马铃薯组织培养.doc

马铃薯组织培养1、繁殖瓶苗 将待繁脱毒苗在无菌条件下每叶节切一段，接种在仅含大量元素、微量元素和铁盐的无激素MS固体或液体（可用纸桥）培养基的组培瓶中，置培养室内培养。培养条件为：光照1000-3000lx,光周期13-16h/d,培养温度（252），空气相对湿度50%-60%，自然通风。叶节段接种30-50d后长成3-5片叶的幼苗。记录苗芽发生时间，生长状况，污染率。再按照上述方法重复进行扩繁，直到达到要求繁殖数量为止。 2、繁殖微型薯 将上述具有3-5片叶幼苗，加入液体培养基（MS+BA2-10mg/L)或（MS+BA2-10mg/L+IAA1mg/L+CCC100-500mg/L+糖80-100g/L),放入培养室，遮光全黑暗或光照时数少于8h/d，温度（202），空气相对湿度50%-60%，自然通风。 经40-70d后，在植株叶腋处长出微型薯。记录微型薯发生时间，生长状况，污染率。马铃薯组织培养及原原种生产技术摘要：本文作者根据自己多年的工作经验，详细地介绍了马铃薯组织培养方法和原原种生产技术。关键词：马铃薯 组织培养 原原种 生产 技术病毒和类病毒的累积性感染是引起马铃薯种性退化的重要因素，而通过组织培养获取无病毒种薯来恢复种性的方法已被马铃薯生产地区广泛采用。现将马铃薯组织培养方法和原原种生产技术介绍如下：1 马铃薯组织培养1.1外植体培养从已催出芽（芽长一般24cm）的干净健康马铃薯块茎上掰下芽，用自来水冲洗干净，放入0.10.15%的升汞溶液中浸泡810分钟，在超净工作台上消毒完后，放入无菌水中浸泡6次，每次5分钟，然后接种到MS6BA1.5mg/L（毫克/升）GA30.5mg/LIBA0.5mg/L琼脂8g/L蔗糖30g/L（PH值为5.8）的培养基上，每个培养瓶接种15个外植体。1.2茎尖剥离及初代培养外植体培养20天后，在超净工作台上解剖镜下用解剖针将生长点0.10.5mm部分剥离出来，转接到MS肌醇100mg/L+6BA1.5mg/LGA30.5mg/L泛酸钙1.5mg/L蔗糖30g/L琼脂8g/L活性炭0.17g/L（PH值为5.8）的培养基上，每个培养瓶接种45个生长点。光照保持30006000Lux（勒克斯）左右，每天照光1316小时 ，温度控制在23，经26个月左右培养诱导，其间转接23次，生长点即可长成新的小植株。经病毒检测不带病毒的株系就可进行扩繁，未脱毒的株系淘汰。1.3试管苗扩繁1.3.1扩繁前的准备1.3.1.1扩繁培养基的制备。扩繁培养基以MS培养基为扩繁基本培养基，外加6BA0.5mg/L+NAA0.51.5mg/L+蔗糖30g/L琼脂8g/L活性炭0.17g/L，pH值为5.8。1.3.1.2把接种用具在超净工作台上用紫外线灯消毒2030分钟，关掉紫外线灯，打开日光灯和吹风机。1.3.1.3用肥皂把手洗干净并擦干，再用75%酒精消毒，待手上酒精干后，点上酒精灯，把剪子、镊子培养皿等所需用具在酒精灯上进行消毒。1.3.2接种扩繁用75%酒精喷待接的试管苗和制备好待用的扩繁培养基表面，将已脱毒株系按每苗留12片叶为一个茎段剪下，正向插入扩繁培养基（即MS6BA0.5mg/LNAA0.51.5mg/L蔗糖30g/L琼脂8g/L活性炭0.17g/L，PH值为5.8的培养基）上。一般每个培养瓶接种15个茎段，在温度2527,光照20003000Lux，每天1516小时条件下培养34天即可生根长芽。30天后可按1：7瓶进行扩繁一次，即原来每瓶15苗扩繁一次可达7瓶105苗，以后每隔30天扩繁1次，繁殖到目标苗数后，再经23个月培养即可扦插到原原种繁殖网室，进行原原种繁殖。2 网室原原种生产试管苗扦插到繁殖网室后生产出重1g以上可用于繁殖原种的微型种薯叫原原种，又称试管薯、迷你薯。2.1繁殖网室的构建用隔虫网温室进行原原种生产，不仅可进行大面积高密度无土栽培，而且繁殖速度快，生产数量多，质量好。网温室一般顶高2.22.8m，侧高1.82.0m，长和宽据场地大小而定，长一般30m以上，宽4.56m。