饲料作业指导书.docx

3潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共2 页 第 1页饲料中钙的测定GB/T6436-2002第1版第0次修改1 原理 将样品中有机物破坏，钙变成溶于水的离子，用草酸铵定量沉淀，用高锰酸钾法间接测定钙含量。2 试剂和溶液2.1硝酸2.2盐酸（1+3）2.3硫酸（1+3）2.4氨水溶液1+12.5草酸铵水溶液（42g/L）:称取4.2g草酸铵溶于100ml水中。2.6高锰酸钾标准溶液（c=0.05mol/L）的配置按GB/T601规定。2.7甲基红指示剂(1g/L):称取0.1g甲基红溶于100ml 95%乙醇中。3 仪器和设备3.1高速药物粉碎机3.2分析筛：孔径0.42mm（40）目3.3分析天平3.4高温炉4 测定步骤：4.1试样的分解：称取混匀试样2-5g于坩埚中，精确至0.0002g在电炉上小心碳化，再放入高温炉于550下灼烧3h，在盛灰坩埚中加入盐酸（2.2）10ml,和浓硝酸数滴，小心煮沸，将此溶液转入100ml容量瓶中，冷却至室温，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。4.2试样的测定：准确移取试样液10ml-20ml于200ml烧杯中，加蒸馏水100ml，甲基红指示剂2滴，滴加氨水溶液至溶液成橙色，若滴加过量，可加盐酸溶液调至橙色，再多加2滴使其呈粉红色（ph为2.5-3.0），小心煮沸，慢慢滴加热草酸铵溶液10ml,且不断搅拌，如溶液变橙色，则应补加盐酸溶液使其呈红色，煮沸数分钟，放置过夜使其陈化（或在水浴上加热2小时）。用定量滤纸过滤，用1+50的氨水溶液洗涤沉淀6-8次，至无草酸根离子（接滤液数毫升加硫酸溶液数滴，加热至80，再加高锰酸钾溶液1滴，呈微红色，且半分钟不褪色）。将沉淀和滤纸转入原烧杯中，加硫酸溶液10ml，蒸馏水50ml，加热至75-80，用高锰酸钾溶液滴定，溶液呈粉红色且半分钟不褪色为终点。同时进行空白溶液的测定。潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共2 页 第2 页饲料中钙的测定GB/T6436-2002第1版第0次修改5 结果计算： 测定结果按下式计算：(V-V0)c)0.02 X（%）= 100 mv/100式中：X:以质量分数表示的钙含量，%V:试样消耗高锰酸钾标准溶液的体积，mlV0:空白消耗高锰酸钾标准溶液的体积，mlC:高锰酸钾标准溶液的浓度mol/lV1:滴定时移取试样分解液体积mlm:试样质量，g0.02:与1.00ml高锰酸钾标准溶液相当的以克表示的钙的质量。潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共 页 第 页饲料中磷的测定GB/T6436-2002第1版第0次修改1原理 将试样中有机物破坏，使磷元素游离出来，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色的络合物，在波长400nm下进行比色测定。2试剂2.1盐酸溶液1+12.2硝酸2.3高氯酸2.4钒钼酸铵显色剂：称取偏钒酸铵1.25g,加水200ml加热溶解，冷却后再加入250ml硝酸，另称取钼酸铵25g,加水400ml加热溶解，在冷却的条件下，将两种溶液混合，用水定容至1000ml,避光保存，若生成沉淀，则不能继续使用。2.5磷标准液：将磷酸二氢钾在105干燥1h，在干燥器中冷却后称取0.2195g溶解于水，定量转入1000ml容量瓶中，加硝酸3ml,用水稀释至刻度，混匀，即为，50ug/ml的磷标准液。3仪器和设备 分析天平：感量0.0001g 分光光度计：可在400nm下测定吸光度 高温炉：可控温度在（55020） 4测定步骤： 4.1试样的分解：称取试样2g-5g于坩埚中，在电炉上小心碳化，再放入高温炉，在550灼烧3h,取出冷却，加入10ml盐酸（4.1）和硝酸（4.2）数滴，小心煮沸约10min，冷却后转入100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。4.2工作曲线的绘制：准确移取磷标准液（0.0、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0ml于50ml容量瓶中，各加钒钼酸铵显色剂（4.4）10ml,用水稀释至刻度，摇匀，常温下放置10min以上，以0.0ml溶液为参比，用1cm比色皿，用400nm波长下用分光光度计测各溶液的吸光度。