肿瘤细胞增殖动力学.ppt

肿瘤细胞增殖动力学 WhatKindofDiseaseIsCancer SomeCases 病例1 男性76岁 2003年9月3日因干咳 少痰 消瘦就诊 CT检查确诊肺癌 病例3 女性43岁 因上腹部时有疼痛伴返酸2年 加重1个月入院 胃镜活检报告 胃幽门部黏膜内低分化癌 病例8 患者男性 34岁 因发现右锁骨肿块3月入院 检查右锁骨外段稍隆起 局部膨大 表面皮肤无红肿或静脉怒张 无疼痛 肩关节活动稍受限 X光示右锁骨外段明显骨质破坏及增生 病理报告为右锁骨恶性淋巴细胞瘤 病例11 女性68岁 阴道不规则流血4 5个月 妇科检查 子宫前位 如妊娠2月大小 可触及数个结节 质地中等 超声检查提示子宫混合性占位性病变 CT诊断 宫体癌 右侧卵巢囊肿 病理诊断 子宫恶性混合性苗勒氏瘤 累及输尿管 肿瘤学 CELL Celljunction Proliferation Extracellularmatrix Telomere Signaltransduction Differentiation Apoptosis 2 WhatWeHaveKnownabouttheCellCycleControl OncogeneAntioncogeneCheckpointsCellDivisionCycleGene cdcgenes CyclinsCyclinDependentKinases CDKsCyclinDependentKinasesInhibitors CDKIsSphasePromotingFactor SPFMaturationPromotingFactor MPF 蛋白质水平 基因水平 3 HowtoControlinaNormalCell ControlofG1phaseControlofSphaseControlofG2phaseControlofMphase ControlofG1phase ProliferationfactorsCheckpoint G0 G1entrance RPointG1 S Cyclin CDK cyclinD CDK4 6 cyclinE CDK2 P105RBCDKI ControlofSphase Checkpoint DNAsynthesison off Cyclin CDKPCNA Cyclin CDK SPF cyclinA CDK1 CyclinE CDK2作为启动蛋白 识别autonomouslyreplicatingsequence ARS 激活复制起点可能是originrecognitioncomplex ORC的组成部分 PCNA 细胞增殖核抗原DNA聚合酶 的亚基直接参与DNA复制和修复 ControlofMphase CheckpointMPF cyclinB CDK1 Checkpoint G2 M DNA复制没有完成 激活wee1 mik1蛋白激酶 细胞阻滞于G2期 M中 晚期 检查微管蛋白的量 微管组织中心功能 纺锤体极性 微管与动粒附着 或附着在动粒上产生的张力 MPF的活性调节 4 What sWronginaTumorCell oncogene的过表达antioncogene的失活cyclin基因和表达蛋白的异常cdki基因和表达蛋白的异常 5 HowtoEvaluateCellProliferation CellProliferationKinetics 研究生物体内各种细胞群体在新生 增殖 消亡过程中处于各种状态的细胞数量 时间参数和分布位置的技术手段 检测方法 1 细胞计数2 生长曲线3 倍增时间4 生长分数 5 丢失系数6 标记指数7 分裂指数8 细胞周期参数 1 CellCounting 直接计数 台盼蓝计数法比色半定量 四唑盐法 四唑盐法 3 4 4 二甲基噻唑 2 5 二苯基四氮唑溴盐 简称MTT 线粒体的琥珀酸脱氢酶将MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物 比色测定间接反映活细胞数量 细胞培养显色 加入MTT溶液 5mg ml 继续培养4h 加DMSO 振荡10min比色 490nm波长测定光吸收值 BreastCancerResearchandTreatmeat2004 84 251 2606 TheirResearchStrategy 7 TheTechnologyTheyUsed 2 GrowthCurve Cellculture Cellcounting 每次至少3瓶 每瓶至少3次 取平均数 共做7天 作图 培养时间为横坐标 细胞数为纵坐标 在对数坐标纸上作图 0 1 0 1 3 DoublingTime Invivo DT 0 1 t logDt logDoDo 首次测得的肿瘤直径 cm Dt t时间后测得的直径 cm ComputedTomography 某转移癌 Do 2 Dt 4 t 90DT 0 1 90 0 6 0 3 30 d effectivedoublingtime TDeff 考虑细胞丢失因素的细胞倍增时间potentialdoublingtime TDpot 不考虑细胞丢失因素的细胞倍增时间 原发性肺癌腺癌6421鳞癌8512间变性癌5511乳腺癌1714结 直肠癌1990淋巴瘤274 肿瘤类型 病例数 倍增时间 周 780例人体肿瘤体积倍增时间Steel 1977 未完 4 GrowthFraction GF 肿瘤中增殖细胞占细胞总数的比例GF P P QP proliferationQ quiescent 5 丢失系数 丢失系数 KL KBKL 细胞群体在增殖过程中的丢失率KB 细胞群体在增殖过程中的生成率 6 LabelingIndex LI LI Ns NNs Numbersphase 常用方法 3H TdRBrdUPCNA Ki67 3H TdR 3H TdR和细胞短暂孵育 间隔时间取材 放射自显影 图像分析仪计数或液闪计数 SPSS统计分析 BrdU BrdU和细胞共孵育较长时间 取材固定 加入BrdU抗体 加入生物素标记的二抗 加入链霉菌抗生物素蛋白 过氧化酶 DAB显色 图像分析仪计数 SPSS统计分析 ChinesejournalofCancer2003 22 11 1127 1134 PCNA 取材固定 加入PCNA抗体 加入生物素标记的二抗 加入底物 显色 图像分析仪计数 SPSS统计分析 SynovialsarcomaImmunohistochemicalStrongstainingofPCNAJ Vet Sci2004 5 2 173 180 Ki 67 PositivestainingforKi67 CancerCytopathl2004 102 142 9 7 MitoticIndex MI 经典方法免疫荧光方法 经典方法 Synovialsarcome MitoticfiguresJ Vet Sci2004 5 2 173 180JNipponMedSch2003 70 3 219 226 免疫荧光方法 8 ParameterofCellCycle Tc TG1 Ts TG2和TM 常用的有3H TdR标记法和流式细胞技术flowcytometry FlowCytometry 利用流式细胞仪flowcytometre FCM细胞快速 准确 多参数的定量分析体积 DNA含量