USP 1116洁净室和其它控制环境的微生物评估USP34—中文.doc

USP 洁净室和其它控制环境的微生物评估本章的目的旨在描述与药品、药剂、医疗设备等有关的无菌操作以及建立、保持和控制控制区域的微生物质量。 本章将讨论以下内容： 1. 根据尘埃粒子数洁净室划分的级别 2. 控制区域的微生物评估方案 3. 人员培训 4. 微生物评估方案的设计和实施的关键因素 5. 取样方案 6. 建立微生物警戒和活动强度 7. 用于微生物取样的检测仪器和方法 8. 所用的培养基和稀释剂 9. 单个微生物的鉴别 10. 培养基的操作评估 11. 专业术语生产家庭用的无菌药品的药房的控制区域不在本章内讨论。它们在“797药品化合物无菌制剂”中讨论。这里有可供选择的用于评估和控制无菌操作的控制区域的微生物情况的方法。本章的数值并非绝对的标准或规格，仅作参考。使用的各种微生物取样设备和方法，谁也不能说达到了这些数值就能保证微生物在控制水平内，或者超过了本章的数值就表示失控了。不正确的运用微生物取样和分析方法可能导致重大的变化和潜在的无意的污染。本章提到的取样培养基、设备和方法不为专用，仅供参考。大量的无菌产品是通过无菌生产制造出来的，因为无菌操作有赖于将微生物从生产工艺流程中排除和防止微生物在打开容器填充的过程中进入。产品微生物限量和生产环境的微生物限量是与保证产品的无菌水平联系在一起的重要因素。洁净室级别的建立洁净室和环境控制区域的设计和施工在美联邦标准209E中有介绍。根据空气中尘埃粒子的浓度定义空气洁净标准。洁净空气级别的划分和空气中粒子的监测的方法都包括其中。该联邦文献仅适用于环境控制区域的尘埃微粒，并未描述是无生命或有生命的粒子的特征。关于制药工业的洁净室和环境控制区域的联邦标准209E已对洁净室设备的建造、使用、维护等提供了详尽的说明。然而，制药工业的资料上不能对有生命的微生物浓度和无生命的粒子的数量之间的联系提供一种科学的定论。无生命粒子的数目在电子工业中的影响使得联邦标准209E非常重要，虽然，在制药工业中有生命的粒子（如微生物）相对于联邦标准209E中的整个粒子来说有更大影响。但对制药工业中微粒总数对注射药品有明确影响。（参阅注射剂中的微粒788）洁净室中粒子越少则空气中的微生物也越少的理论被接受，该理论为药品制造商和洁净室和其他环境控制区域的建造者提供了建立合适的设备的工程标准。在制药工业的应用中，联邦标准209E是建立在所有的微粒尺度等于或大于0.5um上。表1列举了联邦标准209E中应用于制药工业的空气洁净级别。制药工业要求为 M3.5或以上的级别。M1到M3为电子工业级别，列于表中作为对比。通常以为，假设气流、温度、湿度不变，在供操作的洁净室或其它控制区中，微粒数越少，则微生物也越少。在动力学基础上，洁净室被维持在可控制操作状态。表1 不同洁净级别的空气微粒级别名称0.5um的微粒国际美国习惯（m3）(ft3)M110.00.283M1.5135.31.00M21002.8M2.51035310.0M31,00028.3M3.51003530100M410,000283M4.51,00035,3001,000M5100,0002,830M5.510,000353,00010,000M61,000,00028,300M6.5100,0003,530,000100,000M710,000,000283,000采集于美联邦标准209E，1992年9月11日， “洁净室和洁净区的空气微粒洁净级别”。 控制区域微生物评估方案的重要性即使在控制区用电子设备不间断地监测中微粒数，也不能提供该环境的全部微生物信息。最基本的微粒数限制是其测量微粒0.5um，同时空气微生物不是自由浮动或单个的细胞，它们通常与10um到20um的微粒联系在一起。