以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制工作曲线。4.3试样的测定：准确移取试样分解液1.0-10.0ml于50ml容量瓶中，加入钒钼酸铵显色剂（4.4）10ml，用水稀释至刻度，摇匀，常温下放置10min以上，用1cm比色皿在400nm波长下测定试样分解液的吸光度，在工作曲线上查得试样分解液的磷含量。5测定结果的计算(V-V0)c0.02 X-100 mv1/100潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共 页 第 页饲料中磷的测定GB/T6436-2002第1版第0次修改5测定结果的计算(V-V0)C0.02 X-100 mV1/100 式中：X:以质量分数表示的钙含量，% V:试样消耗高锰酸钾标准溶液的体积，ml V0:空白消耗高锰酸钾标准溶液的体积，ml C:高锰酸钾标准溶液的浓度，mol/l V1: 滴定时移取试样分解液体积ml m:试样质量，g 0.02:与1.00ml高锰酸钾标准溶液相当的以克表示的钙的质量。 潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共 页 第 页饲料中粗蛋白的测定GB/T6432-1994第1版第0次修改1原理： 凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。2试剂：2.1硫酸：化学纯，含量为98%，无氮。2.2混合催化剂：3g无水硫酸钠，0.2g无水硫酸铜2.3氢氧化钠：化学纯，40%水溶液(m/v)2.4硼酸：化学纯，2%水溶液(m/v)2.5混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两种溶液混合，在阴凉处保存期为三个月。2.6盐酸标准溶液：c=0.1mol/l, c=0.02mol/l2.7蔗糖：分析纯2.8硫酸铵：分析纯2.9硼酸吸收液：1%硼酸水溶液1000ml，加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10ml,0.1%甲基红乙醇溶液7ml,4%氢氧化钠水溶液0.5ml,混合，置阴凉处保存期为一个月。3仪器设备3.1分析天平：感量0.0001g3.2消煮炉或电炉3.3滴定管：酸式，10,25ml3.4凯氏烧瓶:250ml3.5凯氏蒸馏装置3.6锥形瓶3.7容量瓶3.8定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动，全自动蛋白质测定仪4分析步骤：4.1试样的消煮： 称取0.5-1.0g准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入3.2g混合指示剂，与试样混合均匀，再加入12ml的硫酸和两粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力，直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少两小时。4.2半微量蒸馏法将试样消煮液冷却，加入20ml蒸馏水，转入100ml容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度， 潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共 页 第 页饲料中粗蛋白的测定GB/T6432-1994第1版第0次修改摇匀，做为试样分解液，将半微量蒸馏装置的冷凝管末端侵入装有20ml硼酸吸收液和两滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，在蒸馏过程中保持此夜为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10-20ml注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加入10ml氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4min降下锥形瓶，使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。