API training 2008April.ppt

API4000OperatorTraining 什么是液质联用 LC MS LC 液湘色谱仪一种能够把液体混合物中的不同组分根据在色谱柱中保留时间不同进行分离 检测及收集的仪器MS MassSpectrometer质谱仪一种能够把分子转化生成带电离子 并在气态中根据质荷比 m z m质量z分子所带电荷数 的不同把离子进行分离并进行检测的仪器 元素质量 在自然界存在的同位素质量的加权平均值 单位 道尔顿人为定义 碳12为12Da 道尔顿 12C 12 0000Da碳元素 碳元素有二个同位素 12C丰度98 91 13C丰度1 09 碳元素质量 12 0000 0 9891 13 0034 011 12 011Da 元素质量 Signal 质荷比 MW 分子量 N N N 电荷数 用液相或注射泵将样品注入质谱 1 样品注入 系统组成 样品注入方式 连续注射样品放在注射器中或静态的针内用注射泵或电场引力 样品流连续并恒定地流入离子源喷口通常用于安装时调谐 质量校正和标准样品质谱方法的优化流动注射分析用手动进样器和液相泵 注入样品 由流动相带入离子源喷口通常安装5ul的定量环液质联用用液相的泵 流速从nL min到mL min样品可能是纯品或者是混合物流动相带着样品经过色谱柱分离后进入质谱的离子源 TurboVtm离子源 API3200 API4000 和API5000 TurboVTM离子源 TurboV离子探头 在使用时调节喷雾针出套管1 3mm 电喷雾 EI 离子源工作原理 IonSpraytm 电喷雾 TurboIonSpray TIS工作原理同EI 不同的是TIS有辅助加热气 GS2 可加快去溶剂的速度可用于比较大的液体流量 APCI三步离子化的过程 电晕针放电使离子源内的N2或O2带电N2或O2转移电荷到气态溶剂分子上带电的气态溶剂分子转移电荷到气态样品上 大气压化学电离源 APCI 又叫 加热雾化源HeatedNebulizer TurboVTM离子源的APCI API3200 4000 和5000的离子源体是TIS和APCI共用的 TIS和APCI的互换不用工具 只用手就可以完成 放电针位置调节钮 单手操作即可放电针一直在离子源体内 API3200 API4000仪器的接口 API3200 API4000的Orifice和Skimmer Orifice小孔板背面 Orifice小孔板正面 Skimmer API4000的离子传输通道 API4000的离子通道电压的作用 四极杆的工作原理 不稳定的离子 稳定的离子 离子源 检测器 直流和交流控制电信号 在四极杆上加有三种电压RF 固定频率的交流电 1MHzonAPI2000 816KhzonAPI4000 1 2288MhzonAPI5000 FilteringDC FDC 在每组杆之间的电压差 用于选择离子决定分辨率 RodOffsetVoltage ROV 低的直流电定义了离子轴向飞行的动力 RFOnly 的意义 没有FDC 只有RF RodOffset只是传输离子 没有分辨率 四极杆的工作原理 180 phaseshift电信号180度相移 ions离子簇 1 离子簇被吸引到 B 极 2 RF电压极性反转 所有的离子簇被吸引到 A 极 3 RF电压极性反转 所有的离子簇被吸引到 B 极 4 RF电压极性反转 所有的离子簇被吸引到 A 极 RF RF 180 phaseshift电信号180度相移 EndView后视图 四极杆工作原理之RFONLY RFonly Arods Brodsare180outofphase只加交流信号 A杆与B杆信号强度相同 相位差180度 Q0 Q2 ST ST2 ST3一直工作于RFonly 选用Q1单级工作时Q3工作于RFonly 选用Q3单级工作时Q1工作于RFonly 离子簇在离子通道的运动模式A极和B极上的RF交流电压及ROV直流偏置电压使离子簇以螺旋运动的方式前进 RFonly Arods Brodsare180outofphase只加交流信号 A杆与B杆上加的电压强度相同 相位差180度 四极杆的工作原理RF DC 四极杆原理之FDC 四极杆工作原理之ROV IE 离子能量 IE 影响分辨率和峰形降低IE 分辨率变好 灵敏度降低提高IE 分辨率变差 灵敏度提高Q1离子能量 n Q0 RO1 n 电荷数Q1IE1 Q0 RO1 0 5 2eVQ1离子能量 n RO2 RO3 n 电荷数Q3IE3 RO2 RO3 1 6eV Q1的离子能量 IE1 IE 0 5V分辨率好而灵敏度差 IE 2 0V分辨率差而灵敏度好 分辨率的定义 FWHH 半峰高处的峰宽AB分辨率的定义Unit 0 7 0 1amuFWHH High 0 5 0 1amuFWHH Low 1 1 0 1amuFWHH Open 3 5amu在调节完分辨率后需要做质量校正 四极杆原理之灵敏度和分辨率 灵敏度和分辨率是相互影响 相互制约的 分辨率差则灵敏度高分辨率好则灵敏度低 Low低分辩 半峰宽 1 5 2amu Unit单位分辩 半峰宽 0 7amu High高分辩 半峰宽 0 5amu 离子检测器 ChannelElectronMultiplier 检测器电压的调节 如果检测器电压增加100V 信号至少增加20 30 则需要增加检测器电压 右图情况下 用2500v API4000的扫描方式 Q1单级扫描模式 Q1质量扫描 Q1Scan Q1作为单级质量分析器Q1scan主要用于确定母离子的m z 质荷比 单个宽范围质量扫描多个小范围质量扫描Q1多离子信号监测 Q1MultipleIon 对感兴趣的多个离子进行信号监测用于单级定量在两种Q1工作模式下 Q3处于RF only模式Q3只传输所有的Q1出来的离子到检测器 Q3单级扫描模式 Q3质量扫描 Q3Scan Q3可用来做单级质量分析器单个宽范围质量扫描多个小范围质量扫描Q3scan不用于确定母离子的m z 质荷比 仅用于做Q3质量校准Q3多离子信号监测 Q3MultipleIon 对感兴趣的多个离子进行信号监测在两种Q3工作模式下 Q1处于RF only模式Q1只传输所有的离子到Q2 Q3 Q1Scan Q3Scan Q1质量分析器Q2RFOnlyQ3RFOnly Q1和Q3Scan 质谱图 Q1RFOnlyQ2RFOnlyQ3质量分析器 质谱图 强度 强度 质荷比amu 质荷比amu Q1质量分析器Q2RFOnlyQ3RFOnly Q1MI Q3MI Q1和Q3MultipleIonMode 信号图 信号图 Q1RFOnlyQ2RFOnlyQ3质量分析器 强度 强度 时间 时间 MS MS二级质谱联用的扫描方式 MS MS二级质谱联用的扫描方式ProductIon产物离子扫描分析母离子的碎片离子信息PrecursorIon母离子扫描分析产生特定子离子的母离子的信息NeutralLoss中性丢失扫描分析产生特定中性丢失碎片的母离子的信息MRM MultipleReactionMonitoring 多反应离子监测对多对母离子 子离子信号进行监测用于定量 具有高灵敏度和高选择性在所有的MS MS模式中 Q1Q3处于质量分析器模式Q3能够扫描 或者固定在某几个质量数Q2产生的离子进入Q3 产物离子扫描ProductIonScan CADgas 923 Q1选定母离子Q2与气体碰撞产生碎片Q3扫描子离子 226 497 502 质荷比amu 502 497 226 母离子 与气体碰撞产生碎片 质谱图 强度 200 800 母离子扫描PrecursorIonScan