控制区中微粒数和微生物数随着取样地点和取样活动的控制而改变。监测环境中无生命微粒和微生物都是最重要的控制因素，因为它们在“注射剂1下的微粒和无菌”要求获得的产品生产中起重要作用。控制区的微生物监测必须评估清洁和消毒的有效性和对控制区的微生物限量有影响的人员的影响。不管系统有多精细，微生物的监测都不可能也不必要说明该控制区的所有微生物污染的数量和种类。但是，日常的微生物的监测必须提供足够的信息，以此确定操作是在适宜的控制状态下运行的。专业人员对环境微生物监测和分析将有利于洁净室和控制区的控制状态的维持。为了收集有意义的数据，则应在平常操作时对环境进行取样。当物料在控制区内，操作在进行中，允许的操作人员全部在岗时才进行微生物取样。 合适时，洁净室和其它控制区的微生物监测应当包括：房间空气、进入洁净室的压缩空气、重要地面、设备、净化容器、地板、墙壁和人员的衣物（例如手套和罩衣）等的微生物量。微生物监测工作的主要目的是获得洁净区的微生物限量有代表性的评估。当数据被编收集和分析时，经过培训的人员应对其进行趋势评估。在建议并明确规定频率的基础上，复查环境的结果是重要的，在延长周期上的复查结果以确定目前这种趋势是否体现出来也很关键。趋势可以通过包括警戒和操作水平在内的统计控制章节的施工建议来设想。控制区的微生物控制可以在趋势资料的基础上作部分的评估。必须做出定期的报告或总结以告知负责人。当控制区的微生物水平超标，则必须回顾记录和重新调查研究。依洁净室药品生产的类型和过程不同，调查研究的细节可以不同。调查研究包括区域维护记录、清洁记录、内在物理性质或操作参数（例如环境的温度和相对湿度的改变）和人员的培训。接着调查研究后的行为包括加强人员培训来增强环境的微生物控制；额外提高取样频率，加强卫生，增加产品检测，确定微生物污染及其可能源头。如有必要，还应包括再评估目前标准操作规程的必要性和重新生效它们。 在重新调查研究和检测结果的基础上，微生物水平超标的意义和在该条件下的操作和产品生产的可接受性可以被确定。任何调查研究和操作的基本原理必须记录，并构成质量管理体系的一部分。如洁净室和洁净区等控制区是根据有关洁净室操作标准下定义的。评估参数包括过滤器装置、空气速度、气流形式、空气交换和不同的压力。这些参数可以影响洁净室操作的微生物限量。洁净室的设计、建造和运行的变动很大，这使得归纳这些参数非常困难。在关键工作区内提高微粒的浓度使得粒子到达系统进行检测的方法和设备已被Lungquist和Reinmnller提高了。首先，烟雾的形成可使我们想象空气在洁净室或控制区域内运动。可以设想出涡流或混乱区的存在，汽流形成可以被协调到消除或减少不必要的影响。这样，微粒在接近关键区域和无菌区域形成。这个评估是在模拟生产条件下做的，有仪器和人员在场。洁净室或控制区的物理特性的正确检测必须在微生物监测程序确证完成之前。保证微生物限量在按照工程说明书上的运行中能更好保证控制区适合于无菌操作。这些检测在洁净室或控制区的常规证明期间以及当操作（例如人流、程序、操作、物流、空气处理系统或者设备布局、）决定发生重大地改变时需重做。人员培训无菌生产产品要求生产商密切注意细节和维持严明的纪律，以及人员的严格监督，以维持环境质量水平，确保最终产品的无菌。 对所有环境控制区域内的工作人员的培训是关键的。这个培训同微生物监测工作人员的责任（在微生物取样时，洁净工作环境会偶然的发生污染）是同样重要的。在高度自动化操作中，监测人员可能是在操作中与关键区域最直接接触的人员。在操作区人员的监测必须在工作前或后都要进行。由于不正确的取样操作微生物取样有可能潜在地导致微生物污染。正规的人员培训可以减少此种危险。正规培训必须针对所有进入控制区的人员。管理部必须确信所有的在洁净室或控制区操作的人员精通相关的微生物原理。