不同剂量硒对染铅孕鼠仔代生长发育影响.doc

不同剂量硒对染铅孕鼠仔代生长发育影响【摘要】目的探讨不同剂量硒对染铅孕鼠仔代性别分化、生长发育和青春期启动的影响。方法SD大鼠随机分为5组，自受孕120d，中毒组孕鼠自由饮用含2mg/ml醋酸铅的双蒸水，硒拮抗组在此基础上分别自由饮用含2，4，8g/ml亚硒酸钠的双蒸水，对照组自由饮用双蒸水。自然分娩后各组母鼠均饮用双蒸水并哺乳，观察仔鼠性别比例、出生后4，22d生存率、肛殖距离(AGD)和青春期启动的情况。结果4g/ml硒拮抗组仔鼠的生长发育和青春期启动与对照组比较差异无统计学意义(P0.05)，各组仔鼠的性别比例和肛殖距离差异无统计学意义(P0.05)。结论4g/ml亚硒酸钠可明显拮抗2mg/ml醋酸铅对仔鼠生长发育和青春期启动的毒性，孕期适宜的硒营养补充量可明显改善有铅暴露史孕鼠仔代的生长发育和青春期启动。 【关键词】 铅 硒 性别分化 生长发育 青春期启动Effect of selenium on growth and development of leadintoxicated pup ratsWANG Juan,Meng Huanping,YIN Jie,et al.Department of Gynaecology and Obstetrics,the Fourth Affiliated Hospital,Hebei Medical University (Shijiazhuang 050011,China) Abstract： Objective To avert the effect of various doses of selenium on lead-induced sex differentiation,growth and development of puberty of the pup rats.Methods SD rats were randomly divided into 5 groups.From GD1 to GD20,the lead poisoning group rats were fed 2mg/ml lead acetate solution by drinking.The selenium-rivalry group rats were fed 2,4,8μg/m sodium selenite solution by drinking on the base.The control group rats drink double evaporated water randomly.After delivery,all mother drunk double evaporated water randomly and suckling.It was observed that the sex differentiation,survival rate at PND4 and PND 2,AGD and development of puberty of the pup rats.Results The growth and development of puberty of the pup rats had no significant difference between MA group and control group (P0.05).There was no significant difference in the sex differentiation and AGO among all groups(P0.05).Conclusion 4μg/ml sodium selenite can provide significant protective effects to the hazards of the 2mg/ml lead acetate on the growth and development of puberty of the pup rats.The seleniums eligible addition in pregnancy can improve the growth and development of puberty of the second generation obviously. Key words： lead;seleniun;sex difference;growth and development;puberty intiation随着现代工业及交通业发展，铅对环境的污染日趋严重。铅通过呼吸道、消化道及皮肤吸收后，对机体的影响是全身性、多系统的，胎儿及新生儿因其独特的生理发育特点对铅的毒性更为易感1。近年来，硒对铅毒性的拮抗作用成为研究热点之一。本实验旨在探讨不同剂量硒对染铅孕鼠仔代性别分化、生长发育及青春期启动的影响，从而为临床选择最适宜的硒营养补充量提供实验依据。