抗M2自身抗体

抗线粒体M2抗体ELISA系统化检测方法的建立及临床意义探讨 首都医科大学附属北京佑安医院闫惠平研究员 教授yhp503 背景介绍 自身免疫性疾病 autoimmunedisease AID 是严重影响人类健康的疾病之一 可累及人体的各系统 组织和器官 涉及临床各专业学科 自身抗体对疾病诊断 鉴别诊断有重要价值 自身抗体主要检测方法 间接免疫荧光法 ELISA 免疫印迹等多种方法 首都医科大学附属北京佑安医院 目前自身抗体检测普遍问题 间接免疫荧光法 IFA 操作技术水平要求较高 仪器试剂要好 有一定局限性 ELISA法 多以手工操作为主 全自动酶联分析仪检测技术应用不普遍 检测结果存在较大的不一致性 迫切需要解决检测的系统化和规范化问题 国产自身抗体检测ELISA试剂 上市时间较短 许多缺乏大规模临床应用质量评价 其正常参考区间以及对临床疾病诊断的灵敏度和特异性等还缺乏大规模的经临床验证的可靠数据 原发性胆汁性肝硬化PrimaryBiliaryCirrhosis PBC 多发于中年女性 慢性胆汁淤积表现 ALP和 GT升高AMA 90 95 AMA M2阳性 肝内胆小管进行性非化脓性炎症 肉芽肿性破坏 并进行性胆管消失 熊去氧胆酸可以显著改善生化指标 肝纤维化 肝硬化最终肝衰竭 首都医科大学附属北京佑安医院 抗 AMA M2对PBC具有明确的疾病诊断意义 而且具有较高的疾病特异性 问题 抗 AMA M2阳性也常见于其他肝病或干燥综合征等自身免疫性疾病 或者出现检验结果时阴时阳 给临床诊断与鉴别诊断带来困惑 原因可能有多种 临床 如HCV HBV合并自身免疫病 自身免疫现象检验 检测试剂的特异性 标准化 项目本身的参考区间是否合适等 乙肝患者的自身免疫异常表现 Cacoub etalJ Hepatol 43 764 2005 全世界4亿HBV感染者中 约20 的患者出现肝外临床症状体征 结节性多动脉炎 PAN 和膜性肾小球肾炎最严重最受关注 对190名慢性乙肝患者肝外病理体征 包括自身免疫疾病 和自身抗体的研究表明 两者的阳性率 至少一项阳性 分别达到16 和15 83例肝癌患者自身抗体检出率 组别例数自身抗体阳性ANACSSMAAMA A组6423 35 9 16 25 0 8 12 5 5 7 8 3 4 7 B组168 50 0 4 25 0 3 18 8 3 18 8 1 6 3 C组300000合计8331 37 3 20 24 1 11 13 3 8 9 6 4 4 8 A HBV肝癌 B HCV肝癌 C 其他原因肝癌HBV HCV组自身抗体检出率差异无统计学意义 赵海琳 闫惠平等 中国免疫学杂志2010 26 1127 建立抗 M2ELISA系统化检测方法 仪器 ADCELISA400流水线式全自动酶联免疫工作站试剂 抗M2型线粒体抗体检测试剂盒 上海科新生物技术股份有限公司 检测范围 25 800RU ml 阴性25RU ml 研究方法和试剂 研究内容与方法 一 全自动酶联免疫工作站系统重复性和精密度的评估 1 对阴性 弱阳性 中阳性和强阳性4种不同浓度的样品各一例进行复孔检测 重复以上检测6次 以评价该检测方法的精密度和重现性 计算每一个样品的CV值 2 设备单通道 多通道针对不同浓度样本 不同取样量的结果均一性的评价 研究内容与方法 二 不同疾病组标本的检测结果和临床意义初步评价研究对象 PBC组112例HBV组77例NC组78例合计267例 首都医科大学附属北京佑安医院 1 全自动酶联免疫工作站系统重复性和精密度的评估在6次重复检测中 分别对阴性 OD 0 032 弱阳 OD 0 389 中阳 OD 0 752 和强阳 OD 2 027 4例不同抗体浓度的样品各一份进行复孔检测 以评价该检测方法的精密度和重现性 表1 不同浓度检测样本的SD和CV值 结果 结果2 ADCELISA400设备单通道 多通道针对不同浓度样本 不同取样量的结果均一性比较 CV均 5 表明该设备的稳定性和重复性好 结果 3抗AMA M2抗体在不同疾病组检测结果和评价 3 表2 抗AMA M2抗体在不同分组中的阳性率 不同疾病组中抗AMA M2阳性浓度值的分布 高通量ELISA检测抗M2抗体对于PBC诊断的敏感性 sensitivity 为89 3 抗M2抗体对于PBC诊断的ROC曲线见图1 曲线下面积 areaundercurve AUC 为0 980 图1 抗M2抗体对于PBC诊断的ROC曲线 2 结果 4抗AMA M2手工法与ELISA仪器法的比较评价 结果 4抗AMA M2冻存与新鲜样本ELISA仪器法的比较评价 本研究的认识 国产全自动酶联免疫工作站系统重复性和精密度的评估 加样稳定性 重复性均好 组内组间差异均较小 与国产试剂配套应用与临床常规 抗AMA M2检测结果与疾病的符合率达到以往国内外的报道 全自动酶联免疫法可以达到系统化 标准化 弥补手工法的一些缺陷 本研究的认识 系统化检测使PBC与病毒性肝炎在检测数值上有了明显差异 期待有助于疾病的鉴别诊断 下一步 国产全自动酶联免疫工作站检测标准化不同试剂间同样