妇洁灵洗剂质量标准研究.doc

妇洁灵洗剂质量标准研究【摘要】目的制定妇洁灵洗剂的质量标准。方法采用薄层色谱法鉴别黄柏、苦参、蛇床子；采用高效液相色谱法测定苦参碱的含量。结果薄层斑点清晰,阴性样品无干扰,苦参碱在0.021 80.108 8 mg/mL范围呈良好的线性关系,平均回收率为98.4%,RSD1.54%。结论该方法准确、重复性好,可有效控制本制剂的质量。 【关键词】 妇洁灵洗剂；苦参碱；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准Study on Quality Standard of Fujieling LotionWANG Ye-ming, XU Fei, LI Shun-xiang(Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Hospital of Guangzhou, Guangzhou 510800, China；Hunan University of TCM, Changsha 410208, China；Hunan Academy of Chinese Medicine, Changsha 410013, China) Abstract：Objective To establish the quality standard for Fujieling Lotion. Method Cortex Phellodendri Chinensis, Radix Sophorae Flavescentis and Fructus Cnidii were identified by TLC. The content of Matrine was determined by HPLC. Results The TLC spots developed were fairly clear. The linear range of Matrine was 0.021 80.108 8 mg/mL, and the average recovery was 98.4% with RSD1.54%. Conclusion The method is accurate, reproducible and can control the quality of Fujieling Lotion effectively.Key words：Fujieling Lotion；Matrine；TLC；HPLC；quality standard妇洁灵洗剂是广州市中西医结合医院的医院制剂,由苦参、三白草、黄柏、蛇床子、百部、白鲜皮、地肤子、土茯苓、败酱草、花椒等组成,具有清热解毒、祛风止痒、杀虫利湿、活血止痛的功效。经多年临床应用于妇科炎症性疾病,获得满意疗效1-2。为有效控制该制剂的质量,保证临床疗效的稳定性,笔者对方中的主药苦参、黄柏、蛇床子进行薄层色谱鉴别,采用高效液相色谱(HPLC)法对洗剂中的苦参碱进行含量测定。1 仪器与试药Waters510高效液相色谱仪(包括Waters486检测器、Waters510泵、N3000工作站,美国Waters公司)。黄柏对照药材(批号121510-200702),苦参对照药材(批号121019- 200304),蛇床子对照药材(批号121030-200706),苦参碱对照品(批号110805-200507,供含量测定用),氧化苦参碱对照品(批号110780-9703,供含量测定用)均购自中国药品生物制品检定所。妇洁灵洗液(每瓶250 mL,批号090706、090906、091010、091020、091208,广州市中西医结合医院提供),阴性样品(湖南省中医药研究院中药研究所制备)。乙腈、甲醇为色谱纯,水为去离子水,其他试剂均为分析纯。2 薄层定性鉴别2.1 黄柏取本品50 mL,用浓氨试液调节至pH值约为9,加三氯甲烷萃取2次,每次20 mL,合并三氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2 mL使溶解,作为供试品溶液；另取黄柏对照药材0.1 g,加甲醇10 mL,超声处理20 min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2 mL使溶解,作为对照药材溶液；取缺黄柏药材的阴性样品,同供试品溶液制备法制成阴性溶液。照薄层色谱法2005年版中华人民共和国药典(一部)附录B试验,吸取上述溶液各5 ?L,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-水(712)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的荧光斑点,且阴性溶液无干扰。2.2 苦参取2.1项下方法制备供试品溶液；另取苦参对照药材1.0 g,加浓氨试液0.3 mL、三氯甲烷20 mL,超声处理10 min,滤过,蒸干,残渣加甲醇2 mL使溶解,作为对照药材溶液；取缺苦参药材的阴性样品,同供试品溶液制备法制成阴性溶液。照薄层色谱法2005年版中华人民共和国药典(一部)附录B试验,吸取上述供试品溶液5 ?L、对照药材溶液4 ?L、阴性对照溶液5 ?L,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-丙酮-甲醇(830.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾溶液,105 加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,且阴性溶液无干扰。