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第41卷 第3期 2005年9月 青 岛 大 学 医 学 院 学 报 ACTA ACADEMIAE MEDICINAE QINGDAO UNIVERSITATIS Vol 41 No 3 September 2005 收稿日期 2005201228 修订日期 2005203220 作者简介 罗 波 19762 男 在读硕士 环氧化酶22蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及意义 罗 波 张劲峰 青岛大学医学院松山医院泌尿外科 山东 青岛 266021 摘要 目的 探讨环氧化酶22 COX2 2 蛋白在膀胱移行细胞癌 TCCB 中的表达及其与肿瘤生物学行为 之间的关系 方法 采用免疫组化SP法检测120例膀胱移行细胞癌和10例正常膀胱黏膜标本COX22蛋白的 表达 结果 正常膀胱黏膜COX22呈阴性表达 在膀胱移行细胞癌G1 G2 G3级和Tis T1 T2 T4期阳性表 达率分别为40 00 61 02 93 75 和44 83 90 91 COX22的阳性率在不同组织学分级的TCCB中差异 有极显著性 2 13 96 P 0 01 在不同临床分期的TCCB中差异有极显著性 2 20 70 P 0 01 在复发组 与未复发组COX22阳性率分别为82 50 和45 00 差异有极显著性 2 15 35 P 0 01 结论 COX22 阳性表达与膀胱移行细胞癌病理分级 浸润及复发关系密切 COX22可以作为判定膀胱移行细胞癌恶性程度及复 发的参考指标 关键词 环氧化酶 膀胱肿瘤 免疫组织化学 预后 中图分类号 R737 14 文献标识码 A 文章编号 167224488 2005 0320235203 EXPRESSIONOF CYCLOOXYGENASE22 IN TRANSITIONAL CELL CARCINOMA OF THE BLADDER AND ITS SIGNIFICANCE L UO Bo Z HA N G Jin2f eng Department of Urology Songshan Hospital Qingdao University Medical College Qingdao 266021 China ABSTRACT Objective To study the expression of cyclooxygenase22 COX22 in transitional cell carcinoma of the bladder TCCB and analyze its correlation with the biological behavior of the tumor Methods The expressions of COX22 in 120 cases of TCCB and 10 cases of normal bladder Tissue were detected by streptavidin2peroxidase immunohistochemical method Results COX22 was negatively expressed in normal bladder mucosa The positive expression rates of COX22 were 40 00 61 02 and 93 75 for G1 G2and G3 44 83 and 90 91 for Tis T1and T2 T4tumors respectively The positive expressions in three groups with different histological grading in TCCB showed significant difference 2 13 96 P 0 01 and the difference showed great significance as well in two different clinical staging 2 20 70 P 0 01 The expression of COX22 in recurrence group and non2recurrence group was 82 50 and 45 00 respectively and the difference was significant 2 15 35 P 0 01 Conclu2 sion The positive expression of COX22 in TCCB is closely related to the tumor2cell grade depth of invasion and recurrence The expression of COX22 may be used as a parameter for assessing the malignancy and recurrence of TCCB KEY WORDS cyclooxygenase22 bladder neoplasms immunohistochemistry prognosis 环氧化酶22 COX2 2 作为前列腺素合成过程中 的一种限速酶 与许多肿瘤的形成和发展有关 1 3 本文采用免疫组织化学SP法检测120例膀胱移行 细胞癌石蜡标本和10例正常膀胱黏膜中COX22的 表达情况 并结合其病理分级 临床分期和随访结果 进行分析 探讨COX22在膀胱移行细胞癌中的表达 及其与肿瘤生物学行为的关系 1 材料与方法 1 1 材料选择 随机选取我院1999 2002年间初发性膀胱移 行细胞癌石蜡标本120份 120例病人中 男86 例 女34例 年龄40 85岁 平均60 7岁 临床病 理分期按UICC2TNM标准确定 其中浅表性 T is T1 肿瘤87例 浸润性 T 2 T4 肿瘤33例 病理 