4.3蒸馏步骤的检验精确称取0.2g硫酸铵代替样品，按4.1,4.2步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.190.2%，否则应检查加碱、蒸馏、和滴定各步骤是否正确4.4滴定将蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/l或0.02mol/l盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。5空白测定称取蔗糖0.5g，代替试样，按第4章进行空白测定，消耗0.1mol/l盐酸标准溶液的体积不得超过0.2ml，消耗0.02mol/l盐酸标准溶液体积不得超过0.3ml6分析结果的计算粗蛋白质（%）=（V2-V1）C0.01406.25(mV0/V) 式中：V2滴定试样时所需标准酸溶液体积，ml V1滴定空白时所需标准酸溶液体积，ml C盐酸标准溶液浓度，mol/l m试样质量，g V试样分解液总体积，ml V0试样分解液蒸馏用体积，ml 0.0140与1.00ml盐酸标准溶液相当的、以克表示的氮的质量。 6.25氮换算成蛋白质的平均系数。 潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共 页 第 页饲料中维生素A的测定 高效液相色谱法 GB/T17817-2010第1版第0次修改1. 原理：维生素预混料中的维生素A乙酸酯用甲醇溶液提取，试液注入高效液相色谱柱，在326nm处测定，外标法计算维生素A乙酸酯含量。2. 试剂和溶液本标准所用试剂均为分析纯，水符合GB/T6682中三级用水规定，色谱用水符合GB/T6682中一级用水规定。2.1 甲醇：色谱纯。2.2 维生素A乙酸酯标准品：维生素A乙酸酯含量99.0。2.3 维生素A乙酸酯标准储备液：称取维生素A乙酸酯标准品34.4mg（精确至0.00001g），于100ml橧色容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，混匀，4保存。该储备液浓度为344g/ml1000IU/ml，临用前用紫外分光光度计标定其准确浓度。2.4 维生素A乙酸酯标准工作液：准确吸取维生素A乙酸酯标准储备液1.0ml于100ml棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀，配制工作液浓度为3.44g/ml10IU/ml。3. 仪器和设备3.1超声波水浴3.2分析天平，感量0.0001g3.3分析天平，感量0.00001g3.4超纯水器。3.5高效液相色谱仪，带紫外可调波长检测器（或二级管矩阵检测器）。4.测定步骤4.1试样溶液的制备 称取试样1g，精确至0.0001g，置于100ml的棕色容量瓶中，加入约80ml的甲醇，瓶塞不要拧紧，于65超声波水浴中超声提取30min，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，充分摇匀。如果试样中维生素A乙酸酯的标示量低于10IU/kg，则将溶液过0.45m滤膜，进样测定，否则需将溶液用甲醇进一步稀释，使维生素A乙酸酯的进样浓度与维生素A乙酸酯标准工作液浓度接近。4.2上机测定。4.2.1色谱条件 色谱柱：C18型柱，长150mm,内径4.6mm,粒度5m（或性能类似的分析柱） 流动相：甲醇+水（98+2） 流速：1.0ml/min 温度：室温 进样量：20l 检测波长：326nm潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共 页 第 页饲料中维生素A的测定GB/T17817-2010第1版第0次修改5.结果计算 试样中维生素A乙酸酯的含量，以质量分数X2计，数值以国际单位每千克（IU/kg）或毫克每千克（mg/kg）表示。按式计算：P3Vp2 X-1000 P4m2/f2 式中：P3试样溶液峰面积值 V试样溶液总稀释体积，单位为毫升ml P2维生素A乙酸酯标准工作液浓度，单位为微克每毫升g/ml P4维生素A乙酸酯标准工作液峰面积值 m2试样质量，单位为克g f2转换系数，1国际单位IU相当于0.025g维生素D3 潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共 页 第 页饲料中维生素E的测定GB/T17812-2008第1版第0次修改5.结果计算 试样中维生素E的含量，以质量分数X2计，数值以国际单位每千克（IU/kg）或毫克每千克（mg/kg）表示。按式计算：P3Vp2 X- P4m2/f2 式中：P3试样溶液峰面积值 V试样溶液总稀释体积，单位为毫升ml P2维生素E标准工作液浓度，单位为微克每毫升g/ml P4维生素E标准工作液峰面积值 m2试样质量，单位为克g f2转换系数，1国际单位IU相当于0.909mg或1.0mg维生素E潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共 页 第 页饲料中维生素E的测定 高效液相色谱法 GB/T17812-2008第1版第0次修改1.