上面覆盖防虫网，以防止害虫特别是传播马铃薯病毒的主要媒介蚜虫进入，暴雨来临时可加盖塑料薄膜防雨，夏季烈日暴晒时可加盖遮阳网遮阳。为便于管理，网室内用砖砌宽1.2m，高0.4m，中间留0.5m走道的苗床。人员进入时要换消过毒的工作服，用1%甲醛洗手，禁止抽烟。网室内浇水和排水要方便，基质和空间要作严格充分的消毒。2.2基质的准备马铃薯试管苗网室繁殖用的无土基质主要有锯木、粗糠、炭渣、珍珠岩、蛭石、河沙等。其中最好的基质是蛭石，无病菌、膨松，但成本高（9元/kg）；其次是珍珠岩；最后是河沙，易渍水，易死苗，但成本低，结薯率高，为大量繁殖脱毒马铃薯原原种最常用基质。基质适宜的PH值为67,偏酸或偏碱都要进行调节。2.3网室及基质消毒2.3.1网室消毒网室建好后，应用“功夫”杀灭地下害虫，用抗蚜威灭蚜，空间用高锰酸钾水溶液喷雾，网室周围要经常除草。网室内每收完一茬薯，都要进行1次空间消毒和基质灭菌。2.3.2基质灭菌在繁殖苗床内放入2030cm厚的河沙，用0.3%的甲醛溶液浇湿，然后用塑料薄膜覆盖7天，期间放风两次，每次1小时，揭膜57天后插苗（用蛭石和珍珠岩作基质，第一次使用时可不进行消毒）。2.4栽培管理2.4.1试管苗扦插扦插前1天在苗床上浇清水，湿度23cm，最多不超过5cm；第2天再浇1次后刮平墒面。将瓶苗打开浇少量清水，然后取出试管苗洗净培养基，用消毒剪从基部剪下按早熟种25cm、中晚熟种37cm用竹筷划沟扦插（若试管苗根数少可不剪而直接进行扦插）；若试管苗长超过10cm可按5 cm（留23个节）一段剪成若干茎段进行扦插，扦插深度23cm，苗长可埋入23个节，苗短12个节。苗插好后浇定根水23次，吸透为止。2.4.2水肥管理2.4.2.1浇水：扦插后相对湿度保持95100%，每天用七功能的喷枪或洒水壶喷洒68次水，主喷地上部分，防止萎蔫，515天（冬季15天、夏季5天）后开始生根、长新叶。扦插15天后13天浇1次透水，一般掌握阴雨天不浇，基质上部不干不浇，暴雨天气还应注意防雨。收获前1520天停止浇水。2.4.2.2追肥：扦插生根后（即扦插15天后）开始追施1号营养液（用N、P、K之比为15：15：15三元复合肥50g水20kg），按每23kg/m2浇施，每周2次，浇后用雾状水洗苗，洗至叶子滴水为度。30天后施2号营养液（用N、P、K之比为15：15：15三元复合肥60g硫酸钾5g+普钙5g水20kg，按每23kg/m2浇施，每周1次，浇后用雾状水洗苗。60天后1、2号营养液交叉使用，34天1次。收获前1520天停止追肥。2.4.3温度控制网室温度保持1527，夏季气温高，应注意网室通风，也可用70%遮光率的遮阳网遮挡扦插苗至成活后揭开，冬季气温低时可加盖塑料薄膜增温，同时注意通风和光照情况。2.4.4中耕培土除草试管苗扦插后30天左右开始第一次树苗培土，培土高度不宜过高，一般12cm；扦插后50天左右第二次培土，培土高度34cm。同时从试管苗扦插到收获期间都要注意及时人工拨除杂草。2.4.5病虫害防治2.4.5.1病害防治主要病害有早、晚疫病，特别在阴雨天气发病率最高。发病前遇阴天雨季可用10001500倍液瑞毒锰锌喷雾预防，每隔7天1次，连喷2次；发病后用8001000倍液瑞毒锰锌喷雾，每隔7天1次，连喷24次；也可用1：1：200倍的波尔多液进行防治，每隔712天1次，连喷4次。2.4.5.2虫害防治网温室主要害虫有蚜虫、白粉虱、螨类及地下害虫地老虎等。蚜虫防治要注意检查网室，及时防堵漏洞，严防蚜虫侵入传毒。温室白粉虱可用敌敌畏1000倍稀释液加溴氰菊酯3000倍稀释液喷雾，每隔37天1次，连喷3次。螨类可用800倍三氯杀螨醇防治。地老虎在有土栽培条件下容易发生，而在无土栽培条件下则很少发生。2.4.6适时收获、储藏马铃薯苗生长后期，停水停肥后，其营养生长逐渐减缓、停止。当薯苗变黄，薯皮老化时即可收获种薯。早熟种一般90天左右收获，每株收种薯35粒；晚熟种100110天左右收获，每株收种薯56粒。