甲状腺乳头状癌Ret 基因的检测.pdf

中国耳鼻咽嚷头曩外科 2 0 0 5 年6 月 第1 2 卷 第 6 棚 甲状腺乳头状癌 R e t 基因的检测 韩晓晨 赵文川 陈华 孙保存 1 河北省唐山市人民医院头颈外科 b f l L唐 山 0 6 3 0 01 2 天津医科大学附属肿瘤医院头颈肿瘤科 天津3 0 0 0 6 0 摘要 目的研究分析 R e t 原癌基因 R e t P r o t o O n c o g e n e 在甲状腺乳头状癌表达状态及其临床价 值 方法回顾性分析 9 3例初治甲状腺乳头状癌行甲 状腺癌联合根治术的有完整随访资料的患者临床 组织 病理和免疫组织化学染色资料 与同期收治的 3 1 例甲状 腺良性病变相比较 对常规 H E染色证实上述病变的石 蜡包埋组织行 R e t 免疫组织化学染色 结果 9 3 例甲状 腺乳头状癌 中 4 5例 4 8 4 R e t 基因阳性表达 3 1 例 甲状腺 良性病变中 8 例 2 5 8 阳性表达 R e t 基因在甲状腺乳头状癌和良性病变中的阳性表达率存在 统计学差异 R e t 基因表达与甲状腺乳头状癌的局部侵 犯及颈淋巴结转移有明显相关性 P 0 0 5 结论 R e t 基因表达状态对甲状腺良恶性病变的鉴别有一定的 提示作用 可能对预测甲状腺乳头状癌的发展及颈淋巴 结转移的危险性有参考价值 关键词 甲状腺肿瘤 癌 乳头状 癌基因 颈 淋巴转移 St u d y o f t h e e x pr e s s i on o f Re t g e n e i n p a p i l l a r y t h y r oi d c ar c i n o ma H AN X i a o c h e n ZHA0 We n c h u a r F C HE N Hu a 2 SUN B a o c u r f 1 D e p a r t me n t o f H e a d a n d N e c k S u r g e r y T a n g s h a n P e o p l e S Ho s p i t a l T a n g s h a n He b e i 0 6 3 0 01 Ch i n a 2 De p a rt me n t o f He a d N e c k H o s p i t a 1 T i a n j i n M e d ic a l C h i n a On c o l o g y Ca n c e r I n s t i t u t e U n i v e r s it y T ia n j i n 3 0 0 0 6 0 甲状腺癌是头颈部常见的恶性肿瘤 甲状腺乳头状 癌约占甲状腺癌 5 9 9 8 9 0 是最常见的病理类 型 近年来发病率有上升趋势 甲状腺乳头状癌有些恶性 特征 如血管和包膜浸润 但在光镜下有时很难判断 第一作 者简 介及通 讯 韩 晓 晨 男 河北人 医学 硕士 主 治医9 il i 主要专业为头颈肿瘤的临床和基础研究 E ma i l j t h x c w c l y a h o o c o m c n 通讯作者 赵文川 E ma i l Z w c z j x 1 2 6 c o m C o r r e s p o n d i n g a u t h o r Z H A O We n c h u a n E ma z w c z j x 1 2 6 c o m AB S T R A C T OB J E C T l V E T b s t u d y t h e e x p r e s s i o n a n d i t s c l i n i c a l s i g n if ic a n c e o f t h e p r o t e i n o f R e t g e n e i n p a p i l l a ry t h y r o i d c a r c i n o ma ME THODS Du r i n g t h e p e r i o d o f J a n 1 9 7 5 t o J a n 1 9 9 8 1 2 4 p a t i e n t s wi t h t h y r o i d ma s s e s 9 3 c a s e s w i t h p a p i l l a ry t h y r o i d c a r c i n o ma 1 5 c a s e s wit h n