低聚木糖的测定(高效液相色谱测定方法).doc

五低聚木糖的测定(高效液相色谱测定方法)本方法适合食品中低聚木糖的含量的测定本方法检测限：食品中低聚木糖为0.10%。（一） 方法提要 试样中的低聚木糖经提取后在氨基色谱柱上分离，根据保留时间定性，用蒸发光散射检测器测定低聚木糖的含量。（二） 仪器1. 高效液相色谱仪带SEDEX 75蒸发光散射检测器。2. 超声清洗仪。3. 天平（精确到0.001g和0.0001g）。4. 微孔滤膜（PVDF 0.45 m）。（三）试剂1. 色谱用水（Millipore纯水器制备）。2. 乙酸锌溶液： 称取21.9g乙酸锌，加3mL乙酸,加水溶解至100mL。3. 亚铁氰化钾溶液： 称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解至100mL。4. 木二糖对照品，Wako公司 (纯度90%)。5. 木二糖标准溶液（10.0mg/mL）：精确称取50mg木二糖用蒸馏水定容至5mL容量瓶中，即得木二糖标准溶液。（四）测定步骤1. 样品处理：固体样品：取均匀样品1.0g(精确到0.1mg)于150ml锥形瓶中，加水30ml，超声20min，再加入乙酸锌溶液，亚铁氰化钾溶液各2ml，摇匀后，经滤纸过滤到50ml容量瓶中，用水定容到刻度。取此滤液通过微孔滤膜过滤，滤液待用。液体样品：取均匀试样10mL(精确到0.1mL)置于150ml锥形瓶中，加水20ml，超声20min，再加入乙酸锌溶液，亚铁氰化钾溶液各2ml，摇匀后，经滤纸过滤到50ml容量瓶中，用水定容到刻度。取此滤液通过微孔滤膜过滤，滤液待用。2. 标准工作曲线制作。精密吸取木二糖标准溶液1.0 ml，5.0 ml，10.0ml，分别置于100mL容量瓶中，用蒸馏水定容到100mL，摇匀。分别取10L标准工作系列溶液进样分析，以测得的木二糖的峰面积，分别对木二糖的浓度绘制标准曲线。3色谱条件色谱柱：Cosmosil Sugar D 氨基液相色谱柱 250 mm i.d.4.60mm, 5m；流动相：色谱用水乙腈=22+78(V+V)；流速：1.0mL/min；柱温：35；蒸发光散射检测器：蒸发温度35，压力 3.5Bar；4. 样品测定。取样品滤液10L进液相色谱分离测定，根据色谱峰保留时间定性，外标峰面积法进行定量。（五） 结果计算根据待测样品色谱峰面积，由标准回归方程式中得样液中山梨醇含量，计算出样品中的含量。试样中木二糖含量按下式进行计算。X=式中：X试样中低聚木糖（以木二糖计）含量，单位为克每一百克（毫升）（g/100g或g/100 mL）；c样液的浓度，单位为毫克每毫升（mg/ mL）；V样品的定容体积，单位为毫升（mL）；m样品的取样量，单位为克（g）；计算结果保留三位有效数字。（六） 注释1. 低聚木糖是由2-7个木糖分子以-1,4糖苷键结合而成的功能性聚合糖。与通常人们所用的大豆低聚糖、低聚果糖、低聚异麦芽糖等相比具有独特的优势，它可以选择性地促进肠道双歧杆菌的增殖活性，其双歧因子功能是其它聚合糖类的10-20倍。木二糖是低聚木糖的主要组分之一，分子式为C10H18O9。它为白色粉末，常温下易溶于水。2. 也可用Waters 公司2410示差检测器，检测池温度35，但检测灵敏度低于蒸发光散射检测器。3. 文中试剂如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如未注明其他要求，均指三