新收获的种薯含水量较高，需晾干，但不能在阳光下直晒，晾干的种薯分级后分别放在编织袋、尼龙网袋等透明的容器中，按不同品种、不同收获日期分别储存，以免混杂。脱毒马铃薯原原种的休眠期约6080天，用赤霉素处理能打破休眠，加快萌芽速度，萌芽时间可缩短30天左右。处理方法是用3040ppm赤霉素浸泡2030分钟，或将原原种放入冰箱在28条件下保存，播种前2个月从冰箱中取出，在室温下促其萌动、生芽。原原种萌芽后便可拿到高海拔地区进行原种繁殖。2.5茎尖扦插扩繁茎尖扦插扩繁是在试管苗数量不足的情况下，以试管苗扦插苗为母本，剪取其茎尖进行扦插的一种快速繁殖方法。2.5.1茎尖的剪取以扦插成活的试管苗为母株，在母株扦插30天后剪取其茎尖12叶一心或23叶一心进行扦插，剪取量3040%；710天后第二次剪，剪取量100%；40天后每隔7天可剪一次茎尖进行扦插。母株一般最多可剪半年。剪苗次数越多，生育期越长，结薯个数越多。剪取茎尖达半年的母株单株结薯可达50粒以上。母株在收获前30天停止采苗，并停止浇水追肥，促进营养转移，使苗不恋青，薯块迅速成熟，小薯块也能作种。2.5.2茎尖扦插将剪下的茎尖泡在清水里（如苗老可用35ppm赤霉素或奈乙酸浸泡5分钟再扦插），用竹筷在浇透水的墒面上按23cm或34cm的株行距插23cm深的小洞，然后把剪下茎尖的第1个节放在洞里（所埋叶和节会产生掖芽薯），栽几行后就要浇水23次，使其自然封洞，确保苗不萎蔫。2.5.3水肥管理水分管理与试管苗扦插相同。收获前1530天停止浇水。茎尖扦插后15天开始施1号肥，每隔7天1次，共施2次；然后施2号肥，每隔7天1次，共施2次；45天后1、2号肥交叉使用，34天1次，收获前1530天停止追肥。2.5.4中耕培土除草及病虫害防治茎尖扦插一般在扦插后15天进行1次培土，培土高度3cm。除草及病虫害防治方法与试管苗扦插相同。2.5.5收获、储藏早熟种一般60天左右收获，每株可收种薯12粒；晚熟种8090天左右收获，每株可收种薯34粒。马铃薯茎尖脱毒培养方法优化研究1 以甘肃省主栽品种陇薯6号为材料,研究了茎尖大小及培养基中激素和活性炭对马铃薯茎尖培养成活的影响。结果表明,叶原基数为2的茎尖脱毒效果最好;MS培养基中加入0.5 mgL-1 6-BA、0.1mgL-1 GA3和0.1 mgL-1 NAA有助于陇薯6号茎尖分生组织分化;加入0.05%活性炭,茎尖成苗时MS培养基母液的配制1. 材料与用具配制MS培养及所需的药品、生长调节剂、各类天平、烧杯、 容量瓶、 量筒、 蒸馏水、 磁力搅拌器、 95%的酒精、0.1mol/LNaOH或0.1mol/LHCL、母液瓶、标签、冰箱2 方法步骤1. 母液类型：四种母液分别是：大量元素、微量元素、铁盐、有机母液。如下表所示（单位mg)：2. 配置步骤（1） 准备：500/1000烧杯（盛少许蒸馏水）1个，1L容量瓶1个，1L试剂瓶4个，盛有蒸馏水的洗瓶，滴管，标签纸。（2） 称取各种药品，按顺序依次溶解在烧杯内。（3） 定容：将溶液引流在1L容量瓶中进行定容。（4） 储存：将容量瓶中母液倒入试剂瓶中，写好母液名称，贴标签。并贮藏在冰箱中。由于亚铁容易氧化，铁溶液应该在棕色瓶中保存。母液使用前必须摇匀。2 MS固体培养基的制作，分装与高压灭菌1. 仪器，用具与试剂（1） 仪器：PH试纸、电磁炉、高压灭菌锅（2） 用具：移液器、移液管、量筒、容量瓶、培养瓶、玻璃棒、洗瓶、烧杯（3） 试剂：配制MS培养基的各种母液、激素母液、琼脂、蔗糖、蒸馏水2.方法步骤（一）MS培养基的配制1.准备工作将配制好的MS培养基母液从冰箱中取出，按顺序排列，并逐一检查是否沉淀或变色，避免使用已变色的母液。将烧杯，量筒，滴管，移液器，PH试纸,洗瓶，蒸馏水0.1mol/LNaOH或0.1mol/LHCL，瓶子和瓶盖放在指定的位置，称好琼脂，蔗糖。2.移取母液按表用量用量筒移取大量母液100ml,用移液管分别吸取微量元素母液10ml,铁盐元素母液10ml,有机元素母液10ml,置入1L烧杯中，若需加激素母液按配方移取激素母液即可。