o d u l a r g o i t e r 1 6 c a s e s wi t h f o l l i c u l a r a d e n o ma 1 we r e t r e a t e d S U r g i c a l l y i n Ca n c e r I n s t i t u t e H o s p i t a l T i a n j i n Me d i c a I Un i v e r s i t y T h e s p e c i me n o f t h o s e 1 2 4 p a t i e n t s we r e e x a mi n e d f o r Re t e x p r e s s i o n wit h i mmu n o h i s t o c h e mi c a l s t a i n i n g me t h o d RE SUL T S Th e r e wa s a s i g n i f i c a n t d i ff e r e n c e b e t we e n t h e e x p r e s s i o n o f p r o t e i n o f Re t g e n e i n b e n i g n a n d ma l i g n a n t t h y r o i d l e s i o n s Th e r a t e o f p o s it i v e s t a i n i n g o f R e t g e n e i n p a p i l l a ry t h y r o i d c a r c i n o ma we r e 4 8 4 wh ic h wa s s ig n if i c a n t l y h i g h e r t h a n t h a t i n b e n ig n l e s i o n s 2 5 8 I t wa s s h o w e d t h a t t h e e x p r e s s io n s t a t u s o f Re t g e n e i n p a p i l l a ry t h y r o i d c a r c i n o ma wa s r e l a t e d t o t h e l o c a l i n v a s i On a n d t h e p o t e n t i a I o f c er v i c a l I V mp h n o d e me t a s t a s i s CONCL USl ON T h e e x p r e s s i o n s t a t u s o f Re t g e n e c o r r e l a t e s t o t h e b io l o g i c a I b e h a v i o r o f p a p i l I a ry t h y r o i d c a r c i n o ma I t ma y s e r v e a s a n i mp o rt a n t i n d i c a t o r f o r p r e d i c t i n g c a r c i n o g e n e s i s p r o g r e s s io n a n d c e r v i c a l I y mp h n o d e me t a s t a s i s i n t h y r o i d c a n c e r K e y wo r d s T h y r o i d N e o p l a s ms C a r c i n o ma P a p i l l a ry On c o g en e s Ne c k L y mp h a t i c Me t a s t a s i s 易致误诊 2 甲状腺乳头状癌虽属分化型癌 但颇多发 生颈淋巴结转移 许多研究表明颈淋巴结转移是影响其预 后的重要因素 引 因此 对颈淋巴结的处理 是治疗 甲状腺乳头状癌的关键 有相当一部分甲状腺乳头状癌 患者具有潜在的淋巴转移癌灶 依靠目前的临床检诊手 段很难发现 待潜在的淋巴结转移癌增大到临床可触及 时 多已突破淋巴结包膜 侵入周 围组织 此期即使手 术切除 其疗效必然大大降低 此种现象临床上屡见不 C H I N A R C H O T O L A R YN GO L H E A D N E