分级按WHO标准确定 其中 级 G 1 45 例 级 G 2 59 例 级 G 3 16 例 所选病例均获随访 其 中复发40例 10例正常膀胱组织标本取自非肿瘤 病人 标本均作5 m厚的连续组织切片2张 1张 行苏木精2伊红染色核实诊断 另1张行免疫组织化 学染色 1 2 免疫组化方法 采用免疫组化SP法 鼠抗人COX22抗体为丹 麦Dako公司产品 S2P试剂盒为北京中山生物有限 公司产品 用已知胃癌阳性切片作为阳性对照 用 PBS代替一抗作为阴性对照 具体步骤为 石蜡切 片经脱蜡 梯度乙醇水化后 置10 mmol L柠檬酸 缓冲液 p H 6 0 中 微波修复抗原3 min 凉至室 236青 岛 大 学 医 学 院 学 报41卷 温 体积分数0 03的H2O2甲醇封闭15 min以阻 断内源性过氧化物酶 正常羊血清封闭非特异性抗 原15 min后 倾去血清 滴加1 100稀释的COX22 抗体 4 放置过夜 PBS洗3次 每次3 min 滴加 生物素化二抗 37 放置30 min PBS洗3次 每 次3 min 滴加S2P 37 放置30 min DAB显色 苏木精复染 中性树脂封片 1 3 结果判定 COX22阳性表达的判定标准 胞质和核膜染为 棕黄色或棕褐色的细胞为染色阳性细胞 连续观察 5个高倍视野 各计数100个细胞 阳性细胞占肿瘤 细胞数 60 为强 阳性 7 4 1 4 统计学处理 采用 2 检验 Ridit分析进行统计学处理 2 结 果 2 1 膀胱癌组织中COX22蛋白的表达 本组10例正常膀胱组织中COX22蛋白的表达 均为阴性 120例膀胱移行细胞癌组织中69例 COX22表达阳性 57 50 主要着色部位为癌细 胞胞浆 少数为核膜着色 弥漫分布 有较大的异质 性 偶可见肿瘤血管内皮细胞有COX22染色 2 2 COX22表达与膀胱移行细胞癌病理分级 临 床分期的关系 正常膀胱黏膜COX22呈阴性表达 在膀胱移行 细胞癌G1 G2 G3级阳性表达率差别有极显著性 2 13 96 P 0 01 在浅表性膀胱癌 浸润性膀 胱癌其阳性表达率差别亦有极显著性 2 20 70 P 0 01 COX22蛋白的表达随着膀胱移行细胞癌 的病理分级 临床分期的增高而增加 见表1 表1 COX22表达与膀胱移行细胞癌病理分级 肿瘤浸 润深度的关系 分级与分期n COX22 67 阳性率 Ridit分析 R s95 可信限 000 369 2 0 031 80 305 6 0 432 8 G259236141661 020 526 8 0 036 10 454 6 0 599 0 G3161131193 750 769 3 0 047 60 674 1 0 864 5 Tis T1874814141144 830 413 6 0 026 40 360 8 0 466 4 T2 T4333381990 910 727 7 0 035 30 657 1 0 798 3 2 3 COX22表达与膀胱移行细胞癌复发的关系 本文40例复发者COX22蛋白阳性表达33例 82 50 80例无复发者COX22蛋白阳性表达36 例 45 00 两者相比差异有极显著意义 2 15 35 P 0 01 3 讨 论 哺乳动物的COX有两种形式 即COX21和 COX22 COX21属于结构型基因 在正常组织和细 胞中表达 而COX22属于诱导型基因 是一种诱导 酶 在正常生理状态下多数组织内几乎检测不到 而 在细胞受到各种刺激时 如组织损伤 炎症或细胞恶 性转化时表达增强 近年来大量研究表明 人的 COX22基因定位于1q25 2 25 3上 长约8 3 kb COX22的过度表达与多种上皮性肿瘤发生发展关 系密切 并可以作为预防和治疗肿瘤的靶分子 具有 重要的临床意义 研究表明 结肠癌 1 乳癌 2 前列腺癌 3 等许 多上皮来源的恶性肿瘤组织中 COX22和前列腺素 的合成都增加 体外实验中结肠癌细胞系在稳定转 染COX22基因后 细胞的增殖能力增强 细胞凋亡 减少 5 Mohammed等 6 首次报道了COX22蛋白 在膀胱癌中的表达 29例浸润性膀胱癌中25例 COX22阳性表达 占86 而正常膀胱标本无1例 阳性 Komhoff等 7 发现COX22仅表达于低分化 的癌组织中 但Ristimaki等 8 研究显示 不仅在高 分化的癌组织中检测到COX22蛋白 并且认为 COX22的表达与癌细胞的侵袭性相关 Shirahama 等 9 研究108例膀胱癌标本显示 COX22阳性表达 占31 正常膀胱黏膜无COX22阳性表达 并指出 COX22的表达与肿瘤局部浸润密切相关 但对预后 没有指导意义 本研究结果支持Ristimaki等 8 的 结论 出现这种结果可能与不同的实验室采用的研 究方法 如PAP法 ABC法 SP法等 和病例选择 不同有关 本实验用免疫组化方法从蛋白合成水平检测人 膀胱移行细胞癌组织中COX22蛋白的表达 并将 COX22表达与反映膀胱移行细胞癌恶性生物学行 为各项病理参数结合起来分析 结果显示 COX22 蛋白在膀胱癌组织中呈高表达 而在正常尿路上皮 中不表达 120例膀胱移行细胞癌组织中有69例存 在COX22阳性表达 57 50 COX22在膀胱癌中 阳性表达率随膀胱癌的病理分级增高而增加 P 0 05 提示COX22可能参与膀胱癌癌变细胞分化 浸润性膀胱癌与浅表性膀胱癌相比前者COX22阳 性表达明显增强 P 0 01 下转第239页 3期刘桂香 胡 聪 张爱华 等1 单卵双胎儿表型不一致性共同性斜视239 因 有学者认为是宫内环境因素的影响 11 其机制 可能为单卵双胎儿共用一个胎盘 有的双胎儿在胎 盘间存在动脉和静脉间的血管吻合 血液循环经胎 盘吻合血管相通 发生血液转输血流不均衡引起双 胎输血综合征 即从一个胎儿脐动脉回收来的血通 过这种吻合进入另一个胎儿的脐静脉以供给该胎儿 的营养 由于该血液含氧量少 这样就造成了两胎儿 的发育不平衡 甚至引起疾病 因此 尽管单卵双胎 儿具有相同的遗传基因 但由于宫内供血 供氧环境 不同 也可影响眼的发育 