在已装母液烧杯中加蒸馏水或自来水定容到1L，取1/3左右倒入锅中在电磁炉上加热。3.将已称好的琼脂（57g）倒入锅中，边加热边搅拌，防止糊底，旺火煮开再用文火融化琼脂，直至琼脂全部融化即清澈见底为度，加入蔗糖（30g）,待溶化后，再加入激素母液。4.调节pH值：用pH试纸测定pH值，用0.1mol/L的NaOH溶液或0.1mol/L的HCl溶液进行调节。最佳pH为5.8。（二）培养基的分装培养基合成后，要趁热分装。100ml容器中约装入3040ml培养基，即1L培养基约装35瓶左右。（三）培养基的灭菌培养基采用湿热高压灭菌法。先在高压灭菌中加水淹没电热丝，将分装好的培养基及需灭菌用具蒸、馏水放入高压灭菌锅中（注意培养基排列均匀，留有一定的空间，不要倾斜）接通电源，待压力达0.05Mpa时，用镊子排掉冷空气，关闭排气阀。待压力达0.01Mpa时，温度121，维持1520min。关闭电源，让培养基自然冷却，待压力接近0时，开启锅盖取出培养基。间提前了13 d,成13 几种经济作物的组织培养目的要求：1掌握马铃薯脱毒苗培养的大致过程以及马铃薯脱毒苗的鉴定方法2掌握马铃薯的生物学习性3掌握蕃茄的生物学习性及蕃茄的快速繁殖方法13.1 马铃薯 马铃薯是一种全球性的重要作物,适应性广,营养价值高，耐贮藏运输，成为一种重要的粮食作物之一，也是一种调节市场供应的重要蔬菜。 马铃薯原产拉丁美洲，当被发现可以食用后，很快传到世界各地，成为栽培很广的一种作物。但是，发现从外地引种栽培12个周期后，明显发现产量降低，植株变矮，并有卷叶和花叶退化现象产生，这便是由于病毒引起的退化现象。危害马铃薯的病毒有17种之多，如X病毒、S病毒、Y病毒、M病毒、A病毒、奥古巴花叶病毒、纺缍形块茎病毒。由于马铃薯是无性繁殖作物，病毒逐代积累，日益严重，引起严重退化。马铃薯卷叶病毒和马铃薯Y病毒的一些株系，可使块茎产量减少5080%。法国Morel和他的同事们，1955年从患病马铃薯植株得到了无病植株，为治疗作物病毒开避了新途径。 13.1.1 马铃薯的形态特征和生物学特征 1)马铃薯的形态特征根 马铃薯的根系由初生根和匍匐根两部分组成。初生根在块茎发芽后基部发生，构成其主要吸收根系。随着芽的伸长，陆续在芽的各个叶节处匍匐茎的两侧及下方发生匍匐根，水平生长。茎 马铃薯的茎分地上和地下两部分，地上茎的主茎在形成16片叶子后，由花芽封顶，并在花的下部发生两个侧枝，从而构成马铃薯的主要同化系统。地下茎包括主茎的地下部分、匍匐茎和块茎。块茎与匍匐茎相连的一端叫薯尾或脐部，另一端叫薯顶，块茎表面分布着芽眼。薯顶芽眼分布较密，发芽早，发芽势强，即具顶芽优势。生产上的整薯播种、带着顶部芽眼切块，都是发挥顶芽优势的有效措施。叶 马铃薯先出土的叶是初生叶，全缘，心脏形。以后发生的叶奇数羽状全裂单叶，在叶柄基部与主茎相连处着生有托叶。花 马铃薯的花为聚伞花序，第一或第二花序开放，恰是块茎强盛膨大之时，此时是需要不断浇水的形态标志。果实、种子 马铃薯果实为球形或椭圆形浆果。种子小，扁平肾形。种子可用来繁殖，但后代性状分离大。 2)生物学特性马铃薯性喜冷凉气候，不耐高温和霜冻，解除休眠的块茎4下发芽，发芽适温1218。地上茎叶生长适温1721,25以上时生长不良，叶变小，超过30和7以下茎叶停止生长，1时受冻。块茎形成要求昼温1424，液温1214，土温1618。土温20以上时块茎形成缓慢，而且容易引起退化，高温下养分多用于芽和匍匐茎生长而不易形成块茎，2530时已经长成的块茎也会消失而变成细长茎。结薯期要求12小时左右的短日照和松、湿润、肥活及通气性良好的土壤条件。土壤板结，薯块表面粗糙和薯形不整。马铃薯生产中普遍存在有种性退化问题，表现为植株长势衰弱，株形矮化，分枝变少，薯块变小，产量逐年下降，造成退化的原因和学说多种，综合而言，主要是薯块生长锥细胞发生阶段性衰老而导致种性退化，而病毒和细菌病害的浸染，以及肥水、营养条件下良等都会加剧其退化程度。