实验二 凝集反应.ppt

主讲教师 张秋玉 实验二凝集反应 基础医学院免疫学院 抗原或抗体的检测方法 1 1经典的血清学反应 1 2现代的抗原抗体反应 现代抗原抗体反应用标记技术代替传统的肉眼可见反应 其特异性 敏感性均增加 且可以定性 定量甚至定位 缺点是需特殊精密检测仪 凝集反应的定义及基本类型 1 直接凝集试验颗粒性Ag与相应Ab的反应玻片法 如血型的鉴定 细菌菌种的鉴定试管法 肥达氏反应2 间接凝集试验 可溶性Ag 载体 致敏颗粒 与相应Ab的反应3 间接凝集抑制试验可溶性Ag与相应Ab作用后 再与致敏颗粒反应4 反相间接凝集试验 可溶性Ab 载体 致敏颗粒 与相应Ag的反应 试管凝集反应示意图 肥达氏反应 用已知伤寒菌的H 鞭毛 和O 菌体 以及甲型 A 与乙型 B 副伤寒沙门氏菌的标准液与病人血清做凝集试验 用于伤寒副伤寒的辅助诊断或用于流行病学调查的免疫凝集实验 人的红细胞表面有20几种血型抗原系统ABO血型系统是第一个被描述的红细胞血型系统 由Landsteiner于1901年提出 血型鉴定的原理 根据红细胞上所含抗原种类将人类血型分为如下血型 ABO血型系统中有两种抗原 分别称为A抗原和B抗原 均存在于红细胞膜的外表面 1 抗原本质 血型抗原是镶嵌于红细胞膜上的糖蛋白与糖脂 ABO抗原特异性是在H抗原基础上形成的 2 抗体本质 血浆中存在两种相应的抗体即抗A抗体和抗B抗体 ABO血型系统的抗体为天然抗体 主要为IgM 不能通过胎盘 如果交叉配血试验的两侧都没有凝集反应 为配血相合 可以进行输血 如果主侧有凝集反应 则为配血不合 不能输血 如果主侧不引起凝集反应 而次侧有凝集反应 只能在应急情况下输血 输血时不宜太快太多 300ml 并密切观察 如发生输血反应 应立即停止输注 载玻片1块 每人 用完各自用水冲洗净置消毒缸三棱针1根 每人用后弃垃圾斗棉签根 每人 先取再取1 用后弃垃圾斗牙签1根 每人 两端使用 用后弃垃圾斗碘伏生理盐水试管试管架标记笔 实验材料 操作步骤 i 取血 搓揉左手无名指的指腹 碘伏消毒 用三棱针刺1 2滴血 将无名指的指腹封住盛有盐水的试管管口 用倾倒法将血滴洗入盐水中并混匀形成1 的血球悬液 ii 鉴定 取洁净玻片一块 用标记笔在中央划线分区 标明 A B 区 在 A B 区分别滴加抗A 抗B血清各1滴 用毛细吸管吸取待检的血球悬液滴入抗A 抗B血清中 用牙签两端分别拌匀 将玻片平持手中 前后左右转动使之充分混匀 室温放置10 15分钟后观察结果 注意事项 取血时 注意无菌操作 避免HBsAg的交叉污染 HBsAg携带者 刺血时 尽可能一次性成功 用力适当 让血自然流出或搓揉后流出为佳 勿强行挤压 鉴定时 滴1滴抗血清及血球悬液即可 多则两边易混 牙签两头不可混用 O型血无凝集现象 无须反复检测 结果判断 ABO血型的遗传规律 父母血型分别为A型 B型 他们子女的血型可能是何种 父母分别为A型和O型 子女有无可能是B型 思考 三 E 花结形成实验 原理人的外周血T淋巴细胞上特有能与绵羊红细胞结合的受体 称E受体 在一定实验条件下 绵羊红细胞与该受体结合形成以T细胞为中心 四周绕以绵羊红细胞的玫瑰花团 故称E花结实验 E受体与CD2分子 LFA 2 淋巴细胞功能相关抗原 为同一物质 花结分类 Ea RFC 效应T细胞 正常值为15 35 E RFC 总和 正常值为60