C K S U R G I J u n e 2 0 0 5 V o 1 1 2 No 6 355 维普资讯 中国耳鼻咽喉头巯外科 2 0 0 5 卑 6 月 第 1 2卷 第 6 期 鲜 早期颈淋巴结转移 用常规 H E组织切A染色未必 都能发现 而部分学者认为仅应对 庥上可触及肿大的转 移淋巴结 N 级 的患者行颈淋巴结清除术 但这杆 往往 N O级巾具有微小辖移癌灶的患者得 到早期治疗 延误千术时机并影响预后 选捶适宜的指标来筛选具有 微小或潜在淋巴结转移的病例 使其得到及时处理是 床上亟待解 舢 问题 越来越多的研究证实 肿瘤的 发生 发展是系列摹因结构和 或基因活性的异常改变 所致这些基因的改变影响和破坏了细胞网剥的正常调 控机制和细胞的正常生理功能 毒近 国外研究表 日 月 甲状腺乳头状癌 中经常出珊 Re t 原癌基 幽 Re t p r o t o o n c o g e n e 异常表达 且与 甲状院癌的局部侵 犯及颈淋巴结转移有相关性 目前国内尚未见相关文献 报道 本窭验采用免疫组化 S P法分别对9 3倒甲状腺乳 头状癌和 3 7 倒甲状腺 良性病变进行研究探讨 R e t 基因 在甲状腺良性病变和 甲状腺乳头状癌中的表达状卷 及 其与甲状腺乳头拭癌 局部侵犯和颈 科巴结转移的关系 旨在结合临床和病理资料米判断甲状腺结节的性质及生物 学行为 为 麻选择科学的治疗方絮提供依据 1 1 胆资料 本实验研究对象为天津医科大学附属肿 瘤医院头颈科 1 9 7 5 年 1 月 1 9 9 8年 1 月存档组织标本 共 1 2 4 倒 分两耋 E I 所有甲状腺病变均根据WH O甲状腺 肿瘤分类标准进行分类 j 甲状腺乳头状癌组 乳头状 癌组 本组共9 3 例 为甲批腺乳头状癌初冶患者并全部 行甲状腺癌联合根 台 水 有完整的临庥 病理及 墟访资 料 其中男性 3 2倒女性 6 1 刊 男 女性别比为 1 1 9 年龄 9 7 8岁中位年龄4 I 岁 其中 4 5岁的 3 8 例 4 5岁的5 5 例 肿瘤大小 0 s 6 5 c m 平均大小 1 9 c m其中 2 5 c m的 3 9倒 2 5 c m的 5 4倒 术前确谚有颈淋巴结转移的6 8 例无颈淋巴结转移的2 5 倒 癌局限于甲 犬腺内的4 1 恻 癌累及甲状腺外的5 2 倒 圆甲状腺良性病变组 良性病变组 本组共 31例 结节性半状腺肿 7 5 甲 腺腺瘤 7 6 倒 1 2实验方 去 主瞿实验试剂 鼠抗 R e t 单克隆抗体 S P 法染色试剂盒 Z YME DS P 9 0 0 0 D AB显色剂 以 上试剂均陶自北京中山生物技术有 理公司 实验步骤按说 明书进行 抗 R e t 工作液浓度 4 0 新鲜配制 I 2 4 倒均进行了R e t 病变细 免瘦组织化学检测以己知 阳i 生的结肠癌病理切片作阳性对照 用P B S 液替代抗做 阳性空白对照 正常甲状腺组织表达作为正南表达状态的 对照 1 3结果观雾 昕有免瘦组织化学切片均由病理科医师和 头颈外科医师毅盲诊断 差异为 5 1 0 然后共同 决定谚断 以细胞胞质内和 或胞膜上有棕黄色颗粒且染 色强度高于背景的非特异性着色者为 日 性细胞 每张切片 均选取5 个高倍镜视野 分别计数每一视野中阳性细胞占 总细胞数的百分数 5 个视野阳性细胞百分数之平均数 为 该倒日 日 性细胞百分数结果 参考C h e u n g 介绍的方法 根 据着色程度和范围 以着染绌胞数达到计数细胞的5 O 以 上为阳性 无着染细胞或着染细胞数 5 0 为阴性 图1 1 4统计学处理 数据分析采崩的统计软件为S P S S1 0 0 本绢为计数资料 Re t 与性 别 年龄 肿瘤大小 局 部侵犯 颈淋 巴结转穆等 疬理 因素相 关性采用 P e a r s o n 检验 当P 0 0 5 表示差别有统计学意义 2 甲状腺乳头 戈雇与甲状腺 良性癍变R e t 表达状态之比 较 R e t 生染色位干细胞质 为 也可以位于细胞膜上 其阳性表达表现为 出现 浸 黄色 椋黄色 棕褐色 颗 粒 在 9 3倒 甲状腺乳头状癌 中阳性表达 4 5 例 阳 性率为4 8 4 在 3 倒甲 犬腺良畦病变中 阳n 生 表达 8倒 阳性率为2 5 8 两组表达之间存在统计学差异 P 0 0 5 司标本的正常甲状腺组织 Re t 染色均 为阴 性 两组 R e t表达 阳性率的 比较 表 1 表 1 甲状瞩乳头状癌与甲状腺 良性病变 R e t 表达状况比较 