该培训必须包括基础的无菌操作原理知识以及在生产和处理过程中潜在的产品污染源。该培训必须包括基本的微生物原理知识，微生物生理学、消毒和卫生系统，培养基的选择和准备，生物分类学和进行无菌操作人员的消毒，这些都是无菌过程有关人员人员本职工作的要求。进行微生物鉴别的人员要在相关实验室方法上要进行特殊训练。还必须安排环境资料的收集管理的培训给人员。标准操作规程的理解和有关知识是关键的，特别是与环境状况要求矫正联系在一起的标准操作规程。理解涉及药品生产管理规范的常规指导方针，个人的责任和调查分析数据信息也是训练练内容的一部分。控制区的最主要的微生物污染源是人员。污染能从个人的微生物传播中发生，特别是具有传染病的人员。只有健康人才允许进入控制区。这些情况强调了良好的个人卫生的重要性和特别注意用于人员进入控制区的无菌服规程的细节。一旦雇员是正确地穿着 包括完整的面部覆盖 他们必须始终地小心的维持他们的手套和衣服的完整。既然主要的无菌操作产品的污染威胁来自操作人员，则与这些人员联系在一起的微生物污染的控制是最重要的环境控制项目之一。在控制区工作人员的彻底培训的重要性，包括无菌技术，不能被过分强调。环境自测不能发现无菌操作的所有事件，这可能减弱环境的微生物质量。为了保证的操作控制和培训有效的维持，因此，定期的培养操作或再确认操作的模拟操作学习是必要的 。 在设计和执行微生物环境控制程序中的关键因素 一个环境控制程序必须能够及时发觉微生物条件的不利因素，以允许有意义的和有效的修改措施。生产者应负责发展，采取行动，实施和记录这样的微生物环境控制程序。 尽管将要对一个环境控制程序的通常作法进行讨论，然而这种程序限定于特定的设施和条件是必要的。常用微生物生长培养基，例如大豆酪蛋白消化物培养基在许多情况下必将适合。该培养基可以添加添加剂以克服或减小在这些区域中使用的净化剂或抗生素的作用。酵母菌和霉菌的数量和检测必须被考虑到。常用真菌培养基为沙氏葡萄糖琼脂培养基，改良过的沙氏葡萄糖琼脂培养基，霉菌抑制琼脂培养基。其它被证实有利于真菌生长的培养基例如大豆酪蛋白消化物琼脂培养基可以使用。通常，专性厌氧菌的检测不是例行工作。然而，条件或调查研究许可时，如在无菌检测环境中这些微生物的鉴别，则可进行更频繁的检测。必须评估所选择的用于检测和计数厌氧或需氧微生物的培养基的能力。 当合适的培养基被选择了，则培养的时间和温度也被选择。特别，培养温度在22.52.5和32.52.5的范围内，培养时间则分别为72小时和48小时。用于环境监测程序的生长培养基的无菌操作应验证，另外，培养基须按无菌检测71中指出的进行无菌和促生长能力的检查，。另外，为促进生长检测，从控制环境中分离出的典型的微生物或这些分离的ATCC菌标本可用于检测培养基。当接种的菌落少于100cfu时，培养基必须能够支持生长。 一个合适的环境控制程序必须包括取样点得鉴定和评估和环境微生物取样方法的验证。 用于鉴别分离菌的方法必须用指示微生物证实。（见微生物计数检测61和特殊微生物的检测）取样方法和取样点的建立 在洁净室或其它控制区域开始启用期间，用于空气和表面取样的具体位置必须被确定。产品附近、与产品有接触的空气和表面、密闭容器体系的易损坏表面必须给予考虑。这些区域是需被考虑的严格区域，要求比无产品接触区域有更多的监测。在装瓶操作中，操作区将特别包括封容体系，打开容器的渠道和人员例行处理的无生命的物体（例：污染物）。 取样频率将依赖于特定地点的严格程度和产品被无菌操作之后随后的处理方法。表2给出了取样频率，是按取样频率的减少的顺序和取样的控制区的关键地区排列的。