企业培训_沙门氏菌培训资料

沙门菌属 Salmonella 简介沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病之一 其病原沙门氏菌属肠道细菌科 包括引起食物中毒 导致胃肠炎 伤寒和副伤寒的细菌 除可感染人外 还可感染很多动物包括哺乳类 鸟 爬行类 鱼 两栖类及昆虫 特性沙门氏菌革兰氏阴性 两端钝圆的短杆菌 比大肠杆菌细 0 7 1 5 m 2 5 m 散在 无荚膜和芽孢 都具有周身鞭毛 除鸡白痢沙门氏菌 鸡伤寒沙门氏菌外 能运动 大多数具有菌毛 能吸附于宿主细胞表面或凝集豚鼠红细胞 培养特性A需氧及兼性厌氧菌 B在普通琼脂培养基上生长良好 培养24h后 形成中等大小 圆形 表面光滑 无色半透明 边缘整齐的菌落 其菌落特征亦与大肠杆菌相似 无粪臭味 C鉴别培养基 麦康凯 SS 伊红美蓝 一般无色菌落 D三糖铁琼脂斜面 斜面为红色 底部变黑并产气 生化特性1 发酵葡萄糖 麦芽糖 甘露醇和山梨醇产气 2 不发酵乳糖 蔗糖和侧金盏花醇 3 不产吲哚 V P反应阴性 4 不水解尿素和对苯丙氨酸不脱氨 伤寒沙门氏菌 鸡伤寒沙门氏菌及一部分鸡白痢沙门氏菌发酵糖不产气 大多数鸡白痢沙门氏菌不发酵麦芽糖 血清学特性沙门氏菌具有复杂的抗原结构 一般沙门氏菌具有菌体 O 抗原 鞭毛 H 抗原和表面抗原 Vi荚膜或包膜抗原 三种抗原 传播途径肉的污染肉及其制品的沙门氏菌检出率美国为20 25 英国为9 9 日本检查进口家禽的污染率为10 3 国内肉类沙门氏菌检出率在1 1 39 5 蛋的污染蛋及其制品沙门氏菌检出率为3 9 43 7 由于吃蛋引起鼠伤寒病的病例报告逐渐有增加的趋势 环境污染食品在加工 运输 出售过程中往往被沙门氏菌污染 沙门氏菌在粪便 土壤 食品 水中可生存5个月至2年之久 传播问题恢复期患者和无症状的带菌者也是常见的传染源 沙门氏菌检测标准 GB4789 4 2010 增菌和选择性培养 可疑菌落判定 3 将接种TSI完毕的接种针不要灭菌 直接在营养琼脂平板上划线 根据上表中可理解为只有在斜面和底层产碱 不产H2S 不产气的情况下可不进行生化鉴定 直接判定为非沙门氏菌 其余任何情况均需进行生化鉴定 TSI鉴定 三糖铁生化试验 生化试验 1 准备一只2ml无菌生理盐水试管 酒精灯 接种环 生化鉴定套装 2 从营养琼脂平板上挑取可疑菌落 接种至生理盐水中 制成0 5个麦氏浊度 3 依次在各个安瓿 bu 瓶中滴加菌悬液3滴 4 在赖氨酸脱羧酶肉汤及对照和氰化钾及对照中个滴加无菌石蜡覆盖 5 在36 培养18 24h 菌悬液制备 OR O 5个麦氏浊度的菌悬液 依次在每个安瓿瓶中滴加菌悬液2 3滴 第一步 第二步 第三步 生化试验准备 生化试验 色氨酸吲哚试验阴性 符合 赖氨酸阳性对照阴性 0NPG阴性 尿素酶阴性 KCN及对照阴性 甘露醇山梨醇阳性 符合 符合 符合 符合 符合 血清学鉴定 沙门氏菌的分类 沙门氏菌属分为两个种 肠道沙门氏菌 种 肠道亚种 萨拉姆亚种 亚利桑那亚种 双相亚利桑那沙门氏菌 豪顿沙门氏菌及因迪卡沙门氏菌 6个亚种 邦戈尔沙门氏菌 种 沙门氏菌的分类及命名 沙门氏菌的分类 命名 沙门氏菌 抗原 O H Vi抗原 vi抗原因与毒力有关而命名为vi抗原 由聚 n 乙酰 d 半乳糖胺糖醛酸组成 不稳定 经60 加热 石碳酸处理或人工传代培养易破坏或丢失 Vi抗原存在于细菌表面 可阻止o抗原与其相应抗体的反应 vi抗原的抗原性弱 当体内菌存在时可产生一定量抗体 细菌被清除后 