2 2甲状腺乳头状癌的 R e t 表选与性别 年龄 肿瘤大 小 局部幔犯 颈淋 巴结转 移的 关系 表 2 在甲状腺乳头状癌中 腺外型 R e t 的阳性表达率为 5 9 6 腻内型 R e t 的阳性表达率为3 4 1 两者表达 之间存在统计学差 P 0 0 5 说明 Re t 表达与甲状 腺乳头状癌的局邵侵犯有 相关性 在淋巴结转移组 h D NEcK SURGt J 2085 Vol 12 No 6 维普资讯 中国耳鼻咽曝头曩外科 2 0 0 5 年 6 月 第1 2 卷 第6 期 中R e t 的阳性表达率为5 5 9 明显高于无淋巴结转移组 的 2 8 O PO O 5 表 2 甲状腺乳头状癌的 R e t 表达与临床 病理指标的关系 1 9 9 5 年 P a s i n i 等克隆了整个 R e t 基因片段 确认了 R e t 基因的 2 O个外显子的位置 利用 8个限制性核酸内 切酶 绘制了详尽的酶切图谱 已有证据表明 R e t 原癌 基因与其他基因能形成多种融合基 因 R e V P T C 一 1 R e t P T C一 2 R e t P T C 一 3等 见于甲状腺乳头状癌I 并 可能与癌变有关 B r a u c k h o f f 等1 9 研究发现 9 1 3 3 3 的甲状腺乳头状癌患者在 Re t 基因密码子 7 9 0 7 9 1 8 0 4 有突变 表明R e t 基因可能在外显子 1 3 和 1 4 处突变 影响了编码的蛋白胞 内区域 因而引起 甲状腺 乳头状癌 此外 R e t 融合基因在肿瘤发展过程中也发 挥了决定性作用 研究表明 R e t 基因在乳头状癌细胞表 达 但在正常甲状腺滤泡上皮中不表达 因此可将 R e t 作 为较为特异的诊断指标 但阴性表达并不能完全排除乳头 状癌l 6 l 甲状腺肿瘤较为常见 而甲状腺乳头状癌是甲 状腺恶性肿瘤中发病率最高的一种类型 光镜下一些良性 病变 如结节性 甲状腺肿 甲状腺滤泡状腺瘤等囊性变后 形成的假乳头或乳头状增生可以非常相似于甲状腺乳头状 癌中的所谓 真乳头 结构 而且当细胞核增大 淡 染的程度不很明显时 就容易发生混淆而给确定诊断带 来困难 此时 检测甲状腺结节组织的 R e t 基因表达对 良恶性病变的鉴别有一定的提示作用 本组乳头状癌 中 R e t 染色阳性率高于良性病变组 提示 Re t 表达明 显增加 可以作为乳头状癌辅助诊断的指标 本实验中 良性病变组的阳性表达位于结节性甲状腺肿的乳头状增生 处 提示R e t 表达可能与甲状腺组织的乳头状增生及乳头 状癌的发生有关 在甲状腺乳头状癌发展过程中 R e t 表达代表了一个 早期事件I 1 R e t 表达与甲状腺乳头状癌典型的核改变有 关 本研究显示 在癌细胞异形性明显的病例 其 R e t 表达更多 更强 Di R e n z o等在所有腺外侵犯的甲 状腺乳头状癌中均检测到 R e t 基因重排 此外 另一项 研究报道在R e t 基因甲状腺靶表达的转基因鼠发现了与人 A g L 头状癌十分相似的甲状腺癌 所有的这些癌均出现 甲状腺周围侵犯1 在我们的研究中可以看到 无甲状 腺周围侵犯的甲状腺癌的R e t 表达率低于有甲状腺周围侵 犯的甲状腺癌的R e t 表达率 提示 R e t 表达的甲状腺乳头 状癌更有可能出现局部侵犯 因此 R e t 表达的检测可以 作为一个确定甲状腺乳头状癌局部侵袭性大小的指标 有 研究显示 甲状腺乳头状癌的淋巴结转移率与肿瘤的侵犯 程度呈正比 而与肿瘤的大小无关l 本实验结果显示 在无颈淋巴结转移的甲状腺乳头状癌患者中有2 8 O R e t 表达阳性 而有颈淋巴结转移的甲状腺乳头状癌患者中 有 5 5 9 R e t 表达阳性 两者存在着明显的差异 说明 R e t 基因的异常表达与甲状腺乳头状癌的颈淋巴结转移潜 能有十分密切的关系 因此 临床上检测癌组织的R e t 基 因表达可作为判断甲状腺乳头状癌生物学行为的有价值的 参考指标 R e t 基因异常高表达的甲状腺乳头状癌的N O 级 病例应考虑同期行预防性颈淋巴结清除术 此外 通过抑 制 R e t 基因的异常表达达到控制甲状腺乳头状癌的发生 发展 转移的 目的 有可能成为未来甲状腺乳头状癌生物 治疗领域的研究内容 综上所述 R e t 阳性表达与甲状腺乳头状癌的发生 发展 颈淋巴结转移关系密切 有可能作为早期诊断 监测颈淋巴结转移的独立指标 1 李树玲 刘经祖 甲状腺乳头状癌 5 5 1 