原理：维生素预混料中的维生素E用甲醇溶液提取，试液注入高效液相色谱柱，用紫外检测器（或二极管矩阵检测器）在285nm处测定，外标法计算维生素E含量。2.试剂和溶液本标准所用试剂均为分析纯，水符合GB/T6682中三级用水规定，色谱用水符合GB/T6682中一级用水规定。2.1甲醇：色谱纯。2.2维生素E对照品： dl-a-生育酚乙酸酯含量99.0。2.3维生素E标准储备液：称取维生素E dl-a-生育酚乙酸酯100mg（精确至0.00001g），于100ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，混匀，4保存。该储备液浓度为1.0mg/ml.2.4维生素E标准工作液：准确吸取维生素E dl-a-生育酚乙酸酯标准储备液1.0ml于10ml棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀，配制工作液浓度为100g/ml。3. 仪器和设备3.1超声波水浴3.2分析天平，感量0.0001g3.3分析天平，感量0.00001g3.4超纯水器。3.5高效液相色谱仪，带紫外可调波长检测器（或二级管矩阵检测器）。4.测定步骤4.1试样溶液的制备 称取试样1g，精确至0.0001g，置于100ml的棕色容量瓶中，加入约80ml的甲醇，瓶塞不要拧紧，于60超声波水浴中超声提取30min，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，充分摇匀。如果试样中维生素E的标示量低于10g/kg，则将溶液过0.45m滤膜，进样测定，否则需将溶液用甲醇进一步稀释，使维生素E的进样浓度在10g/ml102g/ml 之间。4.2上机测定。4.2.1色谱条件 色谱柱：C18型柱，长150mm,内径4.6mm,粒度5m 流动相：甲醇+水（98+2） 流速：1.0ml/min 温度：室温 进样量：20l 检测波长：285nm 检测器：带紫外可调波长检测器（或二级管矩阵检测器）潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共 页 第 页饲料中维生素B1的测定GB/T14700-2002第1版第0次修改1. 原理试样中维生素B1经酸性提取液超声提取后，将过滤离心后的试样溶液注入高效液相色谱仪反相色谱系统中进行分离，用紫外（或二级管矩阵检测器）检测，外标法计算维生素B1的含量。2. 试剂和溶液本标准所用试剂均为分析纯，水符合GB/T6682中三级用水规定，色谱用水符合GB/T6682中一级用水规定。2.1 乙二胺四乙酸二钠（EDTA）：优级纯2.2 庚烷磺酸钠：优级纯2.3 冰乙酸：优级纯2.4 三乙胺：色谱纯2.5 甲醇：色谱纯2.6 乙醇溶液：252.7 提取液在已装入约700ml去离子水的1000ml容量瓶中，加入50mgEDTA待全部溶解后，加入25ml冰乙酸、5ml三乙胺，用去离子水定容至刻度摇匀。取860ml上述溶液与140ml甲醇混合即得。2.8 流动相 在已装入约700ml去离子水的1000ml容量瓶中，加入50mgEDTA精确至0.001g，1.1g庚烷磺酸钠精确至0.001g，待全部溶解后加入25ml冰乙酸、5ml三乙胺，用去离子水定容至刻度摇匀。用冰乙酸、三乙胺调节该溶液PH至3.400.02过0.45m滤膜，取860ml上述溶液与140ml甲醇混合，超声脱气，待用2.9. 维生素B1标准储备液：准确称取维生素B1 0.0500g于100ml棕色容量瓶中，加乙醇溶液超声15min，待全部溶解后，用乙醇溶液定容至刻度。此溶液浓度为500g/ml，置4冰箱保存，保存期3个月。2.10 维生素B1标准工作液A：准确吸取2.00ml维生素B1标准储备液于50ml棕色容量瓶中，用流动相定容至刻度，该标准工作液浓度为20g/ml。2.11维生素B1标准工作液B：准确吸取5.00ml维生素B1标准工作液A于50ml棕色容量瓶中，用流动相定容至刻度，该标准工作液浓度为2.0g/ml。3 仪器和设备3.1 PH计3.2 超声波提取器3.3高效液相色谱仪，带紫外可调波长检测器（或二级管矩阵检测器）。4.