抑癌基因PTEN在子宫内膜癌组织中的表达.doc

抑癌基因PTEN在子宫内膜癌组织中的表达【关键词】 子宫内膜癌 Expression of tumor suppressor gene PTEN in endometrial carcinomaMA JiaJia, CHEN BiLiang, MA XiangDong, WANG DeTang, GUO HuiLingDepartment of Gynecology and Obstetrics, Xijing Hospital, Fourth Military Medical University, Xian 710033, China【Abstract】 AIM: To investigate the effects of tumor suppressor gene PTEN in the carcinogenesis and development of the endometrial carcinoma and to identify the correlations between the expression of PTEN and the clinicopathologic factors of endometrial carcinoma. METHODS: Seventyseven endometrial carcinoma samples were immunohitochemically analyzed, 72 of which were adenoendometrial carcinoma and 25 normal endometrium samples for PTEN expression. Results were compared with the clinicopathologic factors, such as type, stage, grade, myometrial invasion, lymph invasion and age. RESULTS: Loss of PTEN protein expression in endometrial carcinoma (60%) was much more frequent than those of normal endometrium tissues (0%, P=0.0000) and the expression level of PTEN varied between the two different histological types (64% vs 0%, P=0.0048) and the pathological grade. Loss of PTEN protein expression increased with the malignancy grade of endometrial carcinoma (P=0.0034) but was not associated with clinical stages, myometrial invasion, lymph invasion and ages. CONCLUSION: Tumor suppressor gene PTEN plays an important role in the carcimogenesis and development of the endometrial carcinoma. The loss of PTEN expression is closely related to the carcinogenesis and development of the endometrial carcinoma, especially the adenoendometrial tumorigenesis.【Keywords】 PTEN; tumor suppressor gene; endometrial carcinoma; gene expression; immunohistochemistry【摘要】 目的：了解抑癌基因PTEN在子宫内膜癌中的表达及与子宫内膜癌临床病理因素的相关性，探讨其与子宫内膜癌发生发展的关系. 方法：运用免疫组织化学SABC法测定PTEN蛋白在77（子宫内膜样腺癌72，子宫浆液性癌5）例子宫内膜癌组织和25例正常子宫内膜中的表达，并比较PTEN表达变化与组织学类型、手术临床分期、病理分级、子宫肌层浸润程度、淋巴结转移及患者年龄等临床病理因素之间的相关性. 结果：子宫内膜癌组织中PTEN表达缺失率为60%，与正常子宫内膜相比（0%）存在显著性差异（P=0.0000）. 子宫内膜样腺癌中PTEN的失表达率为64%，而子宫浆液性癌为0%，二者差异显著（P=0.0048）. PTEN的失表达率随内膜癌恶性程度的增加而增加（P=0.0034），但与手术临床分期、肌层浸润程度、淋巴结转移及患者年龄等因素无关（P0.05）. 结论：抑癌基因PTEN是在子宫内膜癌发生过程中占重要地位的突变基因，PTEN基因的失表达与子宫内膜癌，特别是子宫内膜样腺癌的发生发展密切相关.