表2 根据控制区域严格度建议的取样频次取样点取样频率100级或更高级房间每个作业班接近100级的地区（如10,000级）每个作业班其它地区（如 100,000级）每星期两次潜在的生产/容器接触区每星期两次其它无菌操作但无产品接触区域（100,000级或更低） 每星期一次当在生产期间手工操作增多或潜在与产品接触的人员的增多时，则环境监控程序的相对对重要性就更加明显。无菌操作生产的产品比产品生产出来后在进行灭菌的产品的环境监测要求更严格。耐灭菌处理的微生物测定和计数比生产区周围的微生物环境监测更关键。如果末期无菌循环不是建立在过度杀伤的循环原理上，而是建立在灭菌之前的微生物限量的原理时，则微生物限量的数值则更为关键。 取样计划应与监测频率相一致和取样点应根据工作情况进行调整。依据工作情况安排可增加或减少取样。控制区内微生物警戒和行动水平的建立 统计控制程序的原则和概念在建立警戒和行动水平以及反应趋势是有用的。 微生物环境监测中的警戒水平是从正常操作条件中分离出来的微生物潜在水平。超出警戒水平不是决定纠正行动的必要理由，但至少应该准确的记录追踪调查，它应包括取样计划的改变。 微生物环境监测中的行动水平是当微生物水平超标时，立即追踪调查且必要时采取纠正措施的微生物水平。 警戒水平通常是根据特定控制环境中的例行操作所获得的历史信息的基础上建立的。 对于新的设施，这些水平通常是根据相似的设施和操作中的经验建立起来的。且至少有几个星期的关于微生物环境水平的数据来评估新的基准。 这些水平经常根据已建立的频率进行重新检验。当历史数据证明需改进条件，这些水平可重新检验并改正来反映这一环境。当显示环境质量恶化的趋势时，则要求找出确切原因并采取修正措施以使环境回到期望的范围内。但是，必须采取调查研究并做出这对产品的潜在影响的评估。环境控制区中的微生物因素和行动水平 洁净区和其他环境控制区是根据联邦209E中规定的总尘埃粒子数划分的。制药行业和医疗仪器制造行业通常采用100级，10,000级，100,000级，特别是涉及厂房的建造标准。 虽然209E中环境控制区的划分和微生物水平无直接关系，但是制药厂使用相当于这些等级的微生物水平已有些年头，且这些水平已用于评估当前GMP规范。应用当代现行技术已经能使控制区的这些水平轻易地达到。已有报道和关注使用不同的取样体系、培养基和培养温度可获得的不同的数值。应该认识到虽然没有那种体系是绝对的，但它能帮助发现在环境质量方面的变化和倾向。表3，4，5表示单次的检测结果，仅作为指导性建议。每个厂家的资料必须作为总监测程序中的一部份而被评估。表3在控制区内空气的菌落形成单位（cfu）的洁净准则（使用狭缝-琼脂（SlittoAgar）取样或类似方法）级别*每立方米的空气中的cfu*每立方英寸的空气中cfu国际美国惯用M3.5100少于3个少于0.1M5.510,000少于20个少于0.5M6.5100,000少于100个少于2.5*： 依联邦标准209E，1992年9月的定义*： 应取足够体积的空气以检测规定限度的偏移表4 在控制区中的设备、仪器表面的菌落形成单位（cfu）的洁净准则级别每个接触板的cfu *国际美国惯用M3.51003个（包括地板）M5.510,0005个10个（地板）*： 培养皿的接触面积在24 cm2到30 cm2的范围变动，当用棉签取样时，取样区域需大于或等于24 cm2，但不大于30 cm2。表5控制区内人员衣服表面的菌落形成单位（cfu）的洁净准则级别每个接触板的cfu *国际美国惯用手套人员衣服M3.510035M5.510,0001020*：参见表4*注释空气中活的微生物计数用的仪器和方法科学家们通常认为控制区空气中的微生物能影响这些区域内生产的中间体或成品的生物质量。他们也认为用于检测空气中微生物含量的仪器和规程会影响空气中微生物的估算。因此，使用替代方法或仪器时，应确认其检测结果的等价性。将来先进的技术希望能带来改革，它即提供比目前使用的方法更精确更灵敏，也许能够确认检测的微生物的数量变化。