维生素AD中维生素A测定.doc

实验三、维生素AD滴剂中维生素A的鉴别与含量测定一、目的要求1. 掌握维生素A鉴别反应的实验原理；2. 掌握紫外-三点校正法测定维生素A含量的原理和操作方法；3. 掌握三点校正法的计算方法；4. 掌握胶囊型滴剂的含量测定处理及其计算方法。二、实验原理维生素A的结构为一个具有共轭多烯醇侧链的环己烷，能与氯仿、乙醚、环己烷或石油醚任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶，由于其中有多个不饱和键，性质不稳定，易被空气中氧或氧化剂氧化，易被紫外光裂解，并且其对酸不稳定。其醋酸酯比维生素A稳定，临床使用一般将本品或棕榈酸酯溶于植物油中应用。因此，维生素A及其制剂除需密封在凉暗处保存外，还需充氮或加入合适的抗氧剂。1. 鉴别反应维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液中即显蓝色，渐变紫红色。反应机理为维生素A与三氯化锑中存在的亲电试剂氯化高锑反应，生成不稳定的蓝色碳正离子。2. 含量测定维生素A具有紫外吸收特征，在325 nm328 nm的范围内有最大吸收；但由于维生素A制剂中含有稀释用油，且维生素A原料药中混有其他杂质，因此测得吸光度中含有无关吸收引入的误差，需用校正公式法校正以得到正确结果。本实验采用三点校正法。三点校正法是在三个波长处测得吸收度，根据校正公式计算吸收度A校正值后，再计算含量，故本法称为“三点校正法”。该原理主要基于（1）杂质的无关吸收在310 nm340 nm的波长范围内几乎呈一条直线，且随波长的增长吸收度下降。（2）物质对光吸收呈加和性的原理。即在某一样品的吸收曲线上，各波长处的吸收度是维生素A与杂质吸收度的代数和，因而吸收曲线也是二者的叠加。三点波长的选择采用等波长差法，即在1的左右各选一点为2和3，使3-1=1-2。中国药典规定1=328 nm，2=316 nm，3=340 nm。三、仪器及试药紫外分光光度仪，100 mL容量瓶，烧杯若干个，剪刀、镊子、万分之一天平；维生素AD滴剂，环己烷，三氯化锑，三氯甲烷（无水无醇），乙醚。四、实验内容及步骤1.鉴别 25%三氯化锑的三氯甲烷溶液的配制：取三氯化锑25 g，加三氯甲烷使溶解成100 mL。取维生素AD滴剂，加三氯甲烷稀释成每1 mL含维生素A1020 U的溶液；取1 mL，加25%三氯化锑的三氯甲烷溶液1 mL，观察实验现象。2. 含量测定取本品数粒，精密称定，倾出内容物，混合均匀。囊壳用乙醚洗净，置通风处使溶剂自然挥尽，再精密称定囊壳质量，求得内容物的装量。取内容物适量精密称定，置100 mL容量瓶中，用环己烷溶解并稀释到每1 mL含维生素A915 U的溶液。照紫外-可见分光光度法，扫描400250 nm波长范围内维生素AD滴剂的吸光度，并选点测定300、316、328、340、360处的吸光度。中国药典（2005）规定，本品含维生素A应为标示量的90.0%120.0%。紫外操作方法：打开电脑及仪器电源点电脑桌面上的软件快捷方式“连接”仪器自检自检完成后，点“确定”在样品池中放入参比溶液（两个全参比），注意：光路要对准！点“自动调零”和“基线”把其中一个参比液换成样品（靠近身体的放样品，远离人的放参比）注意：光路要对准！“编辑”“方法”“设波长范围”“图象” “自定义”“限制”改X、Y轴范围点“开始”扫描结束后，点“操作”“选点操作”，输入对应波长打印“断开”关工作站关仪器和电脑.五、数据处理 求 表观：由 A= CL， 求得 表观 =A /（CL）。A328(校正)=3.52(2A328A316A340): 表观百分吸收系数A: 328 nm处直接测得的吸光度或校正后的吸光度C: 以供试品为纯品而计算得到的供试品浓度, g/100 mLL: 光程长,1 cml 求效价（IU/g）：效价指每克供试品中所含维生素A的国际单位数（IU/g）。计算公式IU/g = (328 nm)表观F F：换算因数，维生素A醇，1830 ；维生素A醋酸酯，1900 求标示量%，标示量：供试品标签上注明的每克或每胶丸含有的维生素A的国际单位数。标示量%= 【(328 nm)表观FDM】/标示量 D：供试品的稀释倍数（本实验D=1）；M ：对维生素A原料为1g，对维生素A胶丸为平均内容物重量，g；六、注意事项1.维生素A遇光易氧化变质，故测定应在半暗室中尽快进行。2.三点校正法测定时，除其中一点在最大吸收波长测定外，其余两点均在最大吸收的两侧上升或下降陡部的波长处进行，若仪器波长不够准确时，即会带入较大误差，故测定前应对所用仪器进行波长校正。 3. 鉴别反应时所有仪器均需干燥。4. 为防止污染环境，环己烷应回收只这顶的回收处。七