这可能是引起表型不一致 性斜视的原因 本研究中 表型不一致性斜视包括内斜视和外 斜视 其中以外斜视为最突出的不一致性斜视表型 这与其他学者报道的结果不同 1 尽管大量研究证实基因在共同性斜视发病中起 重要作用 但单卵双胎儿不一致性发病揭示了环境 因素所起的作用 早产 低出生体质量可能与之有 关 在今后工作中 如能发现更多的病儿并对临床 特点进行统计分析 以及进行基因表达产物 如蛋白 质组的研究 可能进一步阐述这类疾病的发病机制 本文图1 7见封二 参考文献 1 Matsuo T Hayashi M Fujiwara H et al Concordance of stra2 bismus phenotypes in monozygotic versus multizygotic twins and other multiple births J J pn J Ophthalmol 2002 46 59 2 Ahmed S Young JD Late onset esotropia in monozygous twins J Br J Ophthalmol 1993 77 189 3 Abrahamsson M Magnusson G Sjostrand J Inheritance of strabismus and the gain of using heredity to determine popula2 tions at risk of developing strabismus J Acta Ophthalmol Scand 1999 77 6 653 4 Matsuo T Yamane T Ohtsuki H Heredity versus abnormal2 ities in pregnancy and delivery as risk factors for different types of comitant strabismus J JPediatr Ophthalmol Strabis2 mus 2001 38 2 78 5 Pennefather PM Tin W Ocular abnormalities associated with cerebral palsy after preterm birth J Eye 2000 14 78 6 Hunter DG Ellis FJ Prevalence of systemic and ocular disease in infantile extropia J Ophthalmology 1999 106 10 1951 7 Holmstrom G Azazi M Kugelberg U Ophthalmological fol2 low up of preterm infants a population based prospective study of visual acuity and strabismus J Br J Ophthalmol 1999 83 142 8 Pennefather PM Clarke MP Strong NP et al Risk factors for strabismus in children born before 32 weeks gestation J Br J Ophthalmol 1999 83 5 514 9 Schalij2Delfos NE de Graaf ME Treffers WF et al Long term follow up of premature infants detection of strabismus amblyopia and refractive errors J Br J Ophthalmol 2000 84 9 963 10 O Connor AR Stephenson TJ Johnson A et al Strabismus in children of birth weight less than 1701 g J A rch Ophthal2 mol 2002 120 6 767 11 Smith DE Cibis GW Discordant Duane s retraction syndrome in monozygotic twins J A m J Ophthalmol 1996 122 5 749 本文编辑 厉建强 上接第236页 这提示较晚期的膀胱癌产生较多 量的COX22 以维持膀胱癌的生长 COX22阳性表 达的肿瘤病人 其复发率显著高于阴性表达的肿瘤 病人 P 0 01 本研究结果表明 COX22表达与 膀胱移行细胞癌的分级 分期有显著相关性 在高级 别 易复发的病例中 其表达强度相对较高 提示 COX22与膀胱移行细胞癌的生长和浸润密切相关 其表达越强 膀胱癌的恶性度越高 复发率越高 综 上所述 COX22可以作为检测膀胱移行细胞癌恶性 程度及复发的重要指标 参考文献 1 Eberhart CE Coffey RJ Radhika A et al Up2regulation of cy2 clooxygenase 2 gene expression in human colorectal adenomas and adenocarcinomas J Gastroenterology 1994 107 1183 2 Half E Tang XM Gwyn K et al Cyclooxygenase22 expression in human breast cancers and adjacent ductal carcinoma in situ J Cancers Res 2002 62 1676 3 Yoshimura R Sano H Masuda C et al Expression of cycloo2 xyg enase22 in prostate carcinoma J Cancer 2000 89 589 4 杨明山 马庆铮 环氧化酶22基因在膀胱移行