当今，在美国医药行业和医疗器械行业中最常用的取样仪器是嵌塞式和离心式取样仪。一些商业上使用的取样仪列出来以供参考。选择合适的取样仪以及对其合理使用是使用者的责任。Slit to Agar Sampler （狭缝-琼脂空气取样器）（STA）： 该种取样机在各类环境控制区的微生物准则在表3已列出。该取样机靠吸附在其上的真空泵供能。空气经过一个标准的缝隙吸入，下面有一个慢慢旋转的盛有培养基的平皿。空气中的微粒足够多的撞击到琼脂的表面上，活的微生物可以生长出来。远距离的吸入空气可以减少层流场的扰乱。Sieve Impactor （撞击过滤器）： 该仪器上有一个能放置装有营养琼脂的培养皿的器皿。其盖子上有一个固定大小的孔。真空泵从盖子上吸入一定量的空气，包括微生物在内的微粒撞击到琼脂培养基上。一些取样器上含有一系列孔径逐渐减小的孔，而这些孔能根据选择不同大小的粒子的进入而决定含有微生物的粒子进入培养基上的进行分布。Centrifugal Sampler （离心式取样机）： 该仪器由一个能推入已知量的气体的推进器或涡轮机组成。然后将气体打到切线方向上安置在弹性塑料上的营养琼脂培养基上。Sterilizable Microbiological Atrium（无菌微生物仪）： 该仪器是单级撞击过滤器的一个变形。该仪器的盖子含有近0.25英寸大小的均匀小孔。仪器的底座能放置一个盛有营养琼脂的培养皿。真空泵控制着气流的进入，有一个多样的控制中心和一个远距离取样采集器。Surface Air System Sampler（表面空气系统取样机）： 仪器上一个带有可放置琼脂接触平板的地方的完整的仪器。紧接平皿后面有一个马达和一个涡轮机推着空气从平皿上方带有孔口的盖子进入到达平板上，越过马达，将空气排走。也有复合型装置可使用。Gelatin Filter Sampler（明胶过滤器取样器）： 该仪器由一个带有终端放置在过滤膜支架上的软管的真空泵组成。过滤器由明胶纤维组成，该纤维能保留空气中的微生物。经过规定的时间曝光后，过滤膜通过无菌操作移动并溶解在合适的稀释剂中，然后在合适的培养基中培养并评估算微生物数量。Settling Plates（沉降平皿）： 这种方法作为一种简便、便宜、定性的估算环境的方法被广泛运用。使用打开的倒有琼脂的培养皿或沉降平皿的是不能用于定量评估严格环境中的微生物污染水平。机械的空气取样机的一个最大限制是所取样的空气体积的限制。控制区的空气微生物水平希望达到每立方米不超过3个cfu。如果要求一个精确的、准确的结果，则需测量几个立方米的空气。通常这是不现实的。为了说明环境中存在的微生物数量没有随着时间的增长而增加，则应延长取样时间来确定取样时间是否是一个限定因素。通常，Slit to agar空气取样器每分钟有80升的取样体积（Surface Air System Sampler的体积要高一些）。如果要测量一立方米的空气，则需15分钟的采集时间。为了取得有代表的环境样品，则采样时间超过15分钟是必要的。尽管有些取样器报道说有高的取样速率，但还要考虑到这会潜在地扰乱洁净室的气流形式，或者产生紊乱而增加可能的污染。 对于离心空气取样器，早期研究表明取样的样本会选择比较大的粒子。因为其固有的选择性能，使用该取样器比使用其它的空气取样器得到更高的粒子数量结果。 当选用离心取样器时，取样器在用于抽取控制区的样本时产生的的气流线性影响必须被考虑到。不论何种取样器被选用，使用的远端探针要求检测其对空气中可存活的微生物计数有无显著的影响。这个影响要么被排除，如果不可能时，则在结果报告中需增加校正因子。定量计数控制区内的表面微生物的方法和设备控制区的另一个微生物环境控制部分是在这一环境中使用的设备、仪器、人员衣着的表面取样。