测定步骤4.1试样溶液的制备潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共 页 第 页饲料中维生素B1的测定GB/T14700-2002第1版第0次修改称取维生素预混合饲料0.25g0.5g，精确至0.0001g，复合预混合饲料1g3g，精确至0.001g，置于100ml的棕色容量瓶中，加入三分之二体积的提取液，在超声波提取器中超声提取20min，待温度降至室温后用提取液定容至刻度，过滤，滤液过0.45m滤膜。4.2上机测定4.2.1色谱条件 色谱柱：，长150mm,内径3.9mm,不锈钢柱 固定相：C18型柱，粒度4m 流速：0.80ml/min 温度：2528 进样量：10l 检测波长：246 nm 检测器：带紫外可调波长检测器（或二级管矩阵检测器） 保留时间：约7min8 min5.结果计算试样中维生素B1的含量，按式计算：PiVciVsi Wi- PstimVi式中： Wi试样中维生素B1的含量，单位为毫克每千克（mg/kg） m试样质量，单位为克g Vi试样溶液进样体积，单位为微升（l）Pi试样溶液峰面积值ci标准溶液浓度，单位为微克每毫升（g/ml）Vsi标准溶液进样体积，单位为微升（l）Psti标准溶液峰面积平均值。潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共 页 第 页饲料中粗纤维的含量测定 过滤法 GB/T6434-2006第1版第0次修改1原理：用固定量的酸和碱，在特定条件下消煮样品，再用醚、丙酮除去醚溶物，经高温灼烧扣除矿物质的量，所余量称为粗纤维。（试样用沸腾的稀硫酸处理，过滤分离残渣，洗涤，然后用沸腾的氢氧化钾溶液处理，过滤分离残渣，洗涤，干燥，称量，然后灰化。因灰化而失去的质量相当于试料中粗纤维质量）它不是一个确切的化学实体，只是在公认强制规定的条件下，测出的概略养分。其中以纤维素为主，还有少量半纤维素和木质素。2试剂和材料2.1盐酸溶液：C=0.5mOl/L2.2硫酸溶液c=(0.130.005)mol/L2.3氢氧化钾溶液c=(0.230.005) )mol/L2.4丙酮2.5滤器辅料：海砂，或硅藻土，或质量相当的其他材料。使用前，海砂用沸腾盐酸（c=4mol/L）处理，用水洗至中性，在55025下至少加热1h.2.6防泡剂：正辛醇2.7石油醚：沸点范围40-603主要仪器设备:3.1分析天平：感量0.1mg3.2滤埚：石英的、陶瓷的或硬质玻璃的，带有烧结的滤板，滤板孔径40um-100um.在初次使用前，将新滤埚小心的逐步加温，温度不超过525，并在50025下保持数分钟，也可使用具有同样性能特性的不锈钢坩埚，其不锈钢筛板的孔径为90um.3.3干燥箱3.4马福炉3.5冷提取装置，附有：一个滤埚支架一个装有至真空和液体排出孔旋塞的排放管连接滤埚的连接环4分析步骤4.1称取约1g试样，准确至1mg(m1)如果试样脂肪含量超过100g/kg，或试样中脂肪不能用石油醚直接提取，则将试样装移至一滤埚并按4.2处理如果试样脂肪含量不超过100g/kg，则将试样装移至一烧杯，如果其碳酸盐超过50g/kg，按4.3处理，如果其碳酸盐不超过50g/kg，则按4.4处理。潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共 页 第 页饲料中粗纤维的测定GB/T6434-2006第1版第0次修改4.2预先脱脂 在冷提取装置中，在真空条件下，试样用石油醚脱脂3次，每次用石油醚30ml,每次洗涤后抽吸干燥残渣，将残渣装移至一烧杯4.3除去碳酸钙将100ml盐酸倾注在试样上，连续振摇5min，小心将此混合物倾入一滤埚，滤埚底部覆盖一薄层滤器辅料用水洗涤两次，每次用水100ml,细心操作，最终使尽可能少的物质留在滤器上将滤埚内容物转移至原来的烧杯中并按4.4处理4.4酸消煮将150ml硫酸倾注在试样上。尽快使其沸腾，并保持沸腾状态30min1min.在沸腾开始时，转动烧杯一段时间。如果产生泡沫，则加数滴防泡剂。在沸腾期间使用一个适当的冷却装置保持体积恒定4.5第一次过滤在滤埚中铺一层滤器辅料，使其厚度约为滤埚高度的五分之一，滤器辅料上面可盖一筛板以防溅起。当消煮结束时，将液体通过一个搅拌棒滤至滤埚中，用弱真空抽滤，使150ml几乎全部通过。如果滤器堵塞，则用一个搅拌棒小心地移去覆盖在滤器辅料上的粗纤维。 残渣用水洗涤5次，每次约用10ml水，要注意使滤埚的过滤板始终有滤器辅料覆盖，使粗纤维不接触滤板。停止抽真空，加一定体积的丙酮，刚好能覆盖残渣，静直数分钟后，慢慢抽滤排除丙酮，继续抽真空，使空气通过残渣，使之干燥。4.6脱脂在冷提取装置中，在真空条件下，试样用石油醚脱脂3次，每次用石油醚30ml,每次洗涤后抽吸干燥4.7碱消煮将残渣定量转移至酸消煮用的同一烧杯中。