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文档简介

过氧化氢酶米氏常数的测定一、 实验目的 了解并掌握米氏常数的意义和测定方法 二、 实验原理H2O2被过氧化氢酶分解出H2O和O2，未分解的H2O2用KMnO4在酸性环境中滴定，根据反应前后H2O2的浓度差可求出反应速度。2H2O2 = 2H2O + O2 2KMnO4 + 5H2O2 + 3H2SO4 = 2MnSO4 + K2SO4 + 5O2 + 8H2O 本实验由马铃薯提供过氧化氢酶。在保持恒定的条件下，用相同浓度的过氧化氢酶催化不同浓度的H2O2分解。在一定限度内，酶促反应速度与H2O2浓度成正比。用双倒数作图法(即以1/v对1/S作图)可求得过氧化氢酶的Km值。三、 实验器材锥形瓶(6个) 吸管、酸式滴定管四、 实验试剂1、0.02mol/L 磷酸缓冲液(pH=7) 2、0.004 mol/L KMnO4(需标定)3、0.05 mol/L H2O2(需标定) 4、25% H2SO4五、实验操作1、酶液的提取：称取马铃薯（去皮）5克，加0.02mol/L 磷酸缓冲液10mL，再加少量海砂，研磨成匀浆，离心(3000r/ min，10min)，上清液即为酶液。2、滴定：取干燥锥形瓶6只，按下表顺序加入试剂：瓶号 试剂/mL 0123450.05mol/L H2O201.001.251.672.505.00蒸馏水9.508.508.257.837.004.50酶液0.50.50.50.50.50.5先加好0.05mol/L H2O2及蒸馏水，加酶液后立即混合，依次记录各瓶的起始反应时间。各瓶时间达5min时立即加2.0mL 25% H2SO4终止反应，充分混匀。用0.004 mol/L KMnO4滴定各瓶中剩余的H2O2至微红色，记录消耗的KMnO4体积。六、实验计算 分别求出15瓶的底物浓度S和相应的反应速度v 。C1V1 10 S =5 2C2V2C1V1 v = 式中 S：为底物物质的量浓度(mol/L) C1：为H2O2物质的的量浓度(mol/L) V1：为H2O2的体积(mL) 10：反应的总体积 v ：反应速度(mmol/min) C2: KMnO4物质的量浓度(mol/L) V2：KMnO4的体积(mL) 以1/ v对1/S作图求出Km。七、实验注意事项( 1 ) 按表先加
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