表面取样方法和规程的标准没有空气取样规程的标准那样在制药工业中被广泛提出。为减少对操作的扰乱，表面取样在操作结束后进行。表面取样可以通过使用接触培养皿法或擦拭方法来完成。表面取样通常在产品生产的区域或这些区域附近的地方实施。当规则而平坦的表面取样时，应用装有营养琼脂的培养皿取样，并立刻在合适的温度下培养适当的时间，以用于定量分析所存活的微生物数量。专门的琼脂培养基可用于确定特定的真菌，孢子或其它的微生物的数量。擦拭方法用于不规则表面的取样，特别是仪器、设备。对于规则表面，擦拭法是接触平皿方法的补充。拭子然后被放在合适的稀释剂里，通过取其合适的部分放在特定的营养琼脂培养基中来评估微生物数量。被拭区域规定使用合适尺寸的无菌模板，通常为24 30cm2的范围内。微生物的评估报告为每碟或每拭。用于微生物取样或计数的培养基和稀释剂根据所用的操作规程和设备选用液体或固体的培养基用于控制区的微生物取样或计数。当需使用固体培养基时，常用的是大豆酪蛋白消化琼脂培养基，其它的液体的或固体培养基，列如下表：液体培养基*固体培养基*胰蛋白胨盐水大豆酪蛋白消化琼脂蛋白胨水 营养琼脂缓冲盐水胰蛋白胨葡萄糖浸出物琼脂缓冲明胶卵磷脂琼脂浓缩缓冲明胶心脑浸液琼脂心脑浸液接触平皿琼脂大豆-酪蛋白培养基*：液体和固体培养基用已验证过得方法灭菌。 这些培养基可以从市场上买到脱水形式的。也有直接使用的形式。当消毒剂和抗生素在控制区使用时，则必须使用带有适当抑制剂的培养基。 可根据目的选择表中所列培养基。环境控制程序中微生物的分离与鉴别 环境控制程序包括适当的鉴别从样本中获得的微生物。常见控制区微生物种类的常识有助于监测场所内的的微生物种类；然后评估清洁和卫生程序、方法和试剂，和回收方法的有效性。从鉴别程序中获得的信息也能有助于污染源的调查研究，特别是行动水平超标时。 关键区域或临界区域的微生物鉴别必须先于非关键区域。鉴别方法需被验证，备用的工具必须具有与它们的目的相适应的性能。（参见设计和执行环境控制程序的关键因素）。在洁净室或其它控制区里无菌分装药品的微生物状态的操作评估 通过合适的环境监测程序来监测控制区域。为保证获得最小的微生物限量，用培养基填充的方法来获得评估控制区域的微生物水平的信息。可接受的培养基填充法显示可以即时的在那一点的生产线上成功的模拟生产。然而其它因素也很重要，例如特定的装备设施，环境监控和人员培训。 当无菌操作程序已设定和安装后，需通过至少三种成功的连续的培养基填充操作来确认该程序的微生物状态。用生长培养基代替产品去检测微生物的生长。在发使用培养基填充程序时需考虑以下几点：倒培养基的程序，培养基的选择，培养基的用量，培养时间和温度，每个培养皿的检查，记录，结果的诠释和可能的修正行为。 自从培养基填充法被设计来模拟一个特定产品的无菌操作程序，在培养基填充操作期间，产品常规生产时的环境条件是有影响的。这包括组成产品常规生产的所有人员和所有的操作步骤和材料。在培养基填充操作期间，应计划排除在真实生产中发生的各种预先记录的干扰。（例如：改变填充针，选定阻塞成分等等）。 另外，为了增加一个安全边缘，可采用一些可能的条件组合。例如包括惯常的开始和停止秩序，非预期的操作系统维修，过滤器的更换等等。无菌操作的验证不需要对每个产品都做，但需对每条生产线做。既然容器的几何形状（尺寸和容器的开口）和生产线的速度是在无菌生产操作线中的可变的因素，那么这些因素的有理组合，甚至达到极至，可在生产线的验证中使用。验证所用的产品需被记录下来。 1987年FDA的通过无菌操作生产无菌药品生产方面的指导方针指出培养基被用于所有生产过程（如生产线/生产/容器）。该指导方针不仅考虑培养基的验证，还考虑周期性的再评估和再验证。培养基操作程序也将能使用于扩大的产品生产。这可以在生产结束时使用培养基来完成。 