加150ml氢氧化钾溶液，尽快使其沸腾，保持沸腾状态30min1min，在沸腾期间用以适当的冷却装置使溶液体积保持恒定。4.8第二次过滤 烧杯内容物通过滤埚过滤，滤埚内铺有一层滤器辅料，其厚度约为滤埚高度的五分之一，上盖一筛板以防溅起。潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共 页 第 页饲料中粗纤维的测定GB/T6434-2006第1版第0次修改残渣用热水洗至中性。残渣在真空条件下，用丙酮洗涤3次，每次用丙酮30ml,每次干燥后抽吸干燥残渣。4.9干燥 将滤埚置于灰化皿中，灰化皿及其内容物在130干燥箱中至少干燥2小时，再灰化或冷却过程中，滤埚的烧结滤板可能有些部分变得松散，从而可能导致分析结果错误，因此将滤埚置于灰化皿中。滤埚和灰化皿在干燥器中冷却。从干燥器中取出后，立即对滤埚和灰化皿进行称量（m2），准确至1mg.4.10灰化将滤和埚灰化皿置于马福炉中，其内容物在50025下灰化，直至冷却后连续两次称量的差值不超过2mg.每次灰化后，让滤埚和灰化皿初步冷却，在尚温热时置于干燥器中，使其完全冷却，然后称量（m3）准确至0.1mg。9.11空白测定用大约相同数量的滤器辅料，按4.4-4.10进行空白测定，但不加试样。灰化4.10引起的质量损失不应超过2mg.计算试样中粗纤维的含量(X)以克每千克（g/kg）表示，按下式计算： X=m2-m3m1 式中：m1试样的质量，单位为克(g) m2灰化盘、滤埚以及在130干燥后获得残渣（4.9）的质量单位为毫克。 m灰化盘、滤埚以及在50025灰化后获得的残渣4.10的质量，单位为毫克。潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共 页 第 页饲料中水溶性氯化物的测定GB/T6439-2007第1版第0次修改1原理：试样中的氯离子溶解于水溶液中，如果试样含有有机物质。需将溶液澄清，然后用硝酸稍加酸化，并加入硝酸银标准溶液使氯化物生成氯化银沉淀，过量的硝酸银溶液用硫氰酸铵或硫氰酸钾标准溶液滴定。2仪器： 分析天平：感量0.0001g；电炉：1000W；移液管：10ml，20ml；刻度吸管：10ml，5ml；滴定管：酸式，50ml；三角烧瓶：250ml。3试 剂本方法中用水为蒸馏水，使用试剂除特殊规定外均为分析纯。65%硝酸溶液：取650ml浓硝酸加入350ml水中，摇匀，放入棕色试剂瓶中。0.1N氯化钠标液：基准及氯化钠于500灼烧1小时，干燥器中冷却保存，称取5.8454g溶解于水中，转入1000ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。0.05N硝酸银标液：称取8.454g硝酸银溶于1000ml水中，摇匀，贮于棕色试剂瓶中。标定：取25.0ml0.1N氯化钠标液，加10%铬酸钾指示剂，用已配的0.05N硝酸银滴定，终点由黄色变砖红色且1分钟不褪色，消耗的硝酸银体积为VAgNO3。 NAgNO3=0.125.0/VAgNO3硫酸铁铵指示剂：称80g硫酸铁铵溶于1000ml水中，摇匀，贮于棕色试剂瓶中。0.1N硫氰酸铵标液：称取7.613g硫氰酸铵溶于1000ml水中，摇匀，贮于棕色试剂瓶中。标定：取5.0ml0.05N硝酸银标液，加入10ml65%硝酸，加热至沸，冷却后，加入50ml水，再加2.5ml硫酸铁铵指示剂，用0.1N硫氰酸铵滴定，终点为橘红色，所消耗的体积为V。 N=NAgNO35.0/V4操作步骤精称样品1g，放入250ml三角瓶中，加入10.0ml0.05N硝酸银标液，摇匀，再加入10ml65%硝酸，加热至沸，冷却后，加入50ml水，再加2.5ml硫酸铁铵指示剂，用0.1N硫氰酸铵滴定，终点为橘红色，所消耗的体积为V。同时做空白。潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共 页 第 页饲料中水溶性氯化物的测定GB/T6439-2007第1版第0次修改5结果计算氯化钠（%）=（V-V）58.448N/（W1000）100%式中：V空白所消耗的硫氰酸铵标液体积，ml；V试样所消耗的硫氰酸铵标液的体积，ml； 58.448氯化钠的克当量数； N硫氰酸铵标液浓度，N； W试样重量，g。潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共 页 第 页饲料中维生素B2的测定GB/T14701-2002第1版第0次修改1. 原理试样中维生素B2经酸性提取液在80100水浴煮沸提取后，将过滤离心后的试样溶液注入高效液相色谱仪反相色谱系统中进行分离，用紫外（或二级管矩阵检测器）检测，外标法计算维生素B1的含量。