例外科治疗远期疗效观察 中 国肿瘤临床 1 9 9 2 1 9 5 1 O 2 S c o p a CD Me la c h r i n o u M S ar a d o p o u l o u C e t a 1 Th e s ig n if i c a n c e o f t h e g r o o v e d n u c l e u s i n t h y r o i d l e s io n s Mo d P a t h o l 1 9 9 3 6 6 91 6 9 4 3 Mi r a l l i e E V i s s e t J Sa g a n C e t a l L o c a l i z a t i o n o f c e r v i c a l n o d e me t a s t a s i s o f p a p i l l a r y t h y r o id c a r c i n o ma W o r ld J Su r g 1 9 9 9 2 3 9 7 0 9 7 3 4 W e i n b e r g RA On c o g e n e s a n t O n c O g e n e s a n d t h e mo l e c u la r b a s e s o f mu l i s t e p c a r c in O g e n e s is Ca n c e r Re s 1 9 8 9 4 9 3 7 1 3 3 7 21 5 F a b i e n N P a u l i n C San t o r o M e t aI De t e c t i o n of RE T C HI N AR C H O T O L A R Y N G OL H E A D N E C K S U R G I J u n e 2 0 0 5 V o 1 1 2 No 6 357 维普资讯 中圈耳鼻啊曩头翻外科 2 0 0 5年 6 月 簟 1 2 卷 第 6 期 o n c o g e n e a c t iv a t io n i n h u ma n p a p i ll a r y t h y r o id c a r c i n o ma s b y in s i t u h y b r i d i z a t io n Br J Ca n c e r 1 9 9 2 6 6 1 0 9 4 1 0 9 8 6 Ch e u n g CC E z z a t S F r e e man J L e t a I I mm u n o h i s t o c h e mi c a l d ia g n o s is o f p a p i ll a ry t h y r o i d c a r c i n o ma Mo d P a t h o l 2 0 0 1 1 4 3 3 8 3 4 2 7 Ma i KT L a n d ry D C T h o ma s J e t a 1 Re t o n c o g e n e p r o t e in e x p r e s s i o n i n p a p i ll a ry t h y r o id c a r c i n o ma a n d r e la t e d le s i o n s T u mor i 2 0 01 8 7 1 6 6 1 7 2 8 M H K i t a i c h i M Ma s u d a E e t a 1 r e t P TC e x p r e s s i o n ma y b e a s s o c ia t e d wit h lo c a l i n v a s i o n o f t h y r o id p a p i l la ry c a r c i n o ma J Su r g On c o l 1 9 9 9 7 1 7 6 8 1 9 Br a u c k h o f f M Gimm O Hi n z e R e t a 1 P a p i l l a r y t h y r o id c a r c in o ma i n p a t i e n t s wi t h R E T p r o t o o n c o g e n e g e r mli n e mu t a t i o n Th y r oi d 2 0 0 2 1 2 5 5 7 5 61 1 0 Vi g l i