，王毓三，申子瑜. 全国临床检验操作规程M. 第3版. 南京：东南大学出版社，2006：257258.5高峰.输血与输血技术M.第1版.北京：人民卫生出版社，2004：98106.6林甲进. O型血孕妇高IgG抗A(B)效价与新生儿溶血病J.现代中西医结合杂志，2005,14(8):1016.7雷红霞，牛芳，屠晓华,等. 孕妇血型IgG抗体与新生儿溶血病关系研究J. 中国输血杂志，2004,17(5):344345.8黄道连，王冬娥,王胜岚,等.新生儿溶血病血型免疫抗体研究J.临床血液学杂志，2004,17(4):202203.9李建新，吴夏枫，陈梅莲，等.抗人球蛋白微柱凝胶法和试管法检测孕妇