2.3 蛇床子取本品50 mL,加石油醚(6090 )萃取2次,每次30 mL,合并石油醚液,蒸干,残渣加甲醇2 mL使溶解,作为供试品溶液；另取蛇床子对照药材1.0 g,加乙醚20 mL,超声处理10 min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2 mL使溶解,作为对照药材溶液；取缺蛇床子药材的阴性样品,同供试品溶液制备法制成阴性溶液。照薄层色谱法2005年版中华人民共和国药典(一部)附录B试验,吸取上述供试品溶液20 ?L、阴性对照溶液20 ?L、对照药材溶液5 ?L,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正己烷-乙酸乙酯(82)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的荧光斑点,且阴性溶液无干扰。3 苦参碱的含量测定3.1 供试品溶液的制备取本品5.0 mL,加入浓氨试液0.5 mL,加三氯甲烷萃取2次,每次15 mL,合并三氯甲烷液,挥干,残渣加少量甲醇使溶解,定容至10 mL容量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液即得。3.2 阴性样品溶液的制备 取缺苦参药材的阴性样品,按供试品溶液配制方法制成阴性溶液。3.3 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的苦参碱对照品10.88 mg,置100 mL量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,即得(含苦参碱0.108 8 mg/mL)。3.4 色谱条件 色谱柱：Lichrospher NH2柱(200 mm×4.6 mm,5 ?m)；乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钠(8020)；检测波长：220 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：30 。3.5 专属性试验 分别精密吸取供试品、对照品、阴性对照溶液各10 ?L,注入液相色谱仪。供试品色谱中,在与对照品色谱图相应的位置上有一相同的色谱峰,而阴性对照液未见干扰。3.6 线性关系的考察 精密吸取苦参碱对照品溶液(0.108 8 mg/mL)2、4、6、8、10 mL,分别置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制成0.021 8、0.043 5、0.065 3、0.087 0、0.108 8 mg/mL一系列浓度的溶液,分别取10 ?L,注入色谱仪中。以进样浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,制备标准曲线,得回归方程：Y7×106X14 739,r0.999 3,苦参碱在0.021 80.108 8 mg/mL范围内具有良好的线性关系。3.7 精密度试验 精密吸取同一苦参碱对照品溶液10 ?L,重复进样5次,测定其峰面积积分值,结果RSD1.35%(n5)。3.8 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液10 ?L,于0、1、2、4、8 h进样,测其苦参碱的峰面积积分值。结果表明,供试品溶液在8 h内基本稳定,RSD0.66%(n5)。3.9 重复性试验 取同一批号样品(批号091208)5.0 mL,共5份,按上述色谱条件测定其苦参碱含量。结果RSD0.81%(n5),表明本法重复性良好。3.10 加样回收率试验 分别精密量取已测定含量的样品(批号091010)2.50 mL,即0.252 mg,共6份；分别精密加入苦参碱对照品溶液(0.108 8 mg/mL)2.50 mL,即0.272 mg,按3.1项下方法制备供试品溶液,按上述含量测定方法测定,计算回收率。结果见表1。表1 加样回收率试验结果（略）3.11 样品测定 分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10 ?L注入色谱仪。以外标法计算样品中苦参碱的含量。见表2。表2 妇洁灵洗剂中苦参碱的含量测定结果(略)4 讨论 经多批样品的含量测定发现,处方中苦参的氧化苦参碱未被检出,然而用处方中苦参药材可以检测出氧化苦参碱,并且以妇洁灵样品的提取工艺单独制备苦参药材样品也可检测出氧化苦参碱(见图1)。由此,推测在煎煮过程中可能处方中其他药材与苦参中氧化苦参碱反应,有待进一步研究。妇洁灵洗剂由13味中药组成,经预试验选定主要药味苦参、黄柏、蛇床子作为薄层鉴别,君药苦参中苦参碱作为含量测定指标。近年来,对苦参中苦参碱的含量测定有正相HPLC法3-4、高效毛细管电泳法5等报道。妇洁灵洗剂中苦参碱为其主要有效成分,采用正相HPLC法测定苦参碱的含量,选择性好,且阴性无干扰。由方法学考察结果可见,该测定方法快速、重复性和稳定性好,精密度、回收率均较高,与薄层鉴别结合能很好地控制妇洁灵洗剂的内在质量。【参考文献】 1 王叶茗,徐华光,周丽嫦.妇洁灵外洗液药效学研究J.中国中医药信息杂志,2000,7(11)：3334.2 王叶茗,覃秋萍,周丽嫦.三白草洗剂治疗湿热带下病100例疗效观察J.新中医,2001,33(3)：3132.3 彭华山.HPLC法测定阴炎净洗