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实验四血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳 目的1 掌握电泳的基本原理2 掌握电泳的基本操作 原理 醋酸纤维薄膜电泳 CAME 是以醋酸纤维薄膜 CAM 作支持物的一种区带电泳技术 将血清样品点样于醋纤膜上 在pH8 6的缓冲液中电泳时 血清蛋白质均带负电荷移向正极 由于血清中各蛋白组分等电点不同而致表面净电荷量不等 加之分子大小和形状各异 因而电泳迁移率不同 彼此得以分离 电泳后 CAM经染色和漂洗 可清晰呈现清蛋白 1 2 球蛋白5条区带 器材 1 醋酸纤维薄膜 8X2mm 2 点样器3 染色皿 漂洗器 镊子4 电泳仪 直流电源整流器 水平电泳槽 试剂 1 巴比妥缓冲液 pH8 6I 0 06 取巴比妥钠12 76g 巴比妥1 66g 加蒸馏水加热溶解后稀释至1升 2 氨基黑10B染色液 取氨基黑10B0 5g 甲醇50ml 冰醋酸l0ml 加水至100ml 3 漂洗液 95 乙醇45ml 冰醋酸5ml 蒸馏水50ml 操作 准备 l 醋纤膜的准备 距离边缘1 5cm用铅笔作好标记 粗糙面用于点样 然后将薄膜放进缓冲液中 自然浸润 约20分钟 2 电泳槽的准备 水平放置 将缓冲液注入电泳槽中 两边的缓冲液高度要一致 架上滤纸桥 盖上电泳槽盖 3 点样 将充分浸透 指膜上没有白色斑痕 的薄膜取出 用滤纸吸去膜上过多的缓冲液 载玻片蘸取血清 约10 20p1 垂直印在CAM粗糙面的加样线上 待样品全部渗入薄膜内后 移开点样器 操作 电泳 4 加样后 将薄膜条架于支架两端 点样面朝下 点样侧置于负极端 薄膜应平直无弯曲 加上槽盖平衡5分钟后通电电泳 5 正确连接电泳槽与电泳仪对应的正负极 开启电源通电 电压10 15V cm膜总宽 电泳40 60分钟 泳动距离约达3 5 4 0cm时即可断电 6 染色 电泳完毕后断电 用镊子取出薄膜条投入染液5 10分钟 染色过程中不时轻轻晃动染色皿 使染色充分 7 漂洗 从染液中取出薄膜条并尽量沥去染液 投入漂洗皿中反复漂洗 直至背景漂净为止 此时清晰可见5条色带 待干 实验报告 将薄膜条粘贴于实验
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