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环境三致物的生物检测 环境三致物 指能致畸 致癌 致突变的物质 特点 时间短 成本低 结果可靠 项目九蚕豆根尖微核监测技术 一 蚕豆根尖微核技术的原理 让我们复习一下细胞有丝分裂的过程吧 有丝分裂各时期 植物细胞的有丝分裂 有丝分列各期图像 项目九蚕豆根尖微核监测技术 一 蚕豆根尖微核技术的原理 蚕豆根尖细胞在进行有丝分裂过程中 染色体经常发生断裂 但一般情况下 断裂可以自行愈合 如果受到有害因子的攻击 染色体就不能愈合 甚至增加断裂 形成染色体片段 这些染色体片段由于缺乏着丝点而不能到达细胞的两极 而留在细胞质中 一旦新细胞核形成 这些片段就形成大小不同的小核 即微核 因此 我们可以根据微核率的高低说明诱变物的强弱 项目九蚕豆根尖微核监测技术 二 受试生物材料 松滋青皮豆 或其他蚕豆品种 1 蚕豆浸种催芽 25 浸泡26 30h 浸种 催芽 用纱布松松包裹吸涨的种子置解剖盘内 保持湿度 在25 的温箱中催芽12 30h 待种子初生根露出2 3mm 再选取发芽良好的种子 放入铺满薄层湿脱脂棉的解剖盘内 仍在25 下催芽36 48h 当大部分种子的初生根长至2 3cm时 即可用于处理 三 试验步骤 项目九蚕豆根尖微核监测技术 2 处理根尖 每一处理选取6 8粒初生根生长良好 根长一致的种子 放入盛有被测液的培养皿中 让被测液浸泡住根尖即可 用自来水 或蒸馏水 作对照处理 方法相同 处理时间为4 6h 3 根尖细胞恢复培养 将处理后的种子 用自来水 或蒸馏水 浸洗3次 每次2 3min 然后把洗净的种子再放入湿脱脂棉盘中 按前述培养条件恢复培养22 24h 项目九蚕豆根尖微核监测技术 4 根尖细胞的固定 将恢复后的种子 从根尖顶端切下lcm长幼根放入青霉素空瓶中 加卡诺氏液固定24h 5 孚尔根 Feulgen 染色 1 固定好的幼根 在青霉素瓶中用蒸馏水浸洗2次 每次5min 2 吸净残水 再加5mol LHCI将幼根泡住 连瓶放入28 水浴锅中水解幼根25min左右 至幼根被软化即可 3 用蒸馏水浸洗幼根2次 每次5min 项目九蚕豆根尖微核监测技术 4 在暗室或遮光的条件下加席夫 Schiff 试剂 染色1 4h 5 除去染液 用SO2洗涤液浸洗幼根2次 每次5min 6 用蒸馏水浸洗1次 5min 7 将幼根放入新换的蒸馏水中 置4 的冰箱内保存 可供随时制片之用 6 制片 45 醋酸 压片法 项目九蚕豆根尖微核监测技术 7 镜检及微核识别标准 大小是主核大小的1 3以下 并与主核分离 形状为圆形 椭圆形或不规则形 着色与主核相当或稍浅 每一处理观察3个根尖 每个根尖随机计数1000个细胞中的微核数 项目九蚕豆根尖微核监测技术 五 实验数据的统计处理和污染程度的划分 一 数据处理 1 按以下公式计算各测试样品 包括对照组 的微核千分率 MCN 2 如果被监测的样品不多 可直接用各样品MCN率平均值与对照比较 t检验 从差异的显著性判断水质污染与否 项目九蚕豆根尖微核监测技术 3 如果被检测的样品较多 可先用方差分析 F检验 看各样品的MCN 平均值与对照的差异显著性 二 结果评价 1 利用 MCN 进行评价 30 重污染 项目九蚕豆根尖微核监测技