白藜芦醇抗炎作用机制的初步研究.doc

白藜芦醇抗炎作用机制的初步研究白藜芦醇抗炎作用机制的初步研究刘芳,曲极冰,李红,杨世杰(吉林大学基础医学院药理学教研室,长春130021)摘要:目的观察白藜芦醇的抗炎作用并对其抗炎机制进行初步探讨.方法采用切除双侧肾上腺大鼠足肿胀,冰醋酸致大鼠胸膜炎及角叉菜胶致大鼠气囊炎3种炎症模型,观察白藜芦醇对不同炎症模型的抗炎作用,并测量白细胞数量,蛋白质含量,前列腺素E,(PGVa),一氧化氮(NO),超氧化物歧化酶(S()D),丙二醛(MDA),超氧阴离子()含量变化.结果白藜芦醇高,中剂量组可减轻去双侧肾上腺大鼠足肿胀程度;减少了冰醋酸致大鼠胸膜炎渗出液量和蛋白质含量,使血清N0含量降低.SOD活性增强;抑制了角叉菜胶致大鼠气囊炎模型中白细胞游出及蛋白质渗出,降低PGE2,N0,MDA,生成量.结论白藜芦醇具有明显的抗炎作用,其抗炎作用不依赖于肾上腺的存在,可能与其降低血管通透性,抑制白细胞游出,抑制PGFe,NO等炎症介质产生及增强清除氧自由基,抗脂质过氧化能力有关.关键词:白藜芦醇;抗炎;前列腺素;一氧化氮中图分类号:R965文献标识码:A文章编号:10012494(2006)15113804StudyonAnti-InflammatoryMechanismsofResveratrolLIUFang,QUji-bing,LIHong,YANGShi-jie(DepartmentofPharmacology,SchoolofMedicine,dinUniversity-,Changchun130021,Ch/na)ABSTRACr:OBJECTIVETostudytheanti-inflammatorymechanismsofresvemtm1.ME3HODSHindpawedemainducedbyeggal-buminwasmeasuredinbilaterallyadrenalectomizedrats.echemotaxisofleucocytes,thevolumeofexudate,theactivityofSODandthecontentofNOinSlMmwererespectivelymeasuredinratswithacutepleuritisinducedbytheinjectionofglacialaceticacid.1enumberofleucocytesandthecontentsuchastotalprotein,Pc,NO,MDA,andwereexaminedintheexudateofratswithacuteair-pouchsynovitisinducedbyscinjectionof25nag.kg_.carrageenan.RF_.SLTSResveratrolhasasignificantlysuppressiveeffectonhindpawedemaina-drenalectomizedratinducedbyeggalbumin.Resveratrolsignificantlyinhibitedtheleucocytesandexudatesinfiltration,decreasedtheproductionofNOinserum,andelevated山eactivityofSODinpleuritisratsSlMm,Furthermore.iLsveFatrolreducedthemigrationofleucocytesandtheexudationofprotein,andinhibitedtheproductionofPGFe,NO,MDAand.CONCLUSIONResveratrolhasanantiinflammatoryef-feet,whichdoesnotdependontheexistenceofadrenalglands,Itmayberelatedtoinhibitingtheproductionofinflammatorymediatorsandfreeradicals.KEYW0RDS:l,L:svemtml;anti.inflammafion;PcE);NO白藜芦醇(resvemtrol,Res)是植物界分布较广的羟基二苯乙烯类化合物,1940年首次从毛叶藜芦的根部分离获得.近几十年来,发现白藜芦醇存在于21个科,31个属的72种种子植物中,其中在新鲜葡萄皮中的含量最高,为50100t-tg?g_.白藜芦醇最初作为一种葡萄类植物在受到真菌感染,紫外线照射等不利条件作用时产生的抗逆物质而被人认识,现已发现白藜芦醇具有多种药理活性,如抗肿瘤,降血压,抗血小板聚集,抗细菌和真菌感染,影响胃酸分泌等_1j.