13.1.2栽培管理播种须经催芽处理，方法是播种前3040天，将选好的健康种薯装入袋或筐内，放1518和空气相对湿度60% -70%的火炕上或大棚内710天，促进芽萌动。然后将种薯摊晾在光照充足的地方或室外，厚度以23层种薯为宜，保持1518和70%-80%空气相对湿度，晚间收回。经1520天，能形成0.51.5cm长、紫绿色粗壮的幼芽，芽基部已发生根尖和茎的原始体。将催芽种薯纵切成45块，每块25 g左右，带12个芽。切口抹草木灰，放20和80%-90%空气相对湿度下，促伤口愈合，防块茎腐烂。3月中旬左右播种，密度为60701530cm,开沟10cm深，播后覆土平沟，增强保墒。干旱时，播前或播后浇水。播后覆盖地膜，可早出苗和增加产量。春薯可和棉花或玉米间作。 春薯管理的重点在于促进早出苗、早发棵、早结薯。80%出苗时中耕松土，提高地温。齐苗后半月左右，行间撤硫酸铵1012Kg ,后浇水中耕，促发苗和长棵，迅速形成茎叶和地下匍匐茎。发棵初期施肥，以后适当控制肥水，地不旱不浇，多次浅耕保墒，防植株旺长面延迟结薯。封垄前大培土一次，培土高1215cm，不埋没主茎的功能叶。开花后地下块茎膨大，要求湿润疏松的土壤，在初花、盛花和终花期连浇三水，这时期缺水会明显减产，后期可减少浇水，更不能大水漫灌。收前5-7天停水促薯皮老化，以利贮藏。13.1.3 马铃薯脱毒技术马铃薯在营养繁殖易受病毒的浸染，当条件适合时，病毒就会在植株内增殖，转运和积累于所结块茎中，随着世代传递，病毒危害逐年加重，一般可造成减产50%以上。研究发现，有30多种病毒感染马铃薯，并引起品种退化，严重影响到马铃薯生产。通过微茎尖组织培养技术能从马铃薯体内脱除PLRV、PVY、PVA、PAF、PVG、PVM 、PSV等病毒。因此，采用组培技术，通过一定良种繁体系，生产优质种薯，是保证马铃薯高产、稳产的一项有效措施。1)脱毒种薯生产程序：采取微茎尖组织培养的方法，诱导出苗，采用酶联免疫吸附试验法或指示植物方法鉴定马铃薯病毒和类病毒，经鉴定后，无主要病毒及类病毒的试管苗可定为脱毒试管基础苗。试管基础苗在无菌条件下，采用固体、液体培养基相结合方法，进行扩繁基础苗，在防虫网室栽植或封闭温室扦插，生产出原原种(或称脱毒小薯)。用原原种在一定隔离条件下生产原种1代，以后逐级称为原种2代、良种1代、良种2代。 2)茎尖培养脱毒 取材和培养 一般多采用在室内发芽，芽经热处理(38)2周。然后取顶芽或侧芽的1cm的茎尖，在自来水下冲冼1小时左右，无菌条件下先用95%酒精迅速浸润组织，再用5%漂白粉溶液浸泡510分钟,然后用无菌水冲冼23次。为了减少污染机会，可将块茎彻底消毒后，放在无菌容器培养，然后再去取茎尖。分离茎尖时，把消毒好的芽放在解剖镜下仔细剥离，逐层剥去幼叶，露出圆滑的生长点，可以留个叶原基，随即接种于MS液体培养基上，每升加0.1mgIAA、0.1mgGA3、pH5.8。也可White培养基，附加0.11mg/l的NAA和0.05mg/l的BA。培养条件：21-25、3000Lx、16h/d。 继代和生根 培养成功的马铃薯脱毒苗，经鉴定后，采用固体、液体培养基相结合方法扩繁。取试管苗单节切段扦插在固体培养基上，每瓶可插20个左右茎段，经20天左右使可发育成5-10cm高小植株，可再进行切段繁殖，此法速度快，每月可繁殖5-8倍，试管苗多节接种在液体培养基上，进行浅层静止液体培养。试验表明：多节液体培养试管苗比固体培养基生根快，长的粗壮，便于栽植，同时省去大量琼脂，降低成本，提高试管苗成活率。培养基可用不加任何激素的MS。培养基中的烟酸、肌醇都可以减去，琼脂浓度也可降低。切段繁殖的速度很快，在2528，光照强度30004000Lx，连续光照的条件下，一般每月能增加78倍。驯化 为增强试管苗对温室内环境条件的适应能力，移植前对试管苗要进行光、温锻炼。炼苗期温室内的温度：白天23-27，夜间不低于10。炼苗的具体方法是：移植前7天左右，将长有3-5片叶、高2-3cm的试管苗，在不开瓶口状态下，从培养室移至温室排好。