2. 试剂和溶液除特殊说明外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水，色谱用水为去离子水，符合GB/T6682中一级用水规定。2.1 乙二胺四乙酸二钠（EDTA）：优级纯2.2 庚烷磺酸钠：优级纯2.3 冰乙酸：优级纯2.4 三乙胺：色谱纯2.5 甲醇：色谱纯2.6 提取液在已装入约700ml去离子水的1000ml容量瓶中，加入50mgEDTA待全部溶解后，加入25ml冰乙酸、5ml三乙胺，用去离子水定容至刻度摇匀。2.7 流动相 在已装入约700ml去离子水的1000ml容量瓶中，加入50mgEDTA精确至0.001g，1.1g庚烷磺酸钠精确至0.001g，待全部溶解后加入25ml冰乙酸、5ml三乙胺，用去离子水定容至刻度摇匀。用冰乙酸、三乙胺调节该溶液PH至3.400.02过0.45m滤膜，取860ml上述溶液与140ml甲醇混合，超声脱气，待用2.8 维生素B2标准储备液：准确称取维生素B20.0100g于200ml棕色容量瓶中，加1ml冰乙酸在沸水浴80100煮沸30min，待冷至室温后，用去离子水定容至刻度。此溶液浓度为50g/ml，冰箱4保存，保存期为6个月。2.9 维生素B2标准工作液：准确称取5.0ml维生素B2标准储备液于50ml棕色容量瓶中，用流动相定容至刻度。该标准工作液浓度为5g/ml，待上机。3. 仪器和设备3.1 PH计（精确至0.01）3.2 恒温水浴，0100。3.3高效液相色谱仪，带紫外可调波长检测器（或二级管矩阵检测器）。4.测定步骤4.1试样溶液的制备称取维生素预混合饲料0.25g0.5g，精确至0.0001g，复合预混合饲料1g3g，精确至0.001g，置于100ml的棕色容量瓶中，加入三分之二体积的提取液，在超声波提取器中超声提取20min，待温度降至室温后用提取液定容至刻度，过滤，滤液过0.45m滤膜。4.2上机测定4.2.1色谱条件潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共 页 第 页饲料中维生素B2的测定GB/T14701-2002第1版第0次修改 色谱柱：，长150mm,内径3.9mm,不锈钢柱 固定相：C18型柱，粒度4m 流速：0.80ml/min 温度：2528 进样量：10l 检测波长：单维B2：267 nm 检测器：带紫外可调波长检测器（或二级管矩阵检测器） 保留时间：约10 min5.结果计算试样中维生素B2的含量，按式计算：PiVciVsi Wi- PstimVi式中： Wi试样中维生素B2的含量，单位为毫克每千克（mg/kg） m试样质量，单位为克g Vi试样溶液进样体积，单位为微升（l）Pi试样溶液峰面积值ci标准溶液浓度，单位为微克每毫升（g/ml）Vsi标准溶液进样体积，单位为微升（l）Psli标准溶液峰面积平均值。潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共 页 第 页饲料中维生素B6的测定GB/T14702-2002第1版第0次修改1. 原理试样中维生素B6经酸性提取液超声提取后，注入高效液相色谱仪反相色谱系统中进行分离，用紫外（或二级管矩阵检测器）检测，外标法计算维生素B6的含量2. 试剂和溶液除特殊说明外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水，色谱用水为去离子水，符合GB/T6682中一级用水规定。2.1 乙二胺四乙酸二钠（EDTA）：优级纯2.2 庚烷磺酸钠：优级纯2.3 冰乙酸：优级纯2.4 三乙胺：色谱纯2.5 甲醇：色谱纯2.6 盐酸溶液：c=0.1mol/L2.7提取液在已装入约700ml去离子水的1000ml容量瓶中，加入50mgEDTA待全部溶解后，加入25ml冰乙酸、5ml三乙胺，用去离子水定容至刻度摇匀。取860ml上述溶液与140ml甲醇混合即得。2.8流动相 在已装入约700ml去离子水的1000ml容量瓶中，加入50mgEDTA精确至0.001g，1.1g庚烷磺酸钠精确至0.001g，待全部溶解后加入25ml冰乙酸、5ml三乙胺，用去离子水定容至刻度摇匀。用冰乙酸、三乙胺调节该溶液PH至3.400.02过0.45m滤膜，取860ml上述溶液与140ml甲醇混合，超声脱气，待用2.9维生素B6标准储备液：准确称取维生素B6 0.0500g于100ml棕色容量瓶中，加盐酸溶液约三分之二体积，超声15min，待全部溶解后，用盐酸溶液定容至刻度。此溶液浓度为500g/ml，置4冰箱保存，保存期3个月。