1 材料与方法1.1 动物与妊娠标准 成年SD大鼠共80只，其中雌鼠50只，雄鼠30只，体重240270g，饲养环境温度为(202)，湿度为(5020)，昼夜周期为12/12h。雌性SD大鼠与雄性SD大鼠以2：1比例同笼，次日上午9：00检查雌鼠是否有阴栓，并行阴道涂片，以涂片精子阳性为妊娠标准，当日指定为妊娠第1d。1.2 试剂 醋酸铅(广州化工试剂厂，分析纯)，亚硒酸钠(北京市中联特化工有限公司，分析纯)。1.3 剂量分组 实验共选用40只SD孕鼠，随机分为5组，每组8只。从受孕第1d开始，中毒组孕鼠自由饮用含2mg/ml醋酸铅的双蒸水，低剂量硒拮抗组孕鼠自由饮用含2mg/ml醋酸铅+2μg/ml亚硒酸钠的双蒸水，中剂量硒拮抗组孕鼠自由饮用含2mg/ml醋酸铅+4μg/ml亚硒酸钠的双蒸水，高剂量硒拮抗组孕鼠自由饮用含2mg/ml醋酸铅+8μg/ml亚硒酸钠的双蒸水直至孕20d。对照组孕鼠同时自由饮用同体积的双蒸水。实验期间各组孕鼠均自由进食正常饲料。各组孕鼠自然分娩后均自由饮用双蒸水进食正常饲料并哺乳。1.4 实验方法 出生后1d，每个仔鼠称重，游标卡尺测肛殖距离并根据肛殖距离区分性别。其中肛殖距离定义为：自然状态下，肛门前缘至生殖道后缘的距离。检查外生殖器有无畸形。出生后1d、出生后21d检查仔鼠成活率。出生后21d时，仔鼠按性别分笼，各组雌雄各选取6只进行尸体解剖，各脏器称重。雌性仔鼠从出生后27d开始，每日上午9：00检查有无阴道开放，直至所有雌鼠出现阴道开放。雄性仔鼠从出生后35d开始，每日上午9：00检查有无包皮分离，直至所有雄鼠出现包皮分离。1.5 统计分析 采用SPSS 11.0软件进行χ2检验 Dunnett’S检验。2 结果2.1 硒对仔鼠生长发育的影响(表1) 各组仔鼠出生时肛殖距离差异无统计学意义。与对照组比较，中毒组仔鼠出生体重明显降低，生后第4，21d成活率明显下降(P0.05)。中毒组、低剂量硒拮抗组和高剂量硒拮抗组仔鼠生后第21d体重明显下降(P0.05)。2.2 硒对仔鼠脏器的影响(表2) 各组间仔鼠生后21d子宫重量差异无统计学意义。与对照组比较，中毒组、低剂量硒拮抗组和高剂量硒拮抗组仔鼠生后21d睾丸和附睾的重量均明显下降(P0.05)。中毒组仔鼠生后21d卵巢重量明显下降(P0.05)。表1 不同剂量硒对染铅孕鼠出生仔鼠各项指标的影响（略）注：拮抗组与对照组比较，* P0.05；孕鼠数n=8。表2 不同剂量硒对生后21d仔鼠体重、脏器重量的影响（略）注：各拮抗组与对照组比较，*P0.05；动物数(雄、雌)；n=8。2.3 硒对仔鼠青春期启动的影响(表3) 中毒组、低剂量硒拮抗组和高剂量硒拮抗组雌鼠阴道开放时间推迟3.25.2 d，雄鼠包皮分离时间推迟2.64.4 d，差异有统计学意义(P0.05)。各组仔鼠阴道开放、包皮分离时体重差异无统计学意义。表3 不同剂量硒对仔鼠青春期启动的影响（略）注：各拮抗组与对照组比较，* P0.05。3 讨论 本研究结果表明，孕期适宜的硒营养补充量可明显改善有铅暴露史孕鼠仔代的生长发育和青春期启动。目前研究证明，硒可以有效通过胎盘屏障，分布到胎儿体内。由于生物组织的重要优先原则，胎盘和胎儿甲状腺作为胎儿养料及能量代谢的重要器官，硒水平较稳定2，而甲状腺激素是胚胎生长发育所必需的激素。本实验中，与对照组比较，补硒各组孕鼠仔鼠生存率及生长情况无明显改变。有研究指出，高浓度硒可激发产生大量的超氧阴离子和其他氧自由基，这些活性氧导致DNA单链断裂，累积的单链DNA断片将激发DNA内切酶的活性，产生DNA双链断片，表现出典型的凋亡现象3，解释了本实验高剂量拮抗组生后第21d仔鼠体重明显低于对照组的现象。进一步的硒毒性研究指出，亚硒酸盐毒性可能是亚硒酸与细胞膜的作用破坏了细胞膜机构和钙离子的调控机制，最后导致细胞崩解死亡3。 随着对硒研究的深入，可以认为当血硒水平维持一定范围时，作为微量元素硒靶器官的睾丸、附睾，可以通过机体自身调节来保证其正常的生理状态。但本实验中毒组及低剂量拮抗组血硒水平可能已经超出机体自身调节范围，所以睾丸和附睾的重量下降。而高剂量拮抗组睾丸和附睾重量的减轻可能与高硒状态引起的细胞凋亡有关。因为卵巢和子宫不是硒的靶器官，所以其重量无明显改变。 青春期启动是一个复杂的综合调节过程。本实验观察结果可能与发育时期体重降低有关(中毒组和低剂量拮抗组、高剂量拮抗组仔鼠生后21d体重均明显低于对照组)，即实验中观察到的青春期启动延迟可能是仔鼠生长发育受限的结果。 王庆雄4通过研究广东省孕妇血硒水平表明，不同地区硒含量差异较大。因此，应进一步探讨不同地区孕妇的最适宜硒营养补充量。【参考文献】 1FALCONM,VINASP,LUNAA,Placental lead and outcome of pregnancyJ.Toxicology