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琼脂糖凝胶电泳 一实验目的 学习琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和方法检测水稻总DNA的纯度与分子量检测PCR的结果 二实验原理 电泳是分离和纯化DNA片段的最常用技术琼脂糖是一种天然聚合长链状分子 沸水中溶解 45 开始形成多孔性刚性滤孔 凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度DNA分子在碱性环境中带负电荷 在外加电场作用下向正极泳动 二实验原理 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时 有电荷效应与分子筛效应 不同的DNA 分子量大小及构型不同 电泳时的泳动率就不同 从而分出不同的区带琼脂糖凝胶电泳法分离DNA 是利用分子筛效应 迁移速度与分子量的对数值成反比关系可依据DNA分子的大小使其分离 DNA分子在电泳条件下的迁移演示 exe Goodview可与DNA分子形成复合物 发射的荧光强度较游离的Goodview强度大10倍以上 且荧光强度与DAN含量成正比示踪染料和分子量标准参照物 二实验原理 M1234 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳 三实验材料 用具及试剂 提取的水稻总DNA和PCR产物电泳仪 电泳槽 电子水平 移液器 枪头 三角瓶 点样板 微波炉等琼脂糖 TAE电泳缓冲液 Goodview 载样缓冲液 Loadingbuffer 四 实验步骤 1制胶 100ml 0 5 TAE 0 8g琼脂糖三角瓶 1 3 煮胶溶解 冷却至60 不烫手 加Goodview 倒板 4 6mm 室温下充分凝固 竖直拔下梳子 2点样 5 l水稻总DNA 1 2loadingbuffer 7 lPCR产物 3 lloadingbuffer 混匀 吸取10 l10 l MarkDNA DNA Hind 3电泳 电压3 5V cm 约80 90V 注意电极方向4观察 紫外透射分析仪下观察 时间不要太久 四 实验步骤 五注意事项 1倒胶时把握好胶的温度 不要高于60 否则温度太高会使制板变形2胶一定要凝固好才能拔梳子 方向一定要竖直向上 不要弄坏点样孔3点样时枪头下伸 点样孔内不能有气泡 缓冲液不要太多4Goodview有毒 切勿用
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