为防止强光、高温灼伤试管苗，在温室顶上加盖一层黑色遮阳网。一般不能全遮，以使温室内仍保持有一定光照和较高的温度，并在摆放试管苗的畦内浇上水，维持试管苗周围的湿度。移至温室的试管苗，尽管仍处于封口的瓶内，但由于封口膜透气性好，瓶内的湿度下降，使试管苗的茎叶变硬，加上光照增强，茎秆变粗，叶片肥厚浓绿，有效地抑制了徒长和真菌的侵染，从而提高了试管苗的抗逆性和对环境条件变化的适应能力，提高了移植成活率。移植时，将装好基质的营养钵紧密地排放于温室内已整好的阳畦内，可采用珍珠岩作为基质，有条件的话，也可采用灭过菌的疏松土壤。每1m2排放营养钵300个左右。排好后用喷壶浇透水，将经光、温锻炼好的试管苗从瓶内用镊子轻轻取出，放到15左右的水中洗去培养基，放入盛水的容器中，随取随扦插，防止幼苗失水萎蔫影响成活。大的幼苗可截为两段，每个营养钵内插一个茎段，因茎尖生长比下部茎段上的腋芽生长快，为生长整齐，互不影响，上部茎尖段和下部茎段分别扦插到不同钵内。苗高不足25cm的不再截段，直接移植到另一畦内。扦插时茎段插入营养钵土表下12个茎节，露出土面l2个带叶茎节（茎尖） 土表上茎节处的腋芽（顶芽）形成幼苗的茎叶、下部茎节发生新根，即形成一株完整的脱毒苗，供将来切繁的基础苗。扦插完成后随之撒少量营养土，然后用细雾水喷浇，使扦插茎段同基质很好接触，以免使茎段裸露土表不能成活。随后用废报纸盖好，遮光保湿23d，茎段生出新根后将覆盖的报纸及时去掉。扦插的基础苗成活后，其水分、温度及养分管理应根据气候变化和苗情而定。一般情况下，扦插后最初几天，每天上午喷一次水，保持幼苗及基质湿润。但喷水量要少，避免因浇水过多造成地温偏低而影响幼苗成活和生长。切忌暴热时间凉水喷苗。为提高水温，可提前用桶存水于温室中。随幼苗生长逐渐减少浇水次数，但每次用水量逐渐加大。此外为保持温室内始终有较高的湿度，以防幼苗茎皮硬化，影响切繁效果，在育苗不需要浇水的时候，应将温室内所有空地全都浇上水，在幼苗生长及整个切繁期，温室内的相对湿度保持在85以上，气温白天控制在2528，夜间保持在15以上。基础苗切繁前和培育大田定植苗，一般不再追肥。但基础亩开始切繁后23d要喷一次营养液，此后每隔10d喷一次，直至切繁终止（见表13-1）表13-1 营养液的成分及用量成分KNO3NH4NO3MgSO47H2OKH2PO4CaCl22H2O浓度(mg/l)950800180852203) 脱毒苗切繁基础苗成活进入正常后便可切繁，但切繁数量的多少和质量的高低，除与前边提到的水与温、湿度条件有关外，能否掌握正确的切繁方法和适宜的切繁苗龄也是非常重要的。 脱毒苗切繁主要是剪取顶部芽尖茎段（主茎芽尖和腋芽芽尖）直接扦插。正确的切繁原则是：保证每次剪切后，基础苗仍能保持较好的株型和营养面积与较多的茎节，不仅生长正常，而且又能萌发出多个腋芽供下次剪切，具体方法是：扦插后15天左右，当基础苗长有4-5个展出叶、苗高3.5-4cm时进行首次切繁。从基础苗茎基部上数2-3个茎芽(叶)上方，用锋利刀片将上部茎芽切下(芽段不小于1cm)，扦插到浇透水的营养钵内。培育供大田定植的脱毒苗，也可作为供切繁的基础苗。如生产脱毒小整薯，可直接扦插到用营养土作好的畦床上或备好的专用的无土培养盘中，扦插方法与扦插后的管理同试管苗扦插和管理。第一次剪切后10天左右，基础苗上萌发的腋芽长大时进行第二次切繁，同第一次一样，将剪取腋芽基部的第一个叶节留下继续萌发腋芽，将上部茎尖芽段剪下扦插。如基础苗上除剪取的腋芽外，仍有多个未萌发腋芽，将上部茎尖芽段剪下扦插。如基础苗上除取的腋芽外，仍有多个未萌发或未长大的腋芽时，可将腋芽全部切下。如果是高位腋芽，要连同着生腋芽的茎段一起剪下，以便基础苗始终保持较好的、有利于继续切繁的株型，延长切繁期。以后无论切繁多少次，其方法和原则相同。在生产需要，时间允许，所有切培育成的脱毒苗均可作为基础苗进行切繁。