暨南大学色谱08第二次.doc

2008/9级色谱分析第二次作业一、选择题1衡量色谱柱柱效性能的指标是（ C ）A分离度B容量因子C塔板数D分配系数2在液相色谱中，范氏方程中的哪一项对色谱柱效能的影响可以忽略不计？（ B ）A涡流扩散项B分子扩散项C流动区域的流动项传质阻抗D停滞区域的流动项传质阻抗3在正相色谱法中，如增加流动相极性，则（ ）A样品的k降低，tR降低Bk增加，tR增加C相邻组分的增加D对基本无影响4用色谱法进行定量分析中，要求混合物每一个组分都出峰的是（ ）A归一化法B外标法C 内标法 D内加法5对于正相液相色谱法，不能用作流动相的溶剂是（ ）A氯仿 B乙醚C正已烷 D水6内标法定量的优点是（ ）A不需要校正因子B对进样量要求不严格C样品配制简单D内标物易得7液相色谱中通用型检测器是（ ）A紫外吸收检测器B荧光检测器C示差折光检测器D热导池检测器 8以HPLC法测定复方药物中的微量成分，宜采用的定量方法是（ ）A归一化法B内标法C外标工作曲线法D外标一点法9采用ODS柱分析有机弱碱混合物样品，当以某比例的乙腈-水为流动相时，样品的容量因子较小，若想使容量因子适当增加，应如何调整流动相的组成？ （ ）A增加流动相中乙腈的比例B减小流动相中水的比例C在流动相中加入少量醋酸D在流动相中加入少量氨水二、问答题1Martin 和 Synge 在二十世纪四十年代所提出的色谱领域两个远见有何重要意义？答：他们的伟大之处在于提出的两个远见：（） 流动相可以用气体代替液体以获得更高效分离（） 在液相色谱中，使用小粒径填料以及高压传输可以获得最小的理论塔板高度。第一个远见导致了气相色谱法的诞生，第二个远见则促进了高效液相色谱的诞生。2高效液相色谱与气相色谱在流动相上有何差别？答：流动相为惰性气体，组分与流动相无亲和力。：流动相为液体，流动相与组分间具亲和力，这为提高柱选择性、改善分离增加了因素，且流动相种类较多，选择余地广；流动相极性和值选择对分离起重要作用，选不同比例两种以上液体作为流动相可以增大选择性。3HPLC与GC中影响分离R的因素有何不同？答：柱选择项主要受固定相影响（分离关键）柱容量项主要受柱温影响。：柱选择项主要受流动相性质影响（分离关键）分离相种类确定后，柱容量项主要受流动相配比（洗脱能力）的影响4写出色谱分离方程，结合该方程谈谈如何提高高效液相色谱的分离度？答：，：采用粒度小、填充均匀的固定相采用粘度小、低流速的流动相，：调整流动相种类、极性和值（受柱温度影响小），：调整流动相和固定相配比（受柱温影响小）5试解释下列名词：ODS柱；化学键合相；封尾键合相；键合相色谱；检测限；溶剂梯度洗脱答：ODS柱：十八烷基硅烷载体表面的硅醇基键合，构成十八烷基硅烷键合光相。化学键合相：通过化学反应将固定液的官能团键合在载体表面而构成的固定相。封尾键合相：用化学反应的方式将键合相的载体表面残余的硅醇基除去，这种键合相称封尾键合相。键合相色谱：以化学键合相为固定相的液相色谱分析法。最重要、应用最广泛的高效液相色谱法，目前已经完全取代了液液分配色谱法，与液液分配色谱相比，的影响因素相似。检测限：又叫敏感度，是响应值恰为倍噪音时所需要的样品。敏感度同时考虑了检测器的噪音和灵敏度，是仪器整体性能的综合量度。溶剂梯度洗脱：流动相的溶剂强度变化的洗脱方式；流动相的溶剂强度和组成变化影响组分的保留和选择性。6封尾键合相具有什么特点？键合相进行封尾处理的目的是什么？答：封尾键合相具有的特点：仅有分配作用，无吸附作用稳定性好，并具有强疏水性。键合相进行封尾处理的目的是：防止残余硅羟基对极性物质产生过分吸附而改变键合相分离性能，键合反应后用小分子烷化剂进行封尾处理以消除残余硅羟基，提高键合相稳定性和色谱分离重复性。7采用HPLC对一组邻苯二甲酸酯类化合物进行分析，采用流动相为四氢呋喃:异辛烷 ( 5%:95%, V/V ) ，得到色谱图如下：A. Dibutylphthalate 邻苯二甲酸二丁酯B. Dimethylphthalate 邻苯二甲酸二甲酯C. dinonyl phthalate 邻苯二甲酸二壬酯D. diethyl phthalate 邻苯二甲酸二乙酯试回答以下问题（） 预测该组邻苯二甲酸酯类化合物在正相高效液相色谱柱上的洗脱顺序？答：（2）如果流动相换成甲苯：异辛烷 ( 5%:95%, V/V )，请预测色谱图的变化情况答：整体洗脱能力差，保留时间增加。8试推测以下每组化合物在RP-BPC上的洗脱顺序：（1）（2）答：（） （） 9IPC，ISC和IEC中加入pH一定的缓冲溶液的作用有何不同？IPC加入pH一定缓冲液的作用是对于较弱酸碱,调节pH值改善离子化程度,以改变保留值与分离选择性,控制在pH值在2-7以保证键合相稳定.ISC加入pH一定缓冲液的作用是分析弱酸样品,流动相加入少量弱酸,分析弱碱性样,流动相加入少量弱酸,来抑制样品的解离.