抗体也随之消失 故测定vi抗体有助于对伤寒带菌者的检出 新从患者标本中分离出的伤寒杆菌 丙型副伤寒杆菌等有此抗原 O抗原为脂多糖 性质稳定 比较耐热 100 不被破坏 也不易被酒精破坏 O抗原以阿拉伯数字表示 从1排到67 但删去了9个抗原 现在有58个抗原 凡含有群特异性共同抗原的菌型归类为一个O群 以主要抗原来表示 某些次要抗原可以出现在多个群中 H抗原H抗原存在于鞭毛之中 为蛋白质 由肽链中氨基酸的排列顺序及空间构型决定其特异性 不耐热 经加热和用乙醇及碱处理易变性 H抗原常有两相的变异 第一相为特异相 用小写英文字母表示 如 a b I e h等 第二相为非特异相 用阿拉伯数字表示 如 1 2 5等 但也有少数菌含有第一相中的抗原e n x等成分 A F群对应的O价抗原 沙门氏菌抗原表中符号意义 指溶原状态下O因子可以并存 和平共处 指O因子不相容 只能有一种 指O或H因子有存在或不存在的可能性 O10 O15 O15 O34价抗原不相容只存在一种 都柏林沙门氏菌存在或不存在表面Vi抗原 西翰普顿沙门氏菌 都柏林沙门氏菌属于单相菌 H抗原只存在第一项 H抗原第二项H1和H2价抗原存在或不存在 O1价抗原与其他抗原和平共处 O5 O27价抗原存在或不存在 沙门氏菌菌型的表示方法 血清型以数字和字母表示 例如 查考夫曼 怀特沙门氏菌属抗原表 鼠伤寒沙门氏菌 O抗 1 4 5 12 第 相H抗原 i 第 相H抗原 1 2 它的血清型应表示为 鼠伤寒沙门氏菌 1 4 5 12 i 1 2 沙门氏菌的判定原则 采用血清学的方法 按照考夫曼 怀特沙门氏菌属抗原表解判定菌型 考夫曼 怀特沙门氏菌属抗原表 内的O抗原可能存在或不存在 内的H抗原可能是罕见的 正常情况下一般不存在 沙门氏菌的血清鉴定的方法 用O H和Vi因子血清与待检的菌株作玻片凝聚试验 1 先用O因子血清确定菌株所属的O群及O抗原的各种成分 2 再用H因子血清检查其第1相和第2相的H抗原以确定血清型 3 必要时还要用Vi血清检查 目前有3种 1 先用A F多价O血清检查 确定菌株是否在A F六个O群的范围内 2 再用代表六个O群的O因子血清检查 即O2 A O4 B O7 C1 O8 C2 O9 D O3 10 E O11 F 3 确定O群之后 分别用HA a b c d i z10 z29 HB HC HD四种多价H血清检查 4 用3 所确定的多价H血清所包括的所有H因子血清逐一检查定为第1相或第2相H抗原 5 检出第1相H抗原而未检出第2相H抗原 或检出第2相H抗原而未检出第1相H抗原的 要用位相变异的方法再检查其另一个相 单相菌不必作位相变异检查 6 综合O和H因子血清以及Vi因子血清的检查结果 按照考夫曼 怀特沙门氏菌属抗原表解判定沙门氏菌的菌型 沙门氏菌的血清型鉴定步骤 位相变异的解释 将一个双相沙门氏菌的菌株在琼脂平板上划线分离 所得的菌落中 有的有第1相H抗原 有的则有第2相H抗原 若任意挑取一个菌落在培养基上多次传代 其后代又可出现部分是第1相而另一部分是第2相的菌落 这种两个相的H抗原可以交相产生的现象称为位相变异 双相菌初次分离时 单个菌落的纯培养往往只有一个相H抗原 鉴别时常只能检出一个相 而测不出另一相 此时 可用已知相血清诱导的位相变异试验来获得未知的另一个相H抗原 位相变异试验的方法 简易平板法1 配制0 7 0 8 的半固体琼脂培养基 2 在平板内滴上一滴已知的第1相或第2相血清因子 并作好标记 3 然后倾注平板并烘干表面水分 在标记部位的中间点种