【关键词】 PTEN; 抑癌基因; 子宫内膜癌; 基因表达; 免疫组织化学0引言子宫内膜癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤，在其发生发展过程中抑癌基因的失活、突变与癌基因的异常激活可能发挥了重要作用. 第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因（PTEN）是1997年发现的唯一一种具有磷脂酶活性的抑癌基因，定位与染色体10q23.3，在子宫内膜癌、神经胶质瘤、前列腺癌、乳腺癌等多种人类原发性恶性肿瘤中存在突变. 研究1-3发现，40%左右的子宫内膜癌存在染色体10q23.3的突变，而在子宫内膜样腺癌中，这一比例接近50%83%，远高于PTEN基因在其他恶性肿瘤中的突变率. 我们运用免疫组织化学SABC法，对子宫内膜癌样本进行PTEN蛋白表达的检测，以探讨抑癌基因PTEN表达与子宫内膜癌发生发展的关系.1材料和方法1.1材料取200301/200312西京医院妇产科收治的子宫内膜癌标本77（子宫内膜样腺癌患者72，子宫浆液性癌患者5）例，患者平均年龄(673)（4275）岁. 所有患者均行全/次全子宫切除术、双侧附件切除术及盆腔淋巴结清扫术，术前未行任何治疗，术后辅以放/化疗. 所有标本均经病理明确诊断，并依据FIGO（1988）标准进行组织学分级. 其中，期55例,期6例，期9例，期7例；高分化（G1）44例，中分化（G2）23例，低分化（G3）10例. 另选取25例同期因子宫肌瘤行子宫切除术患者的正常子宫内膜作为对照，年龄(391)（3544）岁. PTEN鼠抗人mAb购自福州迈新公司，免疫组织化学SABC试剂盒、DAB显色剂均为武汉博士德公司产品.1.2方法常规石蜡包埋，4 m连续切片，每一标本留取4张切片，其中1张行HE染色以明确病理诊断及组织学分级，2张进行免疫组化染色，1张染色时以PBS缓冲液代替一抗作为空白对照，用已知阳性的乳腺癌标本作为阳性对照. 将组织石蜡切片脱蜡至水，微波抗原修复，血清封闭，滴加即用型鼠抗人PTEN mAb，37孵育2 h，兔抗鼠IgG二抗37孵育30 min，滴加SABC复合物37孵育30 min，DAB显色，苏木精复染，乙醇梯度脱水，二甲苯固封，中性树胶封片. 每一步骤间均以10 mL/L PBS（pH 7.4）缓冲液冲洗3次，每次5 min. 每批均设阳性及阴性对照. PTEN阳性物质为棕黄色，主要表达于细胞质. 参照Salveson等4的评分标准，即高倍镜下（400）综合染色强度和阳性细胞所占比例进行半定量测定. 染色强度评分标准为不着色0分，黄色1分，棕黄色2分，黄褐色3分. 阳性细胞所占比例评分标准为阳性细胞数小于10%记0分，10%40%记1分，41%70%记2分，大于70%记3分. 两种评分相加，01分为阴性（-），2分为弱阳性（+），34分为阳性（），56分为强阳性（）.统计学处理：运用SPSS 10.0软件进行2检验和Fishers精确检验. P0.05认为具有统计学意义.2结果2.1PTEN蛋白的表达子宫内膜癌组织中PTEN弱表达或表达阴性（Fig 1A，B）. 阴性率为60%（46/77）. 正常子宫内膜中PTEN高表达（Fig 1C），25例PTEN蛋白表达均为阳性. 两组间PTEN表达率存在显著差异性（P=0.0000，Tab 1）.表1子宫内膜癌组织及正常子宫内膜中PTEN蛋白的表达（略）2.2PTEN表达与组织类型及病理分级的关系PTEN蛋白表达在两组肿瘤间的差异具有统计学意义（P=0.0048, Tab 2）. 各级间PTEN表达差异显著（P=0.0034）.表2PTEN的表达与子宫内膜癌组织类型及病理分级的关系（略）2.3PTEN表达与临床分期、肌层浸润、淋巴结转移及患者年龄间的关系PTEN蛋白表达的缺失率因手术临床分期、肌层浸润深度、淋巴结转移、患者年龄的不同而略有差异，但无统计学意义（P0.05, Tab 3）.表3PTEN蛋白表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系（略）3讨论PTEN基因是第1个具有磷酸酶活性的抑癌基表2PTEN的表达与子宫内膜癌组织类型及病理分级的关系因5，也是继p53之后发现的在人类肿瘤中第2个突变率最高的基因6. PTEN主要通过其双重底物特异性磷酸酶活性，经由PI3K信号系统和MAPK信号级联途径发挥肿瘤抑制作用，对细胞生长、凋亡、增殖及黏附产生影响. 许多原发性肿瘤和肿瘤细胞系中均有PTEN的基因改变7，在妇科肿瘤，特别是子宫内膜癌中，PTEN表达的改变具有特殊意义.我们观察的子宫内膜癌样本中，PTEN蛋白表达缺失率与正常子宫内膜相比存在显著差异（P=0.0000）. 表明PTEN蛋白表达的缺失与子宫内膜癌的发生有关. 以往的研究8，9发现，PTEN蛋白在子宫内膜癌组织中的突变率约为20%66%，与我们的结果相似. 子宫内膜癌根据组织病理学类型的不同，可以分为I型内膜样癌和型非内膜样癌两类. 分子生物学研究发现，两型子宫内膜癌均与多种基因的缺失及突变有关，特别是I型子宫内膜癌，被认为与PTEN，kras，连环素基因及微卫星不稳定性等4类分子水平的改变密切相关10. 我们发现，46例PTEN蛋白表达缺失的样本均为子宫内膜样腺癌，5例子宫浆液性癌样本的PTEN蛋白表达均为阳性. 