通常，象大豆酪蛋白肉汤培养基这样的通用的富营养培养基能被采用。该培养基已被证明对一些指示菌种（参见无菌检验71）在每单元低于100cfu的情况下具有促生长能力。从无菌操作的控制区内分离出的微生物也可被使用。紧接在培养基的无菌操作后的是培养基在22.52.5或32.52.5下培养。所有培养物将被培养至少14天。如果两种温度被用于已采样的培养基培养，则在每种温度下培养基必须被培养至少7天。培养后，培养基必须检查其生长情况。培养基上的分离物需被鉴别出属，甚至种类，可用以调查研究污染源。 在培养基操作中的关键问题是证明无菌操作的培养基数量，每个培养基的所用量，结果的说明，矫正行为的实施。在一个设施的最初验证或启动期间需使用三次培养基来证明无菌生产线的连贯性。用以证明污染率的每个单元最小数值不超过0.1%，其每次使用成功的培养基的个数最少为3,000。必须强调的是，一些美国或其它国家的公司在每次培养基的使用个数超过了3,000。用于准备小型临床试验的工厂设备可以用较少的培养基。一些国际文件 （例，ISO和EU-GMP） 也指出了3，000个培养基中的零个数在95%的置信水平上。为证明操作程序中可观察到的污染物的统计的有效性，要求重复使用培养基运作。PDA技术专题研究数字173“当前无菌生产实践的一个调查概况”，显示许多厂家相信它们的无菌操作能使污染率低于0.1%。既然洁净室最关键的污染源是人员，在培养基使用期间的与生产行为相关联的污染事件鼓励记录下来。在无菌检测中广泛是用的分离技术已证明人员的清除可以减少无菌操作中的污染。先进的无菌操作技术的概述因为在无菌操作中人员的参与和涉入与潜在的产品污染之间的强烈的相互关系，已经设计和实施了人员从严格区域中分离出来的生产系统。这些方法能减少可能的污染（包括设备自动化、屏障、隔离体系）。这些先进的无菌操作方法已经在实施中。当人员被完全排除在严格区域外，建立在微粒和微生物监测要求上的洁净室的分级要求可以大大减少。 下面是当前为减少无菌操作污染的一些体系的释义。 Barriers（屏障）： 在无菌操作体系中，屏障是将操作者和无菌区之间的接触限制的一种装置。这套系统用于医院的药房、实验室和动物饲养场以及无菌分装中。屏障可能未被消毒，也不总是有转换通道，它能允许将物料在不暴露到周围环境中的情况下转入或转出控制区。围绕在严格生产区周围的从塑料罩到坚硬封熔的屏障，这在现代无菌分装设备可见到。屏障也包括手套、半无菌衣和快速传送窗。 吹模/分装/密封系统： 该系统将包材的吹模和产品的分装和密封组合在一个设备里，从微生物观点来看，无菌产品的分装和密封是在最小限度的暴露在外界环境下的连续无菌操作。该系统已经存在了有30年，且已经被证明污染率低于0.1%。当结合培养基操作数据的概括和分析，其污染率可期达到0.001%。 Isolator（隔离）： 该技术的应用有二重目的，一个是防止产品受环境的污染，这一环境包括在包装和密封期间的人员。另外一个则是防止人员受到所生产出的有毒有害产品的毒害。隔离技术是建立在前面的无菌物品（包材/产品/密封）进入到无菌环境的原则上的。这些物件在整个生产操作中保持无菌，没有人员或非无菌物品的进入。隔离屏障是一个绝对的屏障，不允许已受保护和未受保护的环境的互换。隔离可以是防止外界污染进入的物理性密封，也可以是持续超压的有效密封。人员需戴手套或穿半无菌服或全无菌服操作生产。空气通过HEPA或UPLA过滤器进入隔离区，废气经过HEPA过滤器离开。过乙酸和过氧代氢蒸气通常作为隔离单元内部环境的表面灭菌。隔离间内部的灭菌通常被证实为在10-6的无菌水平。设备、仪器、原料通过一些不同的程序进入隔离间：使用双层高压灭菌器；通过连续的无菌通道的传送带进入；通过在隔离区的对接系统的转换装置体系。严密监测隔离装置的完整性、准确性和维持性是必要的。 