增加保留时间和kIEC加入pH一定缓冲液的作用是pH值降,弱电解质离解减少,使溶质的离解被抑制,使保留时间降少,Ks降低10空间排阻色谱法的英文缩写是什么？简述其分离原理以及洗脱顺序?答：空间排阻色谱法的英文缩写是。其分离原理：利用凝胶的孔径与被分离组分分子线团尺寸相对大小关系而对高分子溶液进行分离分析，分离过程类似于分子筛：留下小的，排出大的。洗脱顺序：洗脱顺序取决于分子线团尺寸；大粒径的分子先洗脱下来，因为难以进入凝胶孔隙中，所以路径最短，保留时间最短，最小。11什么叫做凝胶的渗透极限？什么叫做凝胶的排阻极限？什么叫做凝胶的选择性渗透？答：1) 当凝胶的孔穴都能全部接受样品分子时（分子量大），：凝胶的渗透极限全渗透，最大2) 当凝胶的孔穴都不能接受样品分子时（分子量小），；凝胶的排阻极限全排斥，最小3) 不同尺寸的分子的Kp在01之间：凝胶的选择性渗透，12简述UVD，RID，FD，ELSD，ECD，MSD等高效液相色谱检测器的主要特点。答：不破坏样品，与其它检测器串联，可用于制备样品受流速和温度变化影响小，适于梯度洗脱流动相的截止波长必须小于样品的检测波长（缺点）选择性检测器可直接用于定量分析的浓度型检测器：受温度、压力、流动相组成影响很大，不适于梯度流脱通用性检测器可进行定量分析的浓度型检测器：与相比：有极高的灵敏度和良好的选择性，最灵敏的检测器，特别适于痕量分析。是可直接用于定量分析的浓度检测器：通用性的质量型检测器：选择性的检测器可进行定量分析的浓度型检测器：软电离：产生准分子离子，易确定分子量碰撞诱导解离：多级质谱提供丰富结构信息LC-MS接口技术是解决离子化问题的关键通用性、浓用性以及质量型检测器13为何说检测限是衡量检测器性能的重要指标？答：敏感度又叫检测限，是响应值恰为倍噪音时所需要的样品。敏感度同时考虑了检测器的噪音和灵敏度，是仪器整体性能的综合量度敏感度全面反映了检测器的质量，是衡量检测器性能的重要指针它不仅取决检测器性能，还与色谱操作条件、仪器的稳定性有关14在高效液相色谱分离中，为何有时需要进行溶剂梯度洗脱？答：擅长分离宽值范围的复杂混合物，且分析时间短改善分离，提高灵敏度，提高检测性能可以降低难洗脱溶质对色谱柱的污染但容易引起基线漂移，不太适合定量。15简述薄层色谱的基本操作程序？答：1) 展出容器的准备2) 薄层板的准备：包括薄层板的古铺制、自然干燥以及活化3) 点样4) 薄屠板的溶剂预平衡和展开5) 定性（定性）洗脱（半定量）三、计算题1在一根3m长的色谱柱上分离一个混合试样，组分1和2的保留时间分别为12分钟和17分钟，流动相保留时间为1分钟，组分2的峰底宽亦为1分钟。（1）求两组分的调整保留时间。（2）用组分2求有效塔板数及有效塔板高度（3）求两组分的容量因子（4）求相对保留值（5）求分离度（6）若使两组分刚好完全分离，柱子至少多长？答:（） 求两组分的调整保留时间。 min min（） 用组分2求有效塔板数及有效塔板高度（） 求两组分的容量因子（） 求相对保留值（） 求分离度（） 若使两组分刚好完全分离，柱子至少多长？若要使两组分刚好完全分离,则R=1.52Glajch 三角形法则相关计算：（1）正相色谱 10%CHCL3/己烷二元溶剂体系中氯仿分离效果不好，试选择等溶剂强度的新的溶剂系统并计算其组成？SolventPhexane0.1ether2.8dichloromethane3.1chloroform4.1答:由题意得,即新的二元系统是13.2%二氯甲烷/己烷（2）反相色谱的三角形等洗脱面一点流动相组成为70%的甲醇/水，试根据Glajch 三角形法则计算三角形中其它各点流动相的组成。SolventSwater0methanol3.0acetonitrile3.2tetrahydrofuron4.5答:由题意得,1. 70%甲醇/水2. 65.6%乙腈/水3. 46.7%四氢呋喃/水4. 0.35甲醇:0.33乙腈5. 0.33乙腈:0.23四氢呋喃6. 0.33甲醇:0.23四氢呋喃7. 0.23甲醇:0.22乙腈:0.15四氢呋喃8. 0.47甲醇:0.10乙腈:0.075四氢呋喃9. 0.11甲醇:0.44乙腈:0.075四氢呋喃10. 0.11甲醇:0.10乙腈:0.31四氢呋喃3用内标法测定复方APC片剂中三组分的含量对照品溶液的配制：准确称取阿司匹林、非那西丁、咖啡因及内标物扑热息痛的标准品各0.220，0.150，0.035和0.035 g，分置100mL容量瓶中，用乙醇-氯仿（1：1）溶解，定容。样品溶液的配制：取10片研成细粉，准确称取约一片量0.5005 g，用上述溶剂多次萃取转移至100mL容量瓶中，加内标物扑热息痛的标准品0.0