基础苗最后一次的切繁时，除最基部留下一个茎芽外，其余无论大小，全部剪下扦插，并将多余的茎、叶清除，使其发育成一株正常的脱毒苗供大田定植。13.1.4 马铃薯无病毒苗的鉴定 1)指示植物鉴定(汁液接种法) 在马铃薯的病毒鉴定中，汁液鉴定是最常用的方法，X病毒、S病毒和纺缍块状病毒很易通过汁液来接种。Y病毒、M病毒和A病毒等也可用此法接种。 鉴定寄生的准备 马铃薯病毒的寄生范围宽窄不一，如卷叶病毒只能感染茄科植物少数几个种。而X病毒除茄科外，还能感染苋科的千日红，藜科的苋色藜等。马铃薯常用的鉴定寄生植物有苋科的千日红，茄科的洋酸浆、毛曼陀罗等。寄生植物应在无虫网室中培养，温度控制在1525，提供充足的肥、水、光等条件，保证幼苗茁壮，生长迅速。系统发病来鉴定寄生，一般用35片真叶的幼苗，局部发病的寄主利用充分展开的叶片。每个病毒样品可接种3株，并做好标记。 接种液制备及接种 一般以表现病状明显的叶作为接种材料。叶片洗净后，在消毒的研钵中研成糊状，用纱布滤出汁液，再以蒸馏水稀释10倍作为接种物，以防过浓的汁液对鉴定寄生产生伤害作用。 在鉴定寄生植物的面，均匀地喷布600目的金刚砂，也可将金刚砂少许混入接种物中，然后用左手心紧靠在寄生叶片的背面，以右手食指蘸取接种液，均匀的在叶正面擦过，以不造成叶片产生伤痕为度，最后把叶面上多余接种物用水冲去，放置在1524的防虫温室，一般510天可发病。13.1.5马铃薯无病毒株的繁殖和保存 1)无病毒株的繁殖 通过茎尖培养只能得到很少的无病毒植株，而生产上需要数以万计的健康种薯。同时无病毒植株并没有对该病毒获得免疫能力，仍会在繁殖中受病毒再侵染。如何在以后繁殖中防止受病毒再侵染是很关键的一环。目前在生产上来用的方法很多，下面介绍主要的几种。 直接块茎繁殖 这是常用的方法，把少量无病毒小苗直接移入无虫网室的土壤中，利用产生的块茎继续繁殖，并进行严格的病毒鉴定，一旦发现受病毒再侵染，即行淘汰，将经过56次繁殖的无病毒块作一级原种，提供大田繁育体系作进一步扩大繁殖。 扦插繁殖 把无病毒植株栽于无虫网室的营养钵中，12个月以后切顶芽作插枝。切去顶芽后，又促进了侧芽发生，很快长成侧枝。扦插时，将插枝的最下面一片叶除去，插入经过消毒的沙壤土中，插入深度为两个节间。在插后一周时间内，维持土壤湿润，插枝就能产生新根。有些插枝地下部分会结出块茎，应及时除去，否则这些插枝不能生根，最后会枯死。经过两周多的生长时间，插枝就可以移栽，或供作进一步切取插枝的母株，或让其结块茎提供一级原种。母株应经常更新，防止因太老导致生根困难。 组织培养切段繁殖 这种方法如前所述。其优点是速度快，完全避免了所有病毒源再侵袭的可能。 2)无病毒株的保存 利用试管保存无病毒植株资源是一有效途径。试管植株体积小，占用的空间少，可大量地保存植株。长期保存马铃薯无病毒试管植株的方法有二： 继代培养 对保存的无毒苗不断地继代培养， 每个品种可以接种210瓶。为便保存可选用较大的150ml三角瓶，内加入一半以上体积的培养基。其琼脂含量要高于一般培养基，可用不含激素的基本培养基，并加入10ppm的激素，以延缓小苗生长。每瓶接种23个切段。培养温度可在525，在较低温度下，保存的时间更长。用不含激素的基本培养基。光照1000Lx。这样每隔23个月继代培养一次，达到保存的目的。 低温保存 当试管的植株长至2厘米左右，放入4冰箱中，放在暗处保存，可达一年左右。12.2番茄 12.2番茄.形态特征.和生物学特性1)形态特征：草本植物，苗期直立生长，成熟期呈匍匐蔓生状态，植株高大，生长势强。番茄茎节上还能长出不定根，如将一段枝条剪下，能发育一株新个体，番茄的叶片为长羽状，在叶轴上生有侧生裂片，顶生裂片，小裂片，间裂片，这些裂片是叶的深裂，缺刻的深化。两性花，聚伞花序，小果型品种多为总状花序。番茄种子为扁平短卵形，在一端的边缘有一个向内凹陷，种子外面覆以粗毛，呈褐色或黄褐色。种子地较小，寿命34年。2)生物学特性：番茄属于喜温性蔬菜，较耐低温，但不耐炎热，在月平均温度1825的季节里生长良好，为喜光性作物, 需1214h/d，光强4000050000Lx。