2.10 维生素B6标准工作液A：准确吸取2.00ml维生素B6标准储备液于50ml棕色容量瓶中，用流动相定容至刻度，该标准工作液浓度为20g/ml。2.11维生素B6标准工作液B：准确吸取5.00ml维生素B6标准工作液A于50ml棕色容量瓶中，用流动相定容至刻度，该标准工作液浓度为2.0g/ml。3 仪器和设备3.3 PH计3.4 超声波提取器3.3高效液相色谱仪，带紫外可调波长检测器（或二级管矩阵检测器）。4.测定步骤4.1试样溶液的制备潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共 页 第 页饲料中维生素B6的测定GB/T14701-2002第1版第0次修改 称取维生素预混合饲料0.25g0.5g，精确至0.0001g，复合预混合饲料1g3g，精确至0.001g，置于100ml的棕色容量瓶中，加入三分之二体积的提取液，在超声波提取器中超声提取20min，待温度降至室温后用提取液定容至刻度，过滤，滤液过0.45m滤膜。4.2上机测定4.2.1色谱条件 色谱柱：，长150mm,内径3.9mm,不锈钢柱 固定相：C18型柱，粒度4m 流速：0.80ml/min 温度：2528 进样量：10l 检测波长：280 nm 检测器：带紫外可调波长检测器（或二级管矩阵检测器） 保留时间：4min5 min5.结果计算试样中维生素B6的含量，按式计算：PiVciVst Wi- PstimVi式中： Wi试样中维生素B6的含量，单位为毫克每千克（mg/kg） m试样质量，单位为克g Vi试样溶液进样体积，单位为微升（l）Pi试样溶液峰面积值ci标准溶液浓度，单位为微克每毫升（g/ml）Vst标准溶液进样体积，单位为微升（l）Psti标准溶液峰面积平均值。潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共 页 第 页饲料中维生素D3的测定GB/T17818-2010第1版第0次修改1.原理：维生素预混料中的维生素D3用甲醇溶液提取，试液注入高效液相色谱柱，在264nm处测定，外标法计算维生素D3含量。4. 试剂和溶液本标准所用试剂均为分析纯，水符合GB/T6682中三级用水规定，色谱用水符合GB/T6682中一级用水规定。4.1 甲醇：色谱纯。4.2 维生素D3标准品：维生素D3含量99.0。4.3 维生素D3标准储备液：称取维生素D3标准品10mg（精确至0.00001g），于100ml橧色容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，混匀，4保存。该储备液浓度为1.0mg/ml4.4 维生素D3标准工作液：准确吸取维生素D3标准储备液1.0ml于100ml棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀，配制工作液浓度为10g/ml。5. 仪器和设备3.1超声波水浴3.2分析天平，感量0.0001g3.3分析天平，感量0.00001g3.4超纯水器。3.5高效液相色谱仪，带紫外可调波长检测器（或二级管矩阵检测器）。4.测定步骤4.1试样溶液的制备 称取试样1g，精确至0.0001g，置于100ml的棕色容量瓶中，加入约80ml的甲醇，瓶塞不要拧紧，于65超声波水浴中超声提取30min，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，充分摇匀。如果试样中维生素A乙酸酯的标示量低于10IU/kg，则将溶液过0.45m滤膜，进样测定，否则需将溶液用甲醇进一步稀释，使维生素D3的进样浓度与维生素D3标准工作液浓度接近。4.2上机测定。4.2.1色谱条件 色谱柱：C18型柱，长150mm,内径4.6mm,粒度5m（或性能类似的分析柱） 流动相：甲醇+水（98+2） 流速：1.0ml/min 温度：室温 进样量：20l 检测波长：326nm潍坊安食捷检测服务有限公司饲料作业文件文件编号共 页 第 页饲料中维生素D3的测定GB/T17818-2010第1版第0次修改5.结果计算 试样中维生素D3的含量，以质量分数X2计，数值以国际单位每千克（IU/kg）或毫克每千克（mg/kg）表示。按式计算：P3Vp2 X-1.071000 P4m2/f2 式中：P3试样溶液峰面积值 V试样溶液总稀释体积，单位为毫升ml P2维生素D3标准工作液浓度，单位为微克每毫升g/ml P4维生素D3标准工作液峰面积值 m2试样质量，单位为克g f2转换系数，1国际单位IU相当于0.025g维生素D3 1.07提取时生成维生素D3的校正因子潍坊安食捷检测