国内外对白藜芦醇抗炎药理作用已有报道_24.,但主要限于体外研究,本教研室以往研究也已证实了白藜芦醇具有抗炎和镇痛的药理作用_5j,本实验将进一步对其体内抗炎作用进行系统研究并初步探讨其抗炎机制,以期为研究开发白藜芦醇提供实验依据.1材料与方法1.1动物健康Wistar大鼠,清洁级吉林大学基础医学院动物实验中心,合格证号:SCXK(吉)20030001.1.2药品与试剂白藜芦醇(吉林大学基础医学院分析化学实验室),从蓼科植物虎杖的干燥根茎中提取,纯度95.0%;角叉菜胶(carrageenan,Car,Sigma公司);醋酸泼尼松片(天津太平洋制药有限公司,批号:作者简介:刘芳,女,硕士研究生通讯作者:杨世杰,男,教授,博士生导师Tel:(0431)5619483E-mail:jcya,1138Ol/nPharmJ,2006August,Vol,41No.15国药学杂志2OO6年8月第霸030801);注射用青霉素钠(华北制药股份有限公司,组,模型组,阳性对照醋酸泼尼松片(4.2nag.kg)批号:U0303024);SOD检测试剂盒(批号:组,白藜芦醇高剂量组(30mg?kg一),中剂量组(1020031105);N0检测试剂盒(批号:20031015);超氧阴mg?kg),低剂量组(3mg?kg).除空白对照组和离子自由基检测试剂盒(批号:2040518);MDA测定模型组给予等体积的5g?L一羧甲基纤维素钠外,每试剂盒(批号:20040506,南京建成生物工程研究组动物均连续ig给药7d.于末次ig后30min,用所);总蛋白液体试剂盒(批号:261301,中生北控生乙醚轻度麻醉后以乙醇消毒右侧胸壁,于锁骨中线物科技股份有限公司);其他试剂均为分析纯.第34肋问(前胸右下角)进针注入质量分数为1.3仪器2%冰醋酸2mL?kg一,空白对照组注射等体积的生LDZ52离心机(北京医用离心机厂);6010可理盐水,致炎后2h各组动物ig给予相应药物或羧见.紫外分光光度计(安捷伦上海分析仪器厂);GF一甲基纤维素钠.6h后再次麻醉,腹主动脉取血后离D200半自动生化分析仪(山东高密彩虹分析仪器有心取血清,一20保存待测SOD,NO含量.打开胸限公司).腔,用玻璃吸管将胸膜腔内全部渗出液吸出计量,再1.4买验方法以生理盐水2mL冲洗胸腔,冲洗液与渗出液合并,1.4.1白藜芦醇对去肾上腺大鼠足肿胀的影响吸取100L做白细胞记数.取大鼠40只,旱舍各半,10%水合氯醛麻醉后,在1-4.3白藜芦醇对角叉菜胶致大鼠气囊炎的影无菌条件下,于背部中线近肾水平切开皮肤,剥离响取舍大鼠60只,分组及给药均同1.4.2.皮下筋膜,在背部肌群间作一纵形切口,可见肾上于给药当天在大鼠背部肩胛区皮下注入空气l0腺,并摘除腺体,同法摘除对侧肾上腺后,依次缝合mL,第3天及第6天再次注入空气各5mL,维持气肌层和皮肤.术后每天im青霉素G钠盐(60万u?囊的膨胀度,并在末次给药后在大鼠背部气囊内注kg)1次抗感染,共3d,并以糖盐水代替自来水饲人Car(25mg?kg)诱发炎症,空白组注入相应体积养.按体重随机分为5组,即模型组,白藜芦醇高生理盐水,6h后再给药1次,于致炎12h后处死动剂量组(30mg?kg),中剂量组(10mg?kg),低剂物,气囊内注入冰生理盐水(含肝素50u?lIJ一1)4量组(3nagkg),阳性对照阿司匹林组(250mg?lIJ进行灌洗,收集灌洗液,进行白细胞记数,测定总kg).术后第3天开始ig给药,每天1次,连续5蛋白,PGE2,NO,MDA,的含量.d,于末次给药前测其右后足周长,给药后0.5h,每1.5统计方法只鼠于足跖皮下注入体积分数为10%新鲜配制的数据以牙s表示,两组问比较采用t检验.鸡蛋清0.1lIJ致炎,同时每只ig给予5lIJ水行水2结果负荷.在致炎后0.5,1,3,4,5,6h时测其右后足周2.1白藜芦醇对去肾上腺大鼠足肿胀的影响长,计算肿胀度(致炎后各时间点右后足周长与致白藜芦醇高剂量组在致炎后0.54h,中剂量炎前右后足周长之差).组在致炎后14h足肿胀度与空白对照组比较有1-4.2白藜芦醇对冰醋酸致大鼠胸膜炎的影响明显差异(P<0.05,P<0.01),可见白藜芦醇对去取大鼠48只,舍,按体重随机分为6组:空白对照肾上腺大鼠足肿胀有明显的抗炎作用,结果见表1.表1白藜芦醇对鸡蛋清致去肾上腺大鼠足肿胀度的影响.:8,Tab1Effectofresveratrolonthedegreeofhindpawedemainducedbyeggalbumininbilaterallyadrenalectomizedrals.n=8.