这些无菌操作新技术的控制区要求依赖于所用的技术形式：用于限制与生产有关的人员的吹模/分装/密封系统设备可以放在控制区，特别是在生产中一些人员的涉入是可能的。屏障体系要求一些形式的控制区。因为不同形式的屏障体系，其周围的环境也有不同的要求。该系统周围的区域的设计和操作必须以合理的方式建造。除这些策略外，该系统生产无菌产品的能力必须被确认是符合预先建立的标准。在无菌隔离装置里，空气是通过HEPA或更好的过滤器进入隔离区内的，它们内部通常确保10-6水平的无菌。因此，隔离装置里为无菌空气，不能与周围环境的空气互换，也免除了人员的操作。当隔离装置在控制区里，若手套或无菌服上有小孔漏气，则潜在的产品污染就可以减少。用于无菌操作的这些先进体系的环境微生物监测的范围依赖于所用系统的类型。制造商应该平衡环境监测取样体系的频率，这种体系因人为介入会影响监测带来的积极成效。既然屏障被设计来减少人为的介入，则远距离取样体系必须代替人员的介入。通常，一旦屏障体系的有效性被证实，则无菌操作区的微生物监测的取样频率可以减少，同样，无菌操作体系的洁净级别的取样频率也可以减少。无菌隔离装置系统要求相对较少的微生物监测。连续的粒子监测可确保空气过滤系统在隔离装置内正常工作。本章提到的定量微生物空气取样的方法未能灵敏到可测定隔离装置内的环境。经验显示，在正常操作下，手套的洞眼或破裂是主要的潜在的微生物污染，因此，经常对手套进行完整性和表层检验是必要的。隔离装置在控制区内，表层监测的频率也可减少。专业词汇空气微粒数（也指微粒总数）：检测到的是0.5um或更大的粒子。当规定了微粒数时，它指每立方米或（每立方英尺）的空气中允许的最大微粒数。空气中存活的微粒数（也即空气中有氧微生物总数）当规定了微生物数时，它指与建立在空气中微粒数基础上的洁净区的洁净级别联系在一起的每立方米（或每立方英寸）的空气中最大菌落形成单位数（cfu）。无菌操作： 涉及到药品和医疗产品及其包装材料（容器/密封或医药设备的包装材料）的单独灭菌和在严格微生物控制环境下的药品包装和密封的一种操作形式。空气取样器： 用于在特定时间内抽取控制区内一定量的空气以测定其微粒数或微生物数的设备。空气转换：单位时间内（分钟、小时等等）控制区的空气转换的频率。空气可以部分或全部被循环。Action levels（行动水平）： 指控制区里的微生物水平，特别是指在标准操作程序中的，当超出了该水平将引起调查研究和建立在调查研究上的纠正措施。Alert levels（警戒水平）： 微生物水平，特别是指在标准操作程序中的，当超过该水平就应当进行调查研究，以确保操作一直处于可控状态内。它对给定的设备有特定的规定，且它是在环境监控程序下的一个基线。警戒水平可以依靠在监控程序里做的趋势分析来修正。警戒水平低于行动水平。微生物限量： 在一个项目里发现的全部的微生物数。洁净室： 一间里面的空气微粒浓度受到控制以符合特定洁净级别的房间。此外，在这一环境中的微生物含量受到监控，每种洁净级别要求空气，表面，人员服装所要求的微生物水平是特定的。洁净区：其空气中的微粒数和微生物数受到监控且符合洁净级别的特定空间。受控制的环境： 无菌操作系统中的任何区域，其空气微粒数和微生物水平控制在特定水平。在这一环境中有适当的活动。控制区的启用： 被工程行业和质量控制部门证明，控制区按照预期的洁净级别建造，能够达到正常操作要求，且能够进行无菌操作。在正常情况或低于正常条件下也能进行无菌操作，启用包括培养基的使用运行和环境监测程序的结果。矫正行为： 当已确定的环境超标时引发的按标准操作程序进行的操作。环境隔离物： 从环境监控程序中分离出的微生物。环境监测程序： 是一种需记录的程序。通过标准操作程序的实施，详细的描述了监测控制区（空气、表面、人员）