发酵罐的实消及接种发酵.doc

发酵罐的实消及接种发酵 一、实验目的1、学习发酵过程中培养基的添加、实消、接种等一般操作过程。2、对发酵罐进行参数设定并对发酵罐进行自动化控制， 完成培养、取料、罐的清洗等步骤。 二、实验原理（一）培养基的添加n 按工艺要求配制培养基原液。 n 打开排气阀F14，关闭进气阀F13，卸去罐内压力；将校验好的pH、DO电极装入发酵罐内。注意：传感器的坡面要放置正确，使得罐壁平滑；防止出现死角灭菌不彻底。n 打开罐盖上的加料口，将培养基原液加入发酵罐内，并加水至所配培养液总量的7585左右（视环境温度、蒸汽压力及接种量而定，其余2515为蒸汽冷凝水和种子量）。n 拧紧加料口螺母，但不要太紧以免损坏密封圈。 （二）培养基的实消n 检查夹套排水阀F33是否打开，夹套水是否排尽。n 夹套预热：打开F2、稍开F33，接通电源，开电源开关，手动开启搅拌电机，调节电机转速至150rpm左右，进行慢速搅拌。注意：F2不要太大，防止产生内压而损坏罐体。夹套预热是为了防止进入罐内的水蒸气冷凝成水后改变培养基浓度。n 当发酵罐内的温度达到80左右时，打开F4、F22，排尽蒸汽罐中冷凝水后即关闭F22；稍开F21，使蒸汽徐徐进入发酵罐；继续升温 n 关闭进气阀F13，并将排气阀F14调为微开n 当培养液养液温度达到95100后可停止搅拌。当发酵罐内温度达到灭菌要求温度时，关闭阀门F4和F14。在灭菌过程中，应时刻注意罐压，并控制在0.10.11MPa之间，严禁超压。罐压的控制通过调节阀门F2和F33来实现。 n 注意在升温过程中，要关闭冷却水，否则当温度设定值设定在培养温度时，冷却水管中会自动通冷却水，不仅会影响升温速度、浪费水蒸气，更重要的是会引起冷凝水过多，引起培养液浓度变化或不能达到灭菌效果。n 实消时间一般为30分钟。到时间后，关闭F2、F14。自然冷却10分钟左右。n 通冷却水进行冷却，操作如下：关闭夹套排水阀F33，按冷却键，至手动冷却状态；或调整温度设定值(调节方法见“DF-B1C控制系统的操作说明”)，按冷却键至自动状态；此时起即进入控温状态。n 当蒸汽阀门关闭后以及通入冷凝水，罐内温度会迅速下降，当压力降至0.03Mpa时，必须间隙开启进气阀F13，让空气进入发酵管内，并保持内压力在0.030.05MPa之间。 n 当罐内温度降至70以下时，调节搅拌电机的调速器，慢速搅动培养基，加快冷却速度；同时可稍开进气阀F13和调节排气阀F14，使罐压保持在0.030.05 MPa之间。n 注意在各操作过程中，必需保持空气管道压力大于发酵罐压，否则会引起发酵液倒流进过滤器中，堵塞过滤器而失去过滤能力。 （三）接种n 当发酵液温度降到接种温度时即可进行接种。 n 准备合格的摇床菌种。 n 用酒精棉擦洗罐顶接种口，并在接种口四周围上酒精棉。接种者的双手也需用酒精棉擦洗消毒、晾干。 n 调进气阀F13，减少进气量（不能关闭，否则罐压跌零，引起污染），拧松接种口螺母；检查罐内压力是否在0.01MPa以下（如不在应开大排气阀P14或调进气阀F13，减少进气量），点燃接种口四周的酒精棉；拧下接种口螺母，并将其放入预先准备的盛有酒精的培养皿中。 n 将菌种瓶的瓶口在火焰上烧一会儿，并在火焰下拔下瓶塞，迅速将菌种倒入发酵罐内。 n 盖上接种口螺母，灭火焰，拧紧螺母；并用酒精棉将接种口擦洗干净