贾s注:与模型组比,1)p<0.05,2)p<0.0lte:P<O.05,2)P<0,01,withlddgroup2.2白藜芦醇对冰醋酸致大鼠胸膜炎渗出液量和炎渗液量和白细胞数明显升高(P<0.O1);醋酸泼白细胞数的影响尼松和白藜芦醇高,中剂量组均能减少冰醋酸致大与空白组比较,冰醋酸致炎后,模型组大鼠胸膜鼠胸膜炎渗出液量和白细胞总数(P<0.01.P<中国药学杂志瑚6年8月第4115Ch/aPharmJ,2006血皤,Vo1.41No.15?1139?O.05),结果见表2.表2白藜芦醇对冰醋酸致大鼠胸膜炎渗出液量和白细胞数的影响.n:8,sTab2EffectofresveratrolonthenumberofleucocytesinexudatemadthevolUmeoftheexudaleofpleuri!israts.n=8.s注:与对照组比,3)P<0.O1;与模型组比,P<0.Ol,lJP<005Note:3)P<001,con1fwithcontrolgrottp;)P<0.01,1)P<0.05,comparedwithmodelgro2.3白藜芦醇对冰醋酸致大鼠胸膜炎模型血清中SOD活性和NO含量的影响与空白组比较,冰醋酸致炎后,模型组大鼠血清中SOD活力降低,NO含量升高(P<0.01);醋酸泼尼松和白藜芦醇高,中剂量组能降低胸膜炎大鼠血清中NO含量(P<0.01,P<0.05),醋酸泼尼松和白藜芦醇高剂量组可恢复SOD活力(P<O.05),结果见表3.表3白藜芦醇对冰醋酸致大鼠胸膜炎模型血清中SOD活性和NO含量的影响.n:8,xsTab3EffectofresveratrolonthecontentofNOandtheactivits,ofSODinthesel-tlmofpleuritisrats.n:8,sGroup里:!l:一Control一17.592.2588.872.52Mtxtel一26.474483)49.5610.Ol3)Prednison4.220.972.082)60.199.761)Resvemtro|3019.631.572)7061l89I11021.883.321)55.38845322.913.4949671112注:与对照组比,)P<O.O】;-q模型组比.2P<O.01.|D<O.05Note:3)P<0.01,删withcontro|gro;)P<0.01I)p<O,m叫)awithmode!group2.4白藜芦醇对角叉菜胶致大鼠气囊炎灌洗液中白细胞数和蛋白质含量的影响与空白组比较,car致炎后,模型组大鼠气囊灌洗液中白细胞数和蛋白质含量明显升高(P<O.O1);醋酸泼尼松和白藜芦醇高,中剂量组均能降低灌洗液中白细胞数和蛋白质含量(P<O.O1,P<0.05),结果见表4.表4白藜芦醇对角叉菜胶致大鼠气囊炎灌洗液中白细胞数和蛋白质含量的影响.n:10,sTab4EffectofresvemtrolonthenumberofWBCandthecontentofpmleinintheexudateofacuteair-pouchsynovifisratsinducedbycarrageenan.r/=10.丘5注:与x,tN组比,)P<0O1;与模型组比,JP<0,O1,JP<0.05Note:)P<O.O1,cpawithcont.|gup;2)P<0.01,1)P<0.05,cpaI硝withmodelgrmlp2.5白藜芦醇对角叉菜胶致大鼠气囊炎灌洗液中PGE:,NO,MDA,oj含量的影响与空白组比较,Car致炎后,模型组大鼠气囊灌洗液中PGE2,NO,MDA,Oi含量明显升高(P<0.O1);白藜芦醇高,中剂量组均能降低灌洗液中PGE2,NO,MDA,oj含量,结果见表5.3讨论炎症是在致炎因素作用下,由炎症细胞及其释放的炎症介质参与引起的一系列病理生理过程.在炎症反应中,致炎因素引起毛细血管扩张,通透性增加,中性粒细胞趋化,游走至炎症反应灶,释放炎症介质参与炎症反应.文献j报道,白藜芦醇可明显抑制二甲苯致小鼠耳肿胀,鸡蛋清致大鼠足肿胀和大鼠棉球肉芽肿,本研究结果显示,白藜芦醇可减少大鼠胸膜炎和气囊炎的渗出液量,抑制白细胞浸润和蛋白质的渗出,说明其能明显降低血管通透性而表5白藜芦醇对角叉菜胶致大鼠气囊炎灌洗液中PG,NO,MDA,0i含量的影响.n:10,sTl曲5EofresVeratrol0nthec0ntentofPGE2,NO,MDAandintheexudateofacuteair-pouchsy|l0vitis胁inducedbycam窘ee呦=10,SNote:3)P<0.01,c(耵withCOntrolgroup;2)P<0.01,I)P<0.05,c0f珥】a出mx|el删p1140ChinPharrnJ,2006August,Vo1.41No.15中国药学杂志206石焉起到抗炎作用,对去.肾上腺大鼠足肿胀仍有抑制作用,说明其抗炎作用不依赖于.肾上腺的存在(与下丘脑一垂体一.