两类肿瘤中PTEN的表达率具有极显著性差异（P=0.0048），从而提示，PTEN在两种内膜癌病理类型中的作用不同，子宫内膜样腺癌与非子宫内膜样癌可能具有不同的发生机制. 这一结果不仅有力的支持了子宫内膜癌在组织发生学上的二元理论，同时也为子宫内膜样癌的诊断和基因治疗提供了新的思路.近年来，研究者们已经开始关注PTEN基因改变与子宫内膜癌临床病理特征及预后之间的联系，我国学者发现，PTEN的突变率与子宫内膜癌病理分级，组织学分型及子宫肌层的浸润程度密切相关11. Kanamori等12虽认为PTEN的表达与各种临床病理因素无关，却证实PTEN表达阳性的子宫内膜癌患者的生存率远高于PTEN表达阳性的患者. 我们在对PTEN表达与子宫内膜癌临床病理特征的分析中发现，PTEN在不同病理分级的子宫内膜癌中的表达率存在显著性差异，说明PTEN的表达水平与内膜癌的恶性程度有关. PTEN在子宫内膜癌I期的表达缺失率为62%，高于其他期别的子宫内膜癌，虽然这种差别不具有统计学意义（P=0.5438），但从一个侧面说明，PTEN的表达缺失是子宫内膜癌发生的相对早期的分子事件. 另外，PTEN蛋白表达水平的高低与患者年龄，病理分级，子宫肌层浸润深度及是否合并淋巴结转移等临床病理因素无关（P0.05）. PTEN的表达变化能否作为判断患者预后的指标，还有待于进一步加强对患者的随访后再行比较证实.【参考文献】1 Mutter GL, Lin MC, Fitzgerald JT, et al. Altered PTEN expression as a diagnostic marker for the earliest endometrial precancers J. Natl Cancer Inst, 2000; 92(7): 924-931.2 Yaginuma Y, Yamashita T, Ishiya T, et al. Abnormal structure and expression of PTEN/MMAC1 gene in human uterine cancers J. Mol Carcinog, 2000;27(2): 110-116.3 Sun H, Enomoto T, Fujita M, et al. Mutation analysis of the PTEN gene in endometial carcinoma and hyperplasia J. Am J Clin Pathol, 2001;115(1): 32-38.4 Salvesen HB, Stefansson I, Kalvenes MB, et al. Loss of PTEN expression is associated with metastatic disease in patient with endometrial carcinoma J. Cancer, 2002;94(6):2185-2191.5 Li J, Yen C, Liaw D, et al. PTEN, a putative protein tyrosine phosphatase gene mutated in human brain, breast and prostate cancer J. Science, 1997; 275(5308): 1943-1947.6 Ali IU, Schriml LM, Dean M, et al. Mutational spectra of PTEN/MMAC1 gene: A tumor suppressor gene with lipid phosphatase activity J. J Natl Cancer Inst, 1999; 91(22): 1922-1932.7 Ali IU. Gatekeeper for endometrium: The PTEN tumor suppressor gene J. J Natl Cancer Inst, 2000; 92(11):861-863.8 An HJ, Lee YH, Cho NH, et al. Alteration of PTEN expression in endometrial carcinoma is associated with downregulation of cyclindependent kinase inhibitor, p27 J. Histopathology, 2002; 41(5): 437-445.9 Peiro G, Lohse P, Mayr D, et al. Insulinlike growth factorreceptor and PTEN protein expression in endometrial carcinoma. Correlation with bax and bcl2 expression, microsatellite instability status, and outcome J. Am J Clin Pathol, 2003;120(1): 78-85.10 MatiasGuiu X, Cataus L,