对水分需求量极大，要求土壤湿度在6585%，空气湿度50%60%为宜，番茄对土壤条件要求不严格，肥沃的壤土利于高产，此外在有机肥充足的情况下，通气良好的砂壤土也能获得高产。番茄对土壤要求酸碱度是pH 57，适于微酸性或中性土壤。番茄是最需肥的一种作物，据测，亩产5000kg番茄 ,需吸氮17kg，磷5kg，钾26kg。13.2.2.栽培管理1)育苗播种前种子需进行处理：可用0.1%高锰酸钾溶液浸泡种子30分钟，或用10%磷酸三钠溶液浸泡种子4045分钟。以预防其它病害，促使幼苗健壮生长，防止徒长，还可以采用2.5公斤水加5g敌壮索、7g钼酸铵和7g瑞毒霉混合液浸泡45小时。把浸过种的种子移至2530条件下催芽，催芽之间要有充足的空气，经常检查和翻动种子并每天用浅水冲洗120次。如此经23天即可发芽。如若在番茄二叶一心时分苗，播种密度为每平方米1015g，如一叶一心时分苗，则播种密度为1520g，播种前床内灌足底水，灌水量以床土810cm深的土层为宜。然后采用撒播，条播或点播的方法播种，种子上覆适量的土即可。播种后，使床温在白天保持528，夜温在15以上，当番茄幼苗出土70%左右还应注意通风换气。当第一片真叶生长时即可分苗。即播种后2535天进行，分苗后白天温度在2530间，夜晚1518间，当幼苗67叶时可进行移植。定植密度为5030cm或5033cm。定植后到拉秧需浇水56次。主要在定植期，定植中后期，第一花序始花期，当第一穗果长至核桃大小时浇水。此外需在9月中旬浇催果水时，施入氮、磷、钾复合肥2530kg或速效肥，以后还要追施有速效肥12次。2)植株调整大棚或温室番茄一般采用单扦插整枝，留23穗果实，并注意，最上面的果穗上方要留23片叶，而后摘心。在秋分前后天气转冷时，应将各花穗中未坐果的花朵摘除。并且对各花的幼果需进行疏果。使每个花穗，保留45个果实，畸形果应当摘除，以提高所结果实的商品价值。13.2.3组织培养：取番茄幼嫩叶片外植体经清水洗涤，在无菌条件下，用0.1%升汞液浸泡4min,再用无菌水冲洗3-4次，然后切成0.5cm0.5cm小块，接种于诱导培养基MSBA2mg/L IAA1中。培养温度25，每天补充光照10 h，光照度2000lx。6天后叶片开始膨大 ，边缘有小突起产生。并向外反卷；16天后长出大量愈伤组织，呈浅绿色或淡白色，质地较紧密，但无芽产生。当其增至0.8-1cm时，挑选新鲜、上部稍带淡绿色点的愈伤组织转入分化培养基MS+BA4中，一星期后均有小芽产生；15天后，将较大的芽转接到生根培养基MA+IAA2中，6天左右下部产生白色小点，并逐渐形成白色根，11天后即形成完整植株。将培养有根试管苗的瓶口打开。煅炼3天后取出，洗去根上带有的培养基残渣，移栽到营养土中，浇透水，并罩上薄膜，以保温湿，4-5天后去掉薄膜，新叶长出时即定植田间。1)胚培养：外植体的制备授粉后3040天收获果皮完整的果实，果实放入95%乙醇中表面消毒，浸在5%NaCl中5分钟，用无菌蒸馏水充分淋洗。果实放在无菌吸水纸上，除去种子上的胶状复被。培养基MS培养基类。按常规加蔗糖、肌醇、维生素和琼脂，并附加硫胺素3.0um。pH调节到6.0。用附加2.4D9.05um,IiP4.92um和椰乳100ml/L的MS用做愈伤组织启动和保存培养基。愈伤组织培养基不加维生素。芽再生培养基附加9.12um，蔗糖浓度降到32%，生根培养条件愈伤组织启动和保存，用暗培，27。愈伤组织在2周内产生。当见其生长时，应立即继代在新的培养基上。经23周后，把增殖的愈伤组织分成几小块，放在再生培养基上。芽再生和生根在室温2030。16h/d，荧光下进行。每3周芽再生培养一次。3个月内可取得芽，再过三周生根。13.2.4病虫害及其防治 立枯病为害茎基部。防治方法苗床选择干燥，排水良好的地块，前茬是非茄科植物。加强苗床管理，切实做好苗床保温，防止冷风或低温浸袭，避免幼苗受冻。床土消毒。药剂防治，幼苗出土后发病，可喷施58%瑞毒锰锌可湿