肾上腺轴的关系有待于进一步探讨),可能与抑制炎症介质的产生有关.在炎症过程中,炎症部位的中性粒细胞活化,发生呼吸暴发产生等活性氧自由基,这些氧自由基不仅能增加血管通透性,而且攻击生物膜磷脂中的多聚不饱和脂肪酸,引起脂质过氧化,造成生物膜损伤,尤其脂质过氧化产物MDA毒性更强,能进一步加重炎症反应,体内自由基清除剂如SOD可通过清除自由基,抑制脂质过氧化反应.在本实验中,白藜芦醇可减少大鼠气囊炎()主和MDA的生成,恢复大鼠胸膜炎血清中SOD的活力,这与文献7-8J报道的白藜芦醇在体外抑制大鼠腹腔巨噬细胞产生0i和H2O2等氧自由基作用相一致,提示减少炎症部位自由基生成,抑制脂质过氧化反应可能是白藜芦醇抗炎作用机制之一.前列腺素是炎症过程重要的炎症介质,可引起血管扩张,并可加强组胺和缓激肽升高血管通透性的作用.Car注入大鼠气囊内,主要通过诱导PGE的释放引起炎症,而白藜芦醇能降低此模型中PGE2含量,说明抑制PGE2生成是其抗炎作用的又一机制.NO是一种重要的信使物质,同时也是一种重要的炎症介质,在炎症反应的许多环节发挥复杂的调节作用,其促炎症反应包括促进血管扩张,增强血管通透性,促进败血症的发展,激活前列腺素合成酶等,研究认为急慢性炎症的发生均与N0有关系9_0.本实验结果表明,白藜芦醇可降低大鼠气囊炎中NO含量,因此抑制N0的生成可能是白藜芦醇抗炎作用机制之一.REFERECES1FREMONTL.Biolcaleffex,tsofresveratrolJ.Sci,2000,66(8):663673.12JANGM,CAIL,UDEANIG0,eta1.Cancerchemopreventiveac-fixityofresveratml,anaturalproductderivedfromgrapeslJJ.一ertx.1997,275(5297):218-220.;3SUBBARAMAIAllR,DANNENBERGAJ.Resveratmlinhibitstheexpressionofcyclcoxygenase一2inmalnrnarvepithelialceilslJ.PbnrmBiol,1998,36(supp1):3543.4SHINNH,RYUSY,LEEH,et01.1nhibitoryeffectofhydroxystilbenesoncyclooxygenasefromsheepseminalvesicleslJJ.P/antaMed.1998,64:283284.15JXIAOHJ,HUF,uH,eto1.Studyonantiinflammatoryandanalgesicactivityofresveeratml【j.JJirdinUniv(MedEd)(吉林大学医学版),2003,29(5):l-4.16JRENJ,DANGYL,uSY.Studiesonthemechanismofanti-in-flammatoryactionoftolalglucosidesofAcanthopanaxgiraldiinalTi1SJ.PharrmwolClinChinMaterMed(中药药理与临床),2002,l8(6):13一l4.17JJANGDS,KANGBS,RYUSY,eta/.InhibitoryeffectofFesver-atmlanalogsonunionizedzymo-inducedoxygenradicalproductionIJJBiochemPharmacol,1999,57:705712.18JJAVIERM,JUANJM.Effectofresveratrol,anaturalpolyphenoliccompound,onreactiveoxygenspeciesandpmstaglandinproductionIJ1.B/ochemPharmacol,2000,59:865,870.19IAu=NTIA,IANAROA,MONCADAS,et01.ModulationofacuteantiinflammationbyendogenousnitricoxidelJJ.EurJPhannal,l992,2l1:177.182.10IUVONET,CARNUCCIOR.DIR0SAM.Modulationofgranulolllafonnationbyendogenousnitric0xidelJJ.EurJPbxtrmacoZ,1994,265(1-2):89.92.(收稿日期:2005.0106)中草药杂志21307年征订中草药杂志是由中国药学会和天津药物研究院共同主办的国家级期刊.主要报道中草药化学成分;药剂工艺,生药炮制,产品质量,检验方法;药理实验和临床观察;药用动,植物